【国家标准(GB)】 海洋监测规范 第6部分:生物体分析

ICS_07.060
中华人民共和国国家标准　
GB17378.6—2007
代替GB17378.6—1998
海洋监测规范
第6 部分：生物体分析
The specification for marine monitoring-Part 6 : Organism analysis
2007-10-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会　
2008-05-01实施
中华人民共和
国家标准
海洋监测规范
第6部分：生物体分析
GB17378.6—2007
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址www.spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880×12301/16
字数148千字
印张5
2008年3月第一次印刷
2008年3月第一版
书号：155066·1-30647
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举报电话：(010)68533533
规范性引用文件
术语和定义
一般规定
5.1原子荧光法
5.2冷原子吸收光度法
6.1无火焰原子吸收分光光度法（连续测定铜、铅和镉）6.2阳极溶出伏安法
6.3火焰原子吸收分光光度法
7.1无火焰原子吸收分光光度法
7.2阳极溶出伏安法……·
7.3火焰原子吸收分光光度法·
无火焰原子吸收分光光度法·
阳极溶出伏安法
8.3火焰原子吸收分光光度法·
火焰原子吸收分光光度法··
阳极溶出伏安法
无火焰原子吸收分光光度法
二苯碳酰二肼分光光度法
原子荧光法
砷钼酸-结晶紫分光光度法·
氢化物原子吸收分光光度法
催化极谱法
荧光分光光度法
二氨基联苯胺四盐酸盐分光光度法催化极谱法
13石油烃-—荧光分光光度法
666、DDT
多氯联苯
气相色谱法
气相色谱法
GB17378.6—2007
GB 17378.6-—2007
16狄氏剂
气相色谱法
附录A（规范性附录)记录表
附录B（资料性附录)方法检出限-—毛细管气相色谱测定法
附录C（资料性附录)有机氯农药-（资料性附录)多氯联苯—毛细管气相色谱测定法附录D
冷原子吸收测汞装置·
层析柱
从分析样中抽取检查样的比例
平行双样相对偏差表
有机氯农药标准溶液各组分含量一览表表A.1
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
生物样品
分析标准（工作)曲线数据记录（原子荧光法）分析记录（原子荧光法）
分析标准(工作)曲线数据记录(
分析记录（
分光光度法）
分光光度法）
分析标准(工作)曲线数据记录(无火焰原子吸收分光光度法）分析记录（无火焰原子吸收分光光度法）分析记录（阳极溶出伏安法）
分析标准（工作）曲线数据记录（火焰原子吸收分光光度法）分析记录（火焰原子吸收分光光度法）标准(工作)曲线数据记录(催化极谱法)分析记录（催化极谱法）
分析标准（工作）曲线数据记录（荧光分光光度法）.分析记录（荧光分光光度法）
生物样品666、DDT、狄氏剂分析记录（气相色谱法）生物样品PCB分析记录（气相色谱法）表A.16
海洋监测生物体分析结果报表
测定方法检出限
海洋生物样品中有机氯农药分析记录表海洋生物样品中多氯联苯分析记录表49
本部分的全部技术内容为强制性。前言
GB17378《海洋监测规范》分为七个部分：一第1部分：总则；
