【商检行业标准(SN)】 猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1446.1-2004
猪传染性胃肠炎
阻断酶联免疫吸附试验
Blocking ELiSA for transmissible gastrnentcritis nf swine2004-06-01发布
中华人民共和国
国家质量监督检验捡接总局
2004-12-01实施
杰标准的陷录A为范性附录。
本标准国案认证认可监哲管理委员会提出并归口。本标准起草单位，中华人民共和国上海出入境检验检流局。木标摊主要起草人：李健、胡永强，三巧全，事树清、本标准累首改发布的出人境检验检疫行立标准：SN/T3446.1—2004
1范区
猪传染性置炎
阻断酶联免疫吸附试验
本标准规定了指传染性断炎函断能联免恋吸怀试验试验方法，SN/T 1446.1—2004
本标祖适用下销传案性日肠炎的检疫，流行病学两查、抗达水单检测以及与端呼吸道冠状病(TRCV)感染的风别诊断，
2仪器设备，试剂和材料
2.1器设备
苷延天平分所天平2CuLu，调落液器.精密滴头、恒温箱、酶标仪洗板机等。2.2试剂
配制见附录A。所有化学试剂均为分折纯。2.3材称
2.3.1猪偿资性胃断述标准抗原瓶逐拉.2.3.2绿准TGEV阳性对照血清.TGEV/PRCV网性对照上、FRCV阳性殖照无游，2.3.3标谨扩TGEV单克隆扩体、究TGFV/PRCV单充隆抗床2.3.4根过氧化物薛（HRP)标记的抗双IgG.商止采购，使月前对同一批号的产品进行工作银度测定。
3提作阻序
3.1禅品
血清或凸装.
3.2操作步骤
3.2.1使用改出所有试剂：兴菌到室温（20～25C）。将反座/条做对标证3.2.2开洗策洗板三次，每次5，录后-次抗十卡除所有惑密获怀.3.2.3立即分加人TCEV、PRCV阴性购照而消究TCEV/PRCV响性对照血清到相座血清对照孔.11/孔，是体资加图1，
3.2.4用多通道获器加PBST到所右样品孔，52=I./孔，然后门人梯择的待检而治，50L/孔，每份样品两孔、见图1。
3.2.5密封微量板.37温21.
3.2.6按3,2.2禁作板
3.2.7立即加人T作度的殊准拉TCFV单抗体利抗TCEV/FRCV单克座抗车，到对应而清孔100/图1)
3.2.8密整微氧板室温（2i23℃>很育80mim3.2.9按3.2.2探作洗放。
3.2.10加人工推侬度的HR1保记鼠1g.100l./孔，密封激量板.室温<20~23\C）温商30min，3.2.:1技3.2.2保作洗我。
3.2.*2快率灯人底物落藏，10L,机.陷盒室源（23℃~2%C>温育2can左方至额安化。1
SX/T1446.12004
加人终止液终止反应，501.讯终止正短竭加疏序与忙物落般添加师房相同，期色由蓝色载3.2. 13
变为黄色，
4充分抵落.用酶标义尘波长450nm处别吸光值（OD）.空气作步空自用。3.2. 14
注LA1A为1LKV任对血滤添加孔，BI、32C)C为OV/PRCV明性对照清添加礼;.2PIRCV阳任对因止清思孔，
生2.S为样品的英文马，
3：在激32.7时：第），3，6，7，511列所且清儿加你准1T1:V举元隆控伴第2，4、、12，2所有消孔标准TOVPRCV年克摩机位
用1阻断ELISA试骗样品及血清对照添加示闻4结果判定
4. 1数据计异
4.1.1分别计算中B7.C1血消对调孔的平与0D值和B2C2血消对照孔的平均0D%值。4.1.2闭烂A=U.=×B1.C1血消照孔加TGEV单抗炸用的阴性血滑对照孔)的半可CD值，4.1.3周值一5.2、C2血清对照礼TGV/1RCV单流栏口的性血滑对照孔的平均D..证，
4. 2右效性判断
当下到系件成立吃，率试资才为有效：TGEVTRCVC.孔OD值5
司追AAI并（加TGEV单抗怕用的TGEV阳出成滴欢照孔值：润值A孔加TGFV/PRCV单抗准用的TGEV阳性血节对照孔OD值；网问ADI在加TGEV单抗作用的PRCV阳性血满刘照孔O值：阅范D2礼O：宜。4.3
钻果判定
每份血流拦品两孔，切：人TV单抗作用的栏品孔D大丁网值A记为阴性”一\小于尚直A记阳性\+\加人TGFV/PRCV单作用的婵品HD人十阅记为件“-\小阅偿记为附”「“
TEV航件阳性，加CEV单抗烊品和TGFVRCV单证持品孔那为阳性时，划TGHV体性。
PRCV抗体生：.ITGEV单抗详品刷，TEV/PRV单洗举品孔生时判PRCV责休所性。
TGEVPRCW抗达朗性：加TGEV单抗样品孔和圳TGFV:PRCV单拉栏品孔都为朗性H.划TGFV和PRCV抗车阴性.
A,1洗泳液(PBST)
附景A
（规性附录）
试剂配剧
A,1.1PH7.40.01mol/L磷整盐继冲(PBS)溶液人
燕化销(NeC)
氯化钾（KCP
湖二销（NHPO、-12HO)
磷氢钾(KI:PO>
燕馏水
额化等(CCl，·21,0)
氯化键(MgCL-6H,0)
蒸留水
SN/T 1446.1—20C4
将A,游液分别充分游解后，限，用熹图永补充定盘到5C3mL.分装，121℃高压然汽炎函20min，置室温或4心保存。高与寄液可报出现白负行淀，报送数决落解后使用。A. 1. 2洗激满
H7.4r,01:un1/1.避盐领冲技(FBS>湿-23
滤拟保存不超过一思：
A,2样品播释液免费标准bzxz.net
法希减（PBST）
兰血清白蛋白SA）
择品稀释获在4亡保存小能整过2d最可单次试冷随融随压，A,3底物溶液
A.3.：mH6.00.1mol/L7.酸钠-烷檬酸螺冲滤磨液鸟
Z.钠CH.COON
蒸馅水
溶液B
檬HUCCUOHCHCOOH)H.O!
热馅水
1000mL
- 000ml
净婚波员逐生锈加到降按A中，每改险别肖王S.0为土（大品密液B1C，过变究高正灭（12120m.in）.4保存。
A.3.2TMB常液
3.3四可联本除（335,--hyllenlie[M）中Ss/r1446.1—2004
TM极易见光分解，丢用蚂拍包惠的棕色瓶在暗望保存，冷藏环境下将液可能出现错品，使用前必额温育旁解，
A3.3过化重(,0,)
佐币商业化的3U%过氧化垫(H,0.)熔滤，4保行，一年左右更新、生3.4完整的底物溶液
必环在使用之前配制，将3CDuLTMB落液加入到9.7mL37C平衡的乙酸纳-片檬酸毁冲液，然后加人33%过氧化氢(H,>案液，将跨会选吹数次A.4止液1mal/.统照）
将1mt.浓随醒小心人到1ml.的蒸询水中，混与即可
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