【地方标准】 牛新孢子虫病检测方法 LAMP法

ICS 11.220 B41 备案号：54236-2017 吉林省地方标准 DB22/T 2559—2016 牛新孢子虫病检测方法（LAMP法） LAMP assay for detection of bovine Neosporosis 2016-12-09 发布 2017-03-01 实施 吉林省质量技术监督局 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。 本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。 本标准起草单位：延边大学、吉林省动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：贾立军、柴方红、张守发、梁晚枫。 1 范围 本标准规定了牛新孢子虫病LAMP检测方法的技术要求。 本标准适用于牛新孢子虫病病原检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 新孢子虫病（Neosporiasis） 由犬新孢子虫（Neospora caninum）引起的一种多种动物原虫病，主要引起母畜流产、死胎或新生胎儿运动障碍及神经系统疾病。 3.2 环介导等温扩增（LAMP） Loop-mediated isothermal amplification：针对靶基因的6个区域设计4种特异性引物，利用链置换DNA聚合酶在约63℃恒温条件下进行30～60 min扩增，实现核酸的高效扩增反应。 4 试剂 除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中一级水要求。 4.1 常规试剂 4.1.1 100 mg/mL 溶菌酶（见附录A.1） 4.1.2 10 mg/mL 蛋白酶K（见附录A.2） 4.1.3 10% 十二烷基磺酸钠（见附录A.3） 4.1.4 5% 十六烷基三甲基溴化铵（见附录A.4） 4.1.5 TE缓冲液（pH 8.0）（见附录A.5） 4.1.6 50×TAE缓冲液（见附录A.6） 4.1.7 加样缓冲液（见附录A.7） 4.1.8 1.5% 琼脂糖凝胶制备方法（见附录A.8） 4.2 分子生物学试剂