第2部分：数据处理与分析质量控制；第3部分：样品采集、贮存与运输；第4部分：海水分析；
第5部分：沉积物分析；
第6部分：生物体分析；
第7部分：近海污染生态调查和生物监测，GB17378.6—2007
本部分为GB17378的第6部分，代替GB17378.6一1998《海洋监测规范第6部分：生物体分析》。
本部分与GB17378.6—1998相比主要变化如下：测定项目、方法及检出限调整为“资料性附录”（1998年版的第5章；本版的附录B)；增加了总汞的“原子荧光测定法”（见5.1）；取消了总汞的“双硫分光光度法”（1998年版的6.2）；增加了砷的“原子荧光测定法”（见11.1）；修改了铜、铅和辐的无火焰原子吸收分光光度测定法，调整为“铜、铅和镉的连续测定法”（1998年版的7.1、8.1、9.1；本版的6.1、7.1、8.1)；取消了铜的“二乙基二硫代氨基甲酸钠分光光度法\（1998年版的7.4)；-取消了铅的\双硫分光光度法”（1998年版的8.3）；取消了镉的“双硫踪分光光度法”（1998年版的9.3)；取消了锌的“双硫踪分光光度法”（1998年版的10.3）；修改了石油烃的荧光分光光度法”（1998年版的第14章；本版的第13章）；修改完善了各测试方法的记录表格并调整为\规范性附录”（见附录A）；增加了有机氯农药的“毛细管气相色谱法”（见附录C)；增加了多氯联苯的“毛细管气相色谱法”（见附录D)。本部分的附录A为规范性附录，附录B、附录C和附录D为资料性附录。本部分由国家海洋局提出。
本部分由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口。本部分起草单位：国家海洋环境监测中心。本部分主要起草人：马永安、徐恒振、于涛、贺广凯、尚龙生、赵云英、孙茜、韩庚辰、关道明、王健国、许昆灿、张春明、陈维岳、洪君超、陈邦龙。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-GB17378.6—1998。
海洋监测规范第6部分：生物体分析GB17378.6—2007
GB17378的本部分规定了贻贝、虾及鱼等海洋生物体中有害物质残留量的测定方法，并对样品采集、运输、贮存、预处理和测定结果的计算等提出技术要求。本部分适用于大洋、近海和沿海水域的海洋生物污染调查与监测。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB17378的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB17378.3海洋监测规范第3部分：样品采集、贮存与运输GB17378.4海洋监测规范第4部分：海水分析GB17378.5海洋监测规范第5部分：沉积物分析3术语和定义
下列术语和定义适用于GB17378的本部分。3.1
evaporationtodryness
蒸至近干
溶剂蒸发至小体积（0.2mL～0.3mL），留有残渣呈湿润状。3.2
标线standard line
计量容器体积的刻度线。
[GB17378.5—2007，定义3.1]
4一般规定
4.1样品的采集与制备
4.1.1采样种类
贝类、虾和鱼类。贝类一般采集菲律宾蛤仔、文蛤、四角蛤蜊、紫贻贝、翡翠贻贝、毛蚶、缢蜂、僧帽牡蛎等。
4.1.2试剂
4.1.2.1去离子水或等效蒸馏水，其痕量金属含量应低于分析方法的检出限，或用未受沾污的海水。4.1.2.2合成洗涤剂。
4.1.3仪器和设备
