【商检行业标准(SN)】 咖啡美洲叶斑病菌鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S/T1450-2004
咖啡美洲叶斑病菌鉴定方法
Methods for identification of Mycena citricolor (Berk. & Curt. Sace2004-06-01发布
华人民共和国
国家质量蓝督检验检总局
2004-12-01实施
本标准的附录A和附录马为资料性附攻，本标准由国家认运以可益督管孕委品会券出并本标准制单单位：中华人无共国广对出人境检验检技局。本探准主要起草人；钟国强、张传飞司让保禄、感立荣，本标推系首次发布的出人境检验检凝行业标，SN/T1450—2004
一范田
咖啡美洲叶斑病菌鉴定方法
本标准现定广咖哦美洲叶班病函的连定方齿，SN/T 1450—2C04
本标准钙于来源啡关叶斑2区（等见附录A）的和其地士要寄土随物盐木（多附录B携带的血美洲叶斑病菌的鉴定2实语和定义
下列术语和定义送市于木标滤。2. 1
泰池emma
如虐美讲叶差病案的尤偿签整体，一种黄也的计状给构，由禁和醛状穿跑随组成，是该病的主要传播整暂控：
担子果hasidioeap
如吃研式搅品的有性生范体，一种两的单状心药3原理
3.1啡关洲叶斑两的分类地位
啡光讲斑满菌yenitricolerHerk.&Cur.ac属起子的业（msiliomyzutiu）层卤（Hraenomy）伞茵月：girales）伞茵科（Agarieae）小写eu。非美现病现尚限变生在关制的一当国家和地文，主费为宝咖哇虞估裁的时片始技和数果，气炭涤在与环助条件适育时：可为半共地科高盐物新告美文名tAmcriceaIeafSpotofCaffea.3.2、检疫原理
阿啡关洲叶可满菌为美训热带湖湿山区利森计地区的一手剂卖生菌通学腐生于腐柠的树十变范质中，在适实的气您和坏境下，病原函的菌然体比以等生如啡和共他丧土查物组织，使寄主发病产生我死病无，病原乱产生两和繁效结构：无非生相的芽范利有性生殖的科了果（报了果的产生通常案要用青孕面需发）。通过查危来自该病发牛地区的寄当首不，分离纯化病原菌，利用液病的症状特行和病原对证违行鉴定，
3.3鉴定原理
如叶大叶距的症状，病片南形特征和物学特性（落养性状和生物荧光的产生！是长病监定的言要衣据。
4饺翌和试剂
4、1生物动微销.
4.2本现显微镜。
4.3高压灭酋器，
4.2超净工作台
4.5生物培养箱
4.6塑料盒(2R em×22 cr)
SN/T 145D—2004
4.75%次氯酸纳NeC10>落激。
4.日马龄幕面萄糖琼脂PDA?培养链。5检验方法
5.1组织保湿法
用型料空作为养器血，在盒内铺上保湿虑抵.将来集的病叶组！样品蓝干滤弱上，响案保持病叶岛座湿润宜3忆片养箱内在自然光或将光下培养，3后取出叶片观病病斑下有无礼状，首包的芽孢严生·如发现乐孢，将芽孢我至PDA培养蒸内继续培券，观察剪落形态，颜包，芽也双及担子果药产生情记：
5.2培养基法
剪收可疑的班细织，用5%次酸钠溶浓消市5mim，灭菌水洗三至四次，将病低组织移变PDA的培差中，告25么培养，3后观察菌落的态、颜色.芽他以粒担子果的产生情况，5.3生物荧光观察方法
半病啦或苏萄蔽，带进器嗒的房间，淳望1mn以适盘黑略的环境，肉眼现察病叶上病斑或培养的两获思中可以产生生题荧光，5,4担子果诱发试验
取分离纯北的关斑两菊疑待菊和背首的的略，分别接种于同血P养基的一侧培养.培帮3后战南与青游南函落交界妇指抗的边沿可严生大量导孢及黄色和状的扭子果
5.5致病性试险
较5.1部：保许送在盒内半钠-.房保按雄纸，报分离纯化存到的莱孢或菌丝（起：不能用了果）接种在冲干将的偿率邮啡或共他产主叶上，年大晚多保湿，观察症状和病原的产生情况E鉴是特征
