【烟草行业标准(YC)】 烟草品种抗病性鉴定

YC/T41-1996
品种抗病性鉴定是进行抗病育种和探索抗病机制的工作基础。制定一套简便易行而又准确、全面的鉴定方法，能大大加速抗病育种的进程。自前国际上没有统一的烟草品种抗病性鉴定的方法，在制定此标准的过程中，主要参考烟草主产国使用的方法，综合分析了我国和一些先进国家曾经用过的烟草品种抗病性鉴定的方法，选择先进的方法和病情分级标准，也借鉴其他作物品种抗病性的研究方法。本标准由全国烟草标准化技术委员会提出。本标准由国家烟草专卖局归口。本标准起草单位：中国烟草总公司青州烟草研究所。本标准主要起草人朱贤朝、石金开、孔凡玉、郭永峰、王年。539
1范围
中华人民共和国烟草行业标准
烟草品种抗病性鉴定
Identification of disease resistance in tobacco cultivarsYC/T 41—1996
本标准规定了由真菌、细菌、根结线虫引起的烟草根茎病害的抗性测定，致病性分化鉴定方法，以及烟草品种对病毒病抗性测定的方法本标准适用于室内和田间进行烟草抗烟草根茎病害，烟草病毒病的筛选和抗性鉴定，2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。YC/T39--1996烟草病害分级及调查方法3定义
本标准采用下列定义。
致病性分化variationof pathogenicity病原菌由于突变、杂交、适应性变异，不同孢子细胞质的异质性致使生理小种的改变，导致致病性差异。
4品种抗病性鉴定
4.1烟草黑胫病（Black shank）4.1.1病圃鉴定
4.1.1.1方法
品种抗病性的测定大多数是利用有病连作烟田作病圃，诱其自然发病的方法，也可进行人工辅助接种。将苗龄50～60天的烟苗移至病匾，每个品种种植1行，不得少于三次重复，随机排列或顺序排列，每行20株以上，50行设抗病品种革新三号，中抗品种金星6007，感病品种设小黄金1025各一行为对照。另设当地种植的抗、中、感品种做辅助对照，若人工辅助接菌，烟草移至大田成活后（约10～20天）用菌谷接种（每株接种量视病地而异，新病地4g左右，老病地2~3g），接种后天气干旱要灌水，使田间土壤含水量处于饱和状态。
菌谷制作方法：将谷子煮至约一半谷粒开花捞出，装入三角瓶，高压灭菌1h。将已培养好的黑胫病菌种，接种到灭菌后冷却的谷子上，然后置于28℃～30℃下培养10～14天，即成。：4.1.1.2分级及调查方法
病害严重度分级应符合YC/T39的规定。调查时间：自然发病于病发初期、盛期和末期各调查一次，若人工接种则于接种后第20天、40天。60天各调查一次。每次均应调查各品种全部植株。4.1.2室内接种鉴定
将苗龄40天左右的烟苗，移栽至直径20cm的花盆，每盆2株。也可不移栽，但留苗不可太密，株距国家烟草专卖局1996-04-03批准540
1996-06-01实施
YC/T 41---1996此内容来自标准下载网
5cm左右，待烟苗成活后，每株按0.25～0.5g菌谷量接种，置于28℃左右条件下诱发病害发生。接种后第3、5、7、10天后调查病情（病害严重度分级按YC/T39的规定，计算发病率和病情指数）。4.1.3致病性分化
4.1.3.1测定方法
选择苗龄40天左右的L8、N.C1071、N.nesophila、N.nudicaulis、DC202或A23、WS117和小黄金1025，将制备好的黑胫病菌谷每株按0.5g进行土壤接种，或用孢子悬浮液（1000孢子数/mL)进行茎注射接种，观察各品种间的抗病性差异。病害严重度分级应符合YC/T39的规定。孢子悬浮液制备：将培养好的黑胫病菌，每管加入9mL无菌水，1mL1%硝酸钾溶液，然后置于冰箱（10℃左右）24h后取出，加无菌水制成。4.1.3.2抗性评价及黑胫病不同生理小种在鉴别寄主上的反应（见表1）表10,1,2,3号黑胫病生理小种在鉴别寄主上反应科
N.nesophila
N. nudicaulis
DC202或A23
注R一抗病，病情指数25以下；S一感病，病情指数75以上；M一中感病或中抗,26~50中抗,51~75中感。4.2青枯病（Granuvillewilt)
4.2.1田间鉴定方法
测定烟草品种抗青枯病的程度，一般在病区的连作田块自然发病，可以不经过人工接种观察对青枯病的抗性。随机或顺序排列，三次以上重复，每品种种植一行，每行20株，设抗病品种D101，感病品种长脖黄为对照。各地增设当地抗、中、感品种为对照，在田间发病初期、盛期和未期进行田间调查。调查时病害严重度分级应符合YC/T39的规定。4.2.2室内苗期接种