仪器和设备如下：
塑料冷冻箱：配有冰袋。用于贻贝贮存和运输时，底部应具有栅板，以免样品漫入水中；一冰箱；
低温冰箱；
塑料板和尺子：用于长度测量；GB17378.6-2007
塑料刀；
玻璃或陶瓷碟：制备样品用；
镊子：塑料制品或其他合适材料的制品；高密度聚乙烯袋和塑料容器：供速冻保存样品用，装样前，应用合成洗涤剂清洗，并用蒸馏水洗净；
分析天平：感量0.1mg；
塑料洗瓶：
刮刀：供采集样品用；
塑料桶：容量20L～50L；
一大号金属刀：无锈斑，供切取鱼组织用；-匀浆器：不锈钢或其他适宜材料的制品；称量瓶：容量50mL；
电热烘箱；
干燥箱；
一冷冻干燥设备。
4.1.4采样与运输
4.1.4.1准备工作
用合成洗涤剂（见4.1.2.2)清洗冷冻箱、高密度聚乙烯袋、塑料板及尺、大号金属刀、刮刀，再用蒸馏水或海水（见4.1.2.1)漂洗干净。4.1.4.2始贝样品的采集
用清洁刮刀从其附着物上采集贻贝样。选取足够数量的完好贻贝存于冷冻箱中。若需长途运输（炎热天超过2h），应把贻贝样品盛于塑料桶中，将现场采集的清洁海水淋洒在贻贝上，样品保持润湿状但不能浸人水中。若样品处理须在采样24h后进行，可将贻贝样存于高密度塑料袋中，压出袋内空气，将袋口打结或热封，将此袋和样品标签一起放人聚乙烯袋中并封口，存于低温冰箱中。4.1.4.3虾与中小型鱼样采集
按要求选取足够数量的完好的生物样，放入干净的聚乙烯袋中，应防止刺破袋子。挤出袋内空气，将袋口打结或热封，将此袋和样品标签一起放人另一聚乙烯袋中，并封口，低温冷藏。若贮存期不太长时（热天不超过48h），可用冰箱或冷冻箱存放样品。4.1.4.4大型鱼样采集
测量并记下鱼样的叉长、体重和性别。用清洁的金属刀切下至少100g肌肉组织，厚度至少5cm，样品处理时，切除沾污或内脏部分。存于清洁的聚乙烯袋中，挤出空气并封口，将此袋与样品标签一起放入另一聚乙烯袋中，封口，于低温冰箱中贮存。若保存时间不太长（热天不超过48h），可用冰箱或冷冻箱贮放样品。4.1.4.5样品的运输
样品采集后，若长途运输，应把样品放人样品箱（或塑料桶）中，对不需封装的样品应将现场清洁海水淋洒在样品上，保持样品润湿状（不得浸入水中）；若样品处理，应在采样24h后进行，可将样品放在聚乙烯袋中，压出袋内空气，将袋口打结。将此袋和样品标签一起放人另一聚乙烯袋（或洁净的广口玻璃瓶)中，封口、冷冻保存。其他按照GB17378.3规定执行。4.1.5样品预处理
4.1.5.1准备工作
必要时将冷冻样品在冰箱（一2℃～4℃)中放置过夜，使部分解冻以便切片。用合成洗涤剂（见4.1.2.2)清洗塑料刀、碟、镊子、塑料板及尺和称重塑料膜，用蒸馏水或清洁海水2
GB17378.6—2007
（见4.1.2.1)漂洗干净。工作台用洗净的塑料膜罩上。用合成洗涤剂（见4.1.2.2)仔细地洗手，后用蒸馏水或清洁海水（见4.1.2.1)漂洗干净。4.1.5.2贝类样的制备
用塑料刀或塑料刷除去贝壳外部所有的附着物。用蒸馏水或清洁海水（见4.1.2.1)漂洗每一个样品个体，让其自然流干，拉出足丝。用天平称个体全重，并记下重量。
用另一把塑料刀插入足丝伸出口，切断闭合肌，打开贝壳。用蒸馏水或清洁海水（见4.1.2.1)洗贝壳内的软组织，用塑料刀和镊子取出软组织，让水流尽。单个体样品：将软组织放入已称重的塑料容器内，再称重，记下鲜重。盖紧，贴上标签。用尺子测量并记录贝壳长度。
多个体样品：按上述步骤将至少10个个体的软组织放人已知重量的塑料容器中，称重，记下鲜重。于匀浆器中匀化样品，将匀浆样放回原塑料容器，再称重，并记录总重量，计算匀浆样重。贴上样品标签。
