【地方标准】 辽宁绒山羊细管冷冻精液制作规程

ICS 备案号： DB21 辽宁省地方标准 DB21/T1697—2008 辽宁绒山羊细管冷冻精液制作规程 (Liaoning cashmere goat straw frozen semen manufacture regulations) 2008-12-05发布 2009-01-01实施 辽宁省质量技术监督局发布 前言 本标准由辽宁省动物卫生监督管理局提出并归口。本标准由辽宁省辽宁绒山羊育种中心、辽宁省畜牧科学研究院负责起草。本标准主要起草人：刘兴伟、韩迪、豆兴堂、王世权、刘庆权等。 1 范围 本规程规定了辽宁绒山羊细管冷冻精液的技术要求、制作程序、解冻、检验、标记、包装、存放、取用、运输及容器清洗等方法。 本规程适用于辽宁绒山羊，其他品种绒山羊可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本规程引用而成为本规程条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用。 GB 5458 液氮生物容器 GB/T 1.1-1993 标准化工作导则 3 术语和定义 精子密度：1ml精液中的精子数。 有效精子数：有效精子数=精液量×密度×活力。 精子活力：37℃环境下直线运动精子数占总精子数的百分率。 精子顶体完整率：顶体完整精子数占总精子数的百分率。 精子畸形率：畸形精子数占总精子数的百分率。 精子存活率：在37℃环境下保存4h时直线运动精子数占总精子数的百分率。 细菌数：一剂量冻精解冻后经培养所产生的菌落数。 4 规格与质量标准 4.1 规格 0.25ml剂型。 4.2 质量标准 4.2.1 精子活力≥30%。 4.2.2 每剂细管冻精有效精子数≥1500万个。 4.2.3 精子畸形率≤20%。 4.2.4 精子顶体完整率≥50%。 4.2.5 细菌数≤1000个。 4.2.6 解冻后精子在5℃～8℃条件下保持30%活力时间≥12h，在37℃条件下≥4.5h。 4.2.7 标识应打印品种、羊号、生产日期。 4.2.8 灌装后封口严密，解冻时不得进水，细管前端留约0.8cm空隙。 5 制作程序 5.1 采精种公羊标准 种公羊体型外貌和生产性能应符合一级以上标准，无布鲁氏杆菌病、副结核病、口蹄疫、蓝舌病及其他遗传缺陷疾病。 5.2 采精方法 采用假阴道法采精，采精前用温水及灭菌生理盐水清洗公羊阴茎和包皮。 5.3 原精质量标准 颜色为乳白色或淡黄色，精子密度15×10⁷/ml，活力≥60%，畸形率≤10%。 5.4 精液稀释 5.4.1 器具要求：清洁、无菌、无残留消毒剂。 5.4.2 稀释保护剂：使用新鲜双重蒸馏水、卵黄或合格细胞膜保护剂，或国家认证稀释液产品。 5.5 降温和平衡 稀释后精液在1～1.5h内逐步降温至4℃～5℃，并在该温度下平衡2～4h。 5.6 冷冻 平衡后置于-95℃±5℃环境冷冻3min，再浸入液氮保存。 6 解冻 细管冻精取出后立即置于38℃～40℃温水中轻摇约20s，擦干备用。 7 检查 每只种羊抽检1～2剂，每6个月抽检保存冻精3～5剂。 7.1 解冻活力检查 在显微镜下观察精子直线运动比例评估活力。 7.2 有效精子数测定 根据原精密度、稀释倍数及活力计算有效精子数。 7.3 顶体完整率和畸形率测定 采用姬姆萨染色法或相差显微镜观察，每样本观察≥500个精子。 7.4 解冻后存活时间测定 取样品解冻后置于37℃恒温水浴中定时检测活力变化。