将苗龄40天左右的烟苗，移栽至瓦盆，待烟苗成活后，用伤根灌菌液的方法，每株灌20mL的细菌悬浮液（3×10°细菌/mL），接种后置于28～30℃恒温室中，并将瓦盆放在盛水的瓷盘中保湿，观察发病情况。于接种后第7、10、15、21、30天按YC/T39的规定进行调查，计算发病率和病情指数。接种体制备：将20℃下保存于无菌水中的青枯菌，在肉汁培养基平板上划线，培养于28～30℃下，24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28℃24h后，再移至肉汁斜面，在28℃培养24h后用无菌水稀释，即成所需要的接菌浓度。
4.2.3抗性评价
划分4级：病情指数25以下为高抗，25.1～50为中抗，50.1～75为中感，75以上为高感。4.2.4致病性分化
4.2.4.1鉴别寄主
花生：品种白沙；烟草：品种TobaccoBotton；茄子：品种黑霉马铃薯：品种京丰；番茄：品种BonnyBest。
4.2.4.2鉴定方法
以上鉴别寄主，育苗后，当苗龄40天左右时，用伤根灌菌液（每株20mL细菌含量3×10%细菌/mL)的方法接种后观察发病情况，并按YC/T39的规定调查。4.2.4.3结果统计
按其寄主范围划分三个生理小种。小种1侵染：番茄、烟草、马铃薯、茄子、花生等；小种2侵染：香蕉；
小种3侵染：马铃薯、番茄。
4.3黄瓜花叶病(Cucumber Mosaic)4.3.1温室苗期接种鉴定
YC/T 411996
取有三片真叶的烟苗，在第二片真叶上撒少许400～500目的金刚砂，然后用纱布蘸取病毒汁液，在叶片上轻轻摩擦。大量苗子可以用喷枪接种，接种前在病毒汁液中加入1%金刚砂，高压喷射（压力为68947.6Pa～~206842.8Pa）喷口距接种物20cm，每株喷接0.5s。接种后保持在28℃条件下，第7、14、21天观察发病情况。按YC/T39的规定进行病情调查。4.3.2田间鉴定
田间一般采取自然发病，不进行人工接种。每个品种种植一行，至少三次重复。设T1245，铁把子为抗CMV对照，G28、亮黄烟为感病CMV对照，在烟草各生育期观察病害的发展，调查发病率，并按YC/T39的规定进行病害严重度调查，计算病情指数。4.3.3抗性评价
划分4级：病情指数25以下为抗病，25.1~50为中抗,50.1～75为中感，75以上为感病。4.4根结线虫病（Root-knotnematode）4.4.1温室接种南方根结线虫1号小种（适用于其他根结线虫种或小种）4.4.1.1待鉴定的材料
将苗龄35～40天的烟苗，移栽到有根结线虫的土中（病根及根际病土与消毒营养土按1：4混合），在室温为25～30℃自然温度条件下生长两个月，拔出烟株，用自来水冲去根上泥土，并按YC/T39进行根结线虫病病情调查。设长脖黄为感病对照，T1706和NC95为抗病对照。各地可设当地的抗、中、感品种为对照。
4.4.1.2接种体制备
在感病的番茄品种*Rutgers\接种繁殖根结线虫，在25～30℃下生长55～60天后即可作为接种体使用。
4.4.2田间鉴定
已知为根结线虫危害的田块，在自然发病条件下，鉴定品种对根结线虫的抗性，每品种至少种一行，三次以上重复，收获期按YC/T39的规定调查病情。对照品种与4.4.1相同。4.4.3抗性评价
划分4级，病情指数25以下为抗病，25.1～50为中抗，50.1～75为中感，75以上为高感品种。4.4.4根结线虫种及小种鉴定
4.4.4.1鉴定
四种危害烟草的根结线虫及其生理小种的鉴别寄主，见表2。表2危害烟草的根结线虫及其生理小种的鉴别寄主根结线虫种
和生理小种
南方根结线虫
1号小种
2号小种
3号小种
4号小种
花生根结线虫
1号小种
2号小种
爪哇根结线虫
北方根结线虫
注：+-
Deltapine 16
平均级别在4级或4级以上；一
鉴别寄主品种
California Wonder
Charleston Gry
平均级别在 0～2级。
Florrunner
Rutgers
接种法同4.3.1。
4.4.4.2病害严重度分级（表3)
根结或卵块数
YC/T 41—1996
1～~2
3~10个
11～30个
31～100个
100个以上
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