各生物个体大小应相近，并在取出生物组织前分别测量其个体长度和总重量。4.1.5.3虾样制备
4.1.5.3.1单个体样品
用尺子量虾体长，将虾放在聚乙烯称样膜上，称重，记下长度和鲜重。用塑料刀将腹部与头胸部及尾部分开，小心将其内脏从腹部取出。腿全部切除。将腹部翻下，用塑料刀沿腹部外甲边缘切开，用塑料镊子取下内侧外甲并弃去。用另一把塑料刀松动腹部肌肉，并用镊子取出肌肉。检查性腺，记录所鉴别的性别。用镊子将肌肉移入塑料容器中，称重并记录鲜重。盖紧容器，标上号码。将几个容器一起放人同塑料袋中，并附样品登记清单，结紧袋口，低温冰箱中保存。4.1.5.3.2多个体样品
按上述方法制备样品，仔细地记录各个体长度、鲜重、腹部肌肉重和性别。每个样品须包括6个以上性别相同、大小相近的个体肌肉。将样品放入匀浆器中匀化腹部肌肉，转入已知重量的塑料容器中盖紧，标上号码，称重，记下鲜重和其他数据。将几个塑料容器放在同一塑料袋中，并附上样品登记清单，结紧袋口，在低温冰箱中保存。4.1.5.4中小型鱼样制备
4.1.5.4.1单个体样品
测量鱼的叉长，并于聚乙烯称样膜上称重。鉴定性腺性别，记下叉长和体重。用蒸馏水或清洁海水（见4.1.2.1)洗涤鱼样，将它放在工作台上，用塑料刀切除胸鳍并切开背鳍附近自头至尾部的鱼皮。
在鳃附近和尾部，横过鱼体各切一刀；在腹部，鳃和尾部两侧各切--刀。四刀只切在鱼体一侧，且不得切太深，以免切开内脏，沾污肉片。用镊子将鱼皮与肉片分离，谨防外表皮沾污肉片。用另一把塑料刀将肌肉与脊椎分离，并用镊子取下肌肉。将组织盛于塑料容器中，称重并记录重量。
若一侧的肌肉量不能满足分析用量，取另一侧肌肉补充。盖紧容器，贴上标签或记号，做好记录，于低温冰箱中保存。4.1.5.4.2多个体样品
仔细记下各个体体长、鲜重、肌肉重。鉴定性别。个体数不应少于6个，且性别应相同，大小相近。用匀浆器匀化鱼组织，将匀浆样转人已知重量的塑料容器中，盖紧，贴上标签并称重，记下匀浆样重3
GB17378.6—2007
和其他数据。置于低温冰箱中存放。4.1.5.5大型鱼样制备
若必要，将现场采集的样品放在一2℃～4℃冰箱中过夜，使部分解冻以便于切片。用蒸馏水或清洁海水（见4.1.2.1)洗涤鱼样。将鱼样置于清洁的工作台上，剔除残存的皮和骨，用塑料刀切去表层，再用另一把塑料刀重复操作一次，留下不受污染的肌肉组织。将肌肉组织放人塑料容器中，盖紧，贴上标签，称重，将数据记人记录表，样品存于低温冰箱中。4.1.5.6干样制备
将部分新鲜试样按4.1.6.1或4.1.6.2步骤烘干，计算干湿比，以校正水分含量。干燥后的样品用玛瑙研钵磨碎，全部过80目～100目（180um～154μm）尼龙筛，供痕量元素分析用。4.1.6干重测定
4.1.6.1烘干
将称量瓶放人105℃烘箱，2h后，取出称量瓶，置于干燥器中冷却30min。盖好瓶盖，用分析天平称重，记下重量。取5g～10g上述生物制备样于称量瓶中，盖好瓶盖，再称重（土0.5mg）并记下重量。
将盛样品的称量瓶半开盖放入105℃烘箱中，24h后取出，置于干燥器中冷却30min。盖好瓶盖后称重并记录所称重量。
重复烘干操作，至前后两次烘干后的重量差小于总重量的0.5%。计算干重和干湿比。4.1.6.2冷冻干燥
对类脂物含量高的生物样品，不能烘干至恒重，则应用冷冻干燥。准确称取1g～2g上述生物制备样于干净的冷冻干燥的样品容器中，冷冻干燥24h后称重一次。再次冷冻干燥24h，再称重。两次称重的重量差应小于总重量的0.5%。否则，应继续干燥至符合要求。计算干重和干湿比。4.1.7注意事项
