【农业行业标准(NY)】 饲料中氢化可的松的测定 高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T914—2004
饲料中氢化可的松的测定
高效液相色谱法
Determination of Hydrocortisone in Feeds-High-performance Liquid Dhromatography2005-01-04发布
2005-02-01实施
中华人民共和国农业部
本标准由中华人民共和国农业部提出前言
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。NY/T914—2004
本标准主要起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（成都）、成都华西希望集团。本标准起草人：李云、林顺全、余林、冯娅1范围
饲料中氢化可的松的测定高效液相色谱法本标准规定了用高效液相色谱法(HPLC)检测饲料中氧化可的松含量的方法VY/T914—2004
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中氛化可的松地测定，本方法最低检测限为0.05mg/kg
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注国期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于不标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些义件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法
3方法原理
用甲醇提取试样中的氧化可的松，以乙睛、水作为流动相，用高效液相色谱一一紫外检测法分离测定。
4试剂和溶液
除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682一级水的规定。4.1乙睛
色谱纯。
4.2甲醇
色谱纯。
4.3氢化可的松标准液
4.3.1氢化可的松标准贮备液
准确称取氢化可的松标准品（纯度98%）0.1000g，置于100mL容量瓶中，用中醇溶解，定容，其浓度为1000ug/ml的储备液，置于4℃冰箱中保存4.3.2氢化可的松标准工作液
分别准确吸取一定量的标准贮备液（4.3.1)，稀释10倍，用中醇稀释、定睿，配制成浓度为2.5ug/ml.5.0μg/mL、7.5mg/ml.10.0μg/mL、12.5μg/mL17.5μg/mL的标准T作液5仪器和设备
5.1实验室常用仪器、设备。
5.2高效液相色谱仪
配紫外检测器。
5.3电子天平
感量0.0001g
5.4离心机
NY/T914—2004
3000r/mim
5.5振荡器
5.6玻璃具塞三角瓶
5.7微量进样器
5.8微孔滤膜
6试样制备
按GB/T14699.1抽样，取有代表性的样品，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过40日孔筛，混勾装人磨口瓶中备用
7测定步骤
7.1提取
按不向的饲料产品，准确称取配合饲料浓缩饲料2g~10g，预混料0.5g4g（准确至0.0002g）样品，置于250ml玻璃具塞二角瓶中，加人40mL甲醇，往复装荡30min，静止10min，过滤，冉向饲料中分别加入30ml甲醇，重复提取2次，合并3次提取液，用中醇定容至100mL。取10ml置离心管中.3000r/min离心5min，取上清液用0.45um微孔有机滤膜过滤作为试样制备液，供高效液相色谱分析。
7.2测定
7.2.1IIPLC色谱条件
色谱柱：Cs柱，长240mm、内径4.6mm（i.d.），粒径5.0um或相当者柱温：室温
流动相：乙-水=25+75（V+V)。
流速：1.0mL/min
波长：254mm
进样体积：20pLs
7.2.2HPLC定量测定
按仪器说明书操作，取适量试样制备液和相应浓度的标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。
8确证
8.1对检出氢化可的松的样品，应用重叠色谱分析来确证8.2重叠色谱法
以试样提取液中加人适虽的氢化可的松标准工作液（4.3.2），加人的量应与提取液中的氢化可的松的量相当
依次注入样品的提取液，氢化可的松标准工作液（4.3.2）和添加了氢化可的松标准工作液（4.3.2）的样品提取液。如果添加氢化可的松标准工作液（4.3.2)的样品提瑕液样品所产生峰的半峰宽变化不大于10%，且峰高或峰面积发生了成比例的变化，则可确证原氢化可的松峰就是氢化可的松的9结果计算与表述
9.1计算公式bzxz.net
试样中氨氢化可的松的含量按式（1)计算：式中：
............+
X一一试样中氢化可的松的含量，单位为毫克每T克（mg/kg）；1IPILC试样色谱峰对应的氢化可的松的质量，单位为微克（ug)；mr
一试样质量，单位为克（g)：
n稀释倍数
2测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位9.2
重复性
两个平行测定的相对偏差不大于10%NY/T914—2004
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