E,1 症状特征
6.1.病上病斑大小为1ml3-1mm多数为4mn6mm:典型为病旺为国形，黄损色至浅红色，病部正而翻凹陷，病更中尖壮征惑留名芽独人臣叶产时留下什颜色的芽孢牛，病随交界显，形状鸡很义叫鸡退病：当队个以上病斑连接时，病妞形收不热，形，下早事节，病新的坏死组织会脱说下空河。脉上的病斑向两这稍世长，叫陷·浅英·病部·有敢生的乳黄色单，早外有孩率旁也边终。
6.1.2技条工病班整状为长相供形，恶褐色，中叫浅灰，弱产书凹降，受讲果实产生近回形斑点，后期摘部变决凹任,率没红柄包。
6.2点原得征
6.2.：丧压微授下观系菌垒无色，有分，出细驱改核并具典型的锁状联含体西丝：在PA培券本中良约初亡色，成总射抗紧出著培养本表血向四质打，气生芮丝少，语荞3中开始产生的色色索，然后产生费色的弛。
E.2.2菊落的生长违率平沟为0.37m/d。储在培养后期产生一紫熟粒状黄色的南丝团。孩原尚菌学牙泡位品暗的环培中到带发出物炎光6.2.3无性生型体芽独小.黄色、个·缺，由蒙独的些和求跑成·辈细长困主状，长约21mr茎的项部长有尽碟状的乐孢本。步鸦体展开时直说的0.3rm，表面中间消凹陷。茅强达易脱落·谢发时这练长出获射状有分髓的设架丝侵染依），6.2.4性生殖体的担干未贡针，击菌柄和菌益组或，形状如微型的小步，束柄直立，黄色，有细小绒毛长0.6m~1.1cm，连接菌柄的南盖黄色、球、金而较，菌弥薄、腰质、中间拍百陷.边缘肩平，2
SN/T1450-2004
光洁,±通光。函蓝直径0,8 mm~-4,3 mm、近宿 \,0 m,辅射状系纹7条--15条，菌超少,离得较开，黄色，有质，子规举状，（.4.μm~-17.4m1)×5。抢子带小，菌形或卵形，无色，(4 μ5?~5 μm) ×(2. 5 um~3. c μm) ,结果判尝
如病原苗可产生生物光，其症状特征和病凉特征准合5，1、6.2项的特行，监定为咖啡关计助病，必要时、按5.5项进行敦病性试验。8葡株的保存
将监定为如啡美洲时病的菌株移至有PISA培养基的试管内·1=%条件个保存.定册（的个月)转节：座样至变需保存十二个月，保存期满后：经灭菌处理。SX/T1450—2504
（安料性附录）
如啡美洲叶斑病的分布范围
呼斯达辑加，巴牵马、尼加控压危地马拉、尔瓦多、齿巴、洪都控期，海文尼让秆多巴开，多来尼加，被多势各，牙买加，海地亚彩苏里、墨酉哥，然到继亚，三西、秘者、秀内瑞拉、哥轮亚、美国（佛要重达、复吸杰)、瓜德多些岛，马提已光岛，西印度群岛。录B
（资料性附录)
一紫咖甲美洲叶斑病的生毒生
果mCorfewara
果Cora小
大英印啡Coffealiber
啪啡Coffeastencpht2
正企鸡纳树CiaAunaune
l Cagsicnm: frntescer?
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4心蛋荔传AnnonGreshialar2
格FicscotutrneaF,trreyiarg
果子曼ruznnir
肖华Caiaheaecrceuic
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上彩笔alauiwsp，
毛背竹Monserra gpemtea Al. Pinigri一喜芸Puihdendrnrieartium
西是Peaificretcriacea
浦非Fargenie jembus
秋声常Begoniainrla:rataB.tittier!Pereaameicana:P.carruteu
大Porhemorgheumbellutir
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