本规定执行中应注意如下事项：在实验室附近采集贻贝，不存在特殊的运输和贮藏问题。运往实验室时，应使贝样通风并用海水保持润湿。采自潮间带的贻贝，在空气中可生存24h。运输时不应将贻贝放在水中；手洗净之后，不应接触解剖组织，应带上手套；若条件许可，准备工作和样品制备均应在洁净条件下进行；
一制备多个体样品时，应取性别相同、个体大小相近的生物。取出软组织之前，应分别测量各个体的体长和重量；
样品消化前，将盛有样品的容器总重量与贮存时之重量进行比较，可发现贮存期间样品是否失重；
-不同部位肌肉的痕量金属含量可能存在差别，故实际样品的有关资料应尽可能记录详细；用于有机氯农药和石油烃测定的生物样品，样品采集和预处理的设备和试剂作适当的相应改变，应避免采用塑料器皿和含有卤代烃试剂；生物体中总汞及有害有机物的测定，不应用干燥样品，应用湿样测定，结果仍以干样中被测物的含量来表示。
4.2规定和要求
4.2.1分析样品的烘干：未注明干燥温度及时间时，均指105℃土1℃，干燥2h。4.2.2标准溶液配制中，所有的移液管和容量瓶均应进行检定或容量校正。4.2.3除另有注明外，所用容器的净化均先用硝酸溶液(1十3)浸泡2d～3d后，再用去离子水仔细淋洗干净，晾干后备用。
4.2.4pH值除注明测量方法外，均可用精密或广泛pH试纸测量。4.2.5为检查分析结果的质量，应从一批分析样中按表1任意抽取检查样，分别装袋并另编样号，将基本样与检查样交分析测试人员，按以下要求进行测定：抽查样的测项与基本样相同；
-当分析样数量较多时，基本样与检查样可不应安排在同批内进行测试；GB17378.6—2007
测试所得结果按表2所列双样相对偏差值控制分析质量。当某测项双样检查结果超差率大于30%时，此批基本样中该测项应全部重新称样测定；若仍出现上述超差情况，分析测试人员应认真检查分析原因（如标准溶液的配制，环境质量，所用仪器设备有无不正常情况等)后，再进行这批样品(基本样与检查样)的测定；当某测项双样检查结果超差率小于30%时，超差的样品应重新称样进行测定，直至新测定结果合格为止。按平行双样的均值报出结果；每批分析的样品（20个左右）应插人2个～3个有证标准物质样品（另行编号），以检验有无系统误差。
表1从分析样中抽取检查样的比例分析样个数/个
检查样抽取比例/%
分析结果所在数量级
相对偏差容许限/%
4.3说明
10～30
平行双样相对偏差表
各种酸碱的密度（p)是指20℃时的质量除以体积，单位为g/mL。4.3.1
4.3.2干燥剂在不指明具体名称时，均指变色硅胶。4.3.3所配制的元素的标准溶液的浓度均指该元素的浓度。4.3.4
没有指明溶剂的溶液都是水溶液。5总汞
5.1原子荧光法
5.1.1适用范围和应用领域
本方法适用于海洋生物体中总汞的测定。本方法为仲裁方法。
5.1.2方法原理
IA-Bl×100
计算：
在硝酸-高氯酸消化体系中，生物体中的汞全量转化为汞离子进人溶液。用硼氢化钾作为还原剂将溶液中的汞离子还原成汞蒸汽。以氩气为载气使原子汞蒸汽进入原子荧光光度计的原子化器中，用特种汞空心阴极灯为激发光源，测定汞原子荧光强度。5.1.3试剂及其配制
硝酸（HNO）：p=1.42g/mL，优级纯。高氯酸（HCIO.）：优级纯。
盐酸（HCI)：o=1.19g/mL，优级纯。草酸（H2C2O4·2H20)。
硼氢化钾（KBH）。
氢氧化钾(KOH)：优级纯。
硝酸溶液（1+19)：将1体积硝酸（见5.1.3.1)与19体积水混合。GB 17378.6—2007
