【商检行业标准(SN)】 猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SV/T 1379.1—-2004
猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验Protocol of the enzyme-linked inmunosorbent assay using monocional antibod.for the detection of antibodies against classical swine fever virus2004-06-01发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2004-12-01实施
本标的附录A为娩范性附录。
本标准由国家认证认叫监督督理类员会走出开口口。本标准由中华人良共和国广东出人境检验检度局负责起：本标推主要起百人许如苏、郭奕充、肖德椎。本标准系古次发布的出入境赖验检行业标摊：S.N/T1379.1—2004
1范围
猪瘾单克隆抗体酶联免疫吸附试验本标强规定了单充激护体收免吸附试验（间接法）检测精盘信体的方法，本标随避用带独书检疫、诊和疫苗勇疫监阅：2仪船设备
2.1海钙娠，
2.2试移策器，
2.3生激培养箱，
2.4电子天平感盟c.001g。
2.5醇乐检测仪.
3试划
3.1诊断试剂
3.1.！带癌发李单抗范化醛联抗原，3.1.2
常燕弱毒单格化海疾抗凉，
3.1.3标准所性新济。
3. 1. 4标准降性血消,
3.1.5醇标抗（兔抗猛gG根过氧化物酶结合物）3.2夜检主价，无率克，无污策，3.3赖
3，3.：试频所错溶变盘治：
包被浪[H.6带醛贯缓这液
磷酸冲盐水(PS)：
\—磷酸摄冲盐本-吐温(学S-T)洗除液希释液RS-T-3S>
邦萃二胶（(>1)底物液：他用前配制：终止爽（2moi/LJSO,
3. 3. 2 济狱配当见附录 A,
SN/T t379. 1--2004
：族断试剂中乎到监家所生严。给品这一信忘是了他本准的快并不示对论产品的以。如果有池效产品可然学更说明卡用。4择作方法
4.1包被
消包被格密润率（毒款弱毒）单抗纯化前送抗原作100希释，每人193置滤盒于给堆。
4.2洗板
弃去孔内滴达，片决涤液洗板三次，每次×mm~hm，用干孔内液，于滤纸上拍打吸于。SN/T1379.1—2004www.bzxz.net
4.3加故检血清和标准血清
用蒂年液将待检血游作4弹，英孔列1以，同时将标准明生，阳性血润分别栏100倍范释作对照,37培育1.5h-2h,
4.5加醇标三抗
用稀释波将免抗猎1gG辣性过氧北钩酶结会数稀辞至工作依度，每孔加人100，37培育1. 5 h~2 h.
4.6洗板
夏4.2，
4.7加OPP底物溶液
气孔的人房物游波lunL，定湿下避光众应=min~1San4.8终止反应
当标准正性且情对照孔呈声垒，标消弱性止情对照孔无色或路微显色时，每孔加人5Gα终止获整止反底,5 mir 内测定光筛发,
4.9测定光密度
以标注限性二将对照孔作空白调享，酵标仪上视定91nm波长内光咨度（0)5别定标准
5.1在绪盘专联板上，标泄阳性血清对照雅D大丁等下.2对，试酸成立，按以下标准判定结果：
OD大于等于0.2：为指弱毒抗体性；1.）On小下0.2.为疆癌弱毒扰体阴性。5.2在猪盘弧率酵联板上，标冶阳性血清对照孔D大于等下0.5时，试醛成立,安以下标准判定钙果：
大于等于0.5.为脂避强率抗体自性：b！D小下0.5,为猫流强再抗体阴非2
A.1包被(I9.6碳酸盐缓冲液）
附录A
（规范性附录）
溶液配制
SN/T 1379. 1—2004
碳截钠（Ns：C),1.59，磁酸图钢（NICO>2.93&，先加适量的双蒸水，完全落解后加双获水定容至1000mL。
A2磷酸糖冲盐水TBS
磷酸室销(NaIPO,，R磷醛氢评KHPO.2多化钠N:CI>.0g系化（KCI0. 2 g·完州适量的双然水,完全溶鲜后加家燕水定容至 1 CC1 -1I.[:H应为7. -,否购,须用 3 tLul/室氧化构谢pH为7.4。
A.3磷酸线冲盐水-吐温([BS-T>)洗涤液PH5000 n:I.业短-2G(Twen-20>0.5IrT.混多.A.4希辆液(FDS-T-DS)
PBS-T00mL小牛血精5L.脆包。
A.5邻苯二胺(OPD)底物液
A.5.】殊取柠（CJT,O，·FIO)21R先适量的双蒸水，完全箱解后加双水定容至1)0tE:L：配成0.1 m:rl,T.柠操醛液。
A.5.2陈取二销（Na:HI()，·12I1:())71.6g先旧的：双然水，完全溶解后加效水定容至1UoCmL：配放u.2mal/I.家二销Na:HPO：12H.O液4.5.3取A.6.1游浓24.3L.A..2溶液25.7aL.港匀4.5.4取邻进一胶20ma范于2CrLA.5.技中临月前加G双满HO30.075m1.即成物激。
AE终止随（2nl/殖醛）
十cml.双然水中缓慢人76t依度98%）范可，
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