【地方标准】 生鲜肉中三聚氰胺的测定

ICS 65.120 B46 备案号： 辽宁省地方标准 DB21/T 1687—2008 生鲜肉中三聚氰胺的测定 Determination of Melamine in Fresh Meats 2008-11-19发布 2008-12-01实施 辽宁省质量技术监督局 发布 前言 本标准由辽宁省动物卫生监督管理局提出并归口，由辽宁省质量技术监督局发布。本标准附录A为资料性附录。 本标准负责起草单位：农业部饲料质量及畜产品安全监督检验测试中心（沈阳）。 本标准起草人：王淑芬、张建勋、刘全、刘敬先、刘凯、杨希国、于家丰、王丽娜、田晓玲、曲韵坤。 本标准为首次发布。 1 范围 本标准规定了生鲜肉中三聚氰胺残留检测的制样方法及酶联免疫法（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱-质谱法（GC-MS）测定方法。 本标准适用于生鲜猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中三聚氰胺残留的检测。 其中，酶联免疫法为筛选方法，筛选结果为阳性的样品需用仲裁法确证；高效液相色谱法和气相色谱-质谱法为定量方法，其中气相色谱-质谱法为仲裁法。 方法定量限：酶联免疫法为0.20 mg/kg，高效液相色谱法为0.20 mg/kg，气相色谱-质谱法为0.10 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准；但鼓励各方研究是否采用其最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法 3 制样 3.1 试样的制备 从原始样品中分取约500 g，经绞肉机绞碎并充分匀质，使样品均匀。 3.2 试样的保存 试样应在20℃以下保存。 4 酶联免疫法（ELISA） 4.1 原理 本方法基于竞争性酶联免疫分析原理。样品萃取物中的三聚氰胺与酶标记的三聚氰胺竞争结合微孔中的抗体。未结合的酶标记物被洗去后，结合的酶标记物将无色底物转化为蓝色物质，加入终止液后，在450 nm波长下测定吸光度。吸光度值与样品中三聚氰胺含量成反比。 4.2 试剂和溶液 4.2.1 除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，水应符合GB/T 6682中二级水要求。 4.2.2 三聚氰胺试剂盒（含标准溶液、酶标记物、清洗液、底物、终止液及说明书）。 4.2.3 异辛烷。 4.2.4 三氯甲烷。 4.2.5 异辛烷-三氯甲烷混合液：量取40 mL异辛烷与60 mL三氯甲烷混合均匀。 4.2.6 10%甲醇/20 mmol/L PBS缓冲液：称取0.62 g NaH2PO4·H2O、5.73 g Na2HPO4·12H2O和9 g NaCl，用蒸馏水溶解并定容至1000 mL，再取900 mL加入100 mL甲醇混匀。 4.3 仪器和设备 4.3.1 酶标仪（配450 nm滤光片）。 4.3.2 涡旋混合器。 4.3.3 冷冻离心机。 4.3.4 微量加样器（20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、250 μL）。 4.3.5 恒温干燥箱。 4.3.6 分析天平（感量0.01 g）。 4.3.7 振荡器。 4.3.8 绞肉机。 4.3.9 匀浆机。 4.4 测定步骤 4.4.1 样品处理 准确称取2 g试样（精确至0.01 g），加入10 mL 10%甲醇/PBS缓冲液，涡旋30 s，振荡5 min，以4000 r/min离心5 min。取2 mL上清液，加入2 mL异辛烷-三氯甲烷混合液，混匀后再次以4000 r/min离心5 min，静置后取上层约150 μL待测。 4.4.2 测试程序 将所需数量的微孔条装入酶标板中，分别加入标准溶液（0、20、100、250、500 μg/L）和样品萃取液各150 μL至对应微孔中，再加入50 μL酶标记物溶液，振荡混匀，在约25℃孵育30 min。 倾去孔内液体，用清洗液洗板4次并拍干。向每孔加入100 μL底物溶液，振荡混匀，在约25℃孵育30 min。随后加入100 μL终止液，振荡混匀，在450 nm波长下测定吸光度。 注：不同品牌试剂盒操作步骤可能略有差异，应根据说明书进行适当调整。使用前试剂应恢复至室温。标准溶液和样品应进行平行试验以提高准确性。 4.5 结果计算 以空白溶液（0浓度标准）的吸光度值为100%作为基准，计算各标准溶液和样品的相对吸光度值，并据此进行定量分析。