5.1.3.8草酸溶液（1%）：称取10g草酸（见5.1.3.4)溶解于1000mL去离子水中，置于棕色试剂瓶中保存。
5.1.3.9硼氢化钾溶液（0.05g/L）：称取1g氢氧化钾（见5.1.3.6）溶于200mL去离子水中，加人0.5g硼氢化钾（见5.1.3.5)溶解后移取20mL于1000mL容量瓶中，用去离子水稀释至标线。使用前配制。
0汞标准贮备溶液（1.00g/L）：准确称取0.1354g氯化汞（HgCl2，优级纯，预先在硫酸干燥5.1.3.10
器中放置24h以上）于50mL干净的烧杯中，用少量硝酸溶液（见5.1.3.7)溶解后，全量转人100mL容量瓶中，加硝酸溶液（见5.1.3.7)至标线，混匀。5.1.3.11汞标准中间溶液A(10.0mg/L）：移取1.00mL汞标准贮备溶液（见5.1.3.10)置于100mL容量瓶中，加硝酸溶液（见5.1.3.7)至标线，混匀。5.1.3.12汞标准中间溶液B(0.100mg/L)：移取1.00mL汞标准中间溶液A（见5.1.3.11）置于100mL容量瓶中，加硝酸溶液（见5.1.3.7)至标线，混勾。5.1.3.13汞标准使用溶液（10.0ug/L）：移取10.00mL汞标准中间溶液B(见5.1.3.12)置于100mL容量瓶中，加硝酸溶液（见5.1.3.7）至标线，混匀。5.1.4仪器及设备
仪器和设备如下：
—原子荧光光度计；
容量瓶：容量50mL、100mL、1000mL；移液管：容量1mL、2mL、5mL、10mL；烧杯：容量50mL、100mL、1000mL；电加热板；
一氩气；
实验室常用仪器与设备。
5.1.5分析步骤
5.1.5.1绘制标准曲线
5.1.5.1.1于7个100mL容量瓶中分别加入50mL去离子水、10mL硝酸（见5.1.3.1)和10mL盐酸（见5.1.3.3），再分别加人0mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、8.00mL汞标准使用溶液（见5.1.3：13），用去离子水定容至标线，混匀。5.1.5.1.2向原子荧光光度计的氢化物发生器中依次加人汞标准系列溶液各2mL，分别测定标准空白荧光强度（I）和标准样品荧光强度（I）。5.1.5.1.3将数据记人表A.1中，以荧光强度（I；一I。）为纵坐标，以汞的质量（ng)为横坐标，绘制标准曲线（给出线性回归方程)并计算线性回归系数。5.1.5.2样品测定
5.1.5.2.1准确称取0.1g~0.5g生物干样或1g～5g生物湿样（±0.0001g），放人50mL烧杯中，加人10mL硝酸（见5.1.3.1），1mL高氯酸（见5.1.3.2），盖上表面皿，放置过夜。次日将样品置于140℃160℃电热板上加热，消化至黄棕色烟雾散尽，消化液清亮透明，近无色或浅黄色为止。取下冷却至室温，加入5mL盐酸（见5.1.3.3），全量转移到50mL容量瓶中，用1%草酸溶液（见5.1.3.8）定容至标线，混匀，静置20min后测试。5.1.5.2.2除不加生物样品外，其余步骤完全等同于样品消化（见5.1.5.3.1）。由此制备的溶液作为分析空白液。
5.1.5.2.3分别取2.0mL分析空白（见5.1.5.3.2)和样品消化液（见5.1.5.3.1)加入到原子荧光光度计的氢化物发生器中，分别测定分析空白荧光强度（Is）和样品消化液的荧光强度（I。）。以（I，一I）值从标准曲线上查出相应的汞的质量（ng），或用线性回归方程计算得出汞的质量（ng）。