【地方标准】 饲料中加丽素黄的测定

ICS 65.120 B46 DB13 河北省地方标准 DB13/T 1384.11—2011 饲料中加丽素黄的测定 Determination of carophyll yellow in feed 2011-05-10发布 河北省质量技术监督局 2011-05-20实施 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准由负责起草单位以及河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、石家庄市疾病预防控制中心、北京出入境检验检疫局技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站共同参与起草。本标准主要起草人：张岩、丛斌、李挥、卢晓宇、吕品、张宏、马春玲、杨立学、沈磊、贾茜、米振杰、李志平、李强。 1 范围 本标准规定了饲料中加丽素黄的测定方法。本标准适用于饲料中加丽素黄的测定。本方法中高效液相色谱法的检出限为1.0 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法一 高效液相色谱法 3.1 方法提要 试样用乙腈提取，正己烷脱脂、浓缩后，用高效液相色谱仪进行检测，采用外标法定量。 3.2 试剂和材料 所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.2.1 乙腈：色谱纯。 3.2.2 正己烷：色谱纯。 3.2.3 正丙醇。 3.2.4 2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）：化学纯。 3.2.5 无水硫酸钠：650℃灼烧4 h，置于干燥器中冷却后备用。 3.2.6 乙腈提取剂：0.25 g BHT溶于500 mL乙腈。 3.2.7 BHT-乙腈溶液：5 g BHT溶于500 mL乙腈。 3.2.8 加丽素黄标准品：纯度大于等于90%。 3.2.9 标准储备液：准确称取5.00 mg（精确至0.01 mg）加丽素黄标准品，加入BHT-乙腈溶液溶解，定容于200 mL棕色容量瓶中，配制成浓度为25.0 μg/mL的标准储备液。充氮气密封，-18℃避光保存，可使用两周。 3.2.10 混合标准工作液：准确移取加丽素黄标准储备液，用乙腈准确稀释至适宜浓度，即配即用。 3.3 仪器设备 3.3.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列（DAD）或紫外-可见（UV-Vis）检测器。 3.3.2 分析天平：感量0.01 mg、0.01 g。 3.3.3 涡旋混合器。 3.3.4 超声提取器。 3.3.5 离心机。 3.3.6 微孔滤膜：0.22 μm，有机系。 3.4 测定步骤 3.4.1 提取与净化 称取试样约5 g（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入30 mL乙腈提取剂及10 g无水硫酸钠后，涡旋混合1 min，在35℃以下水浴超声提取10 min，再以3000 r/min离心5 min。将上清液移入预置有20 mL正己烷的125 mL分液漏斗中，振摇0.5 min后静置分层，收集下层乙腈相。正己烷相留在分液漏斗中备用。按上述步骤对残留物重复提取两次，每次加入20 mL乙腈提取剂，所得提取液用正己烷相依次脱脂。合并三次脱脂后的乙腈相，加入5 mL正丙醇，于40℃以下旋转蒸发浓缩至近干，用乙腈溶解并定容至5.0 mL，经0.22 μm滤膜过滤，滤液待测。 3.4.2 高效液相色谱法测定 3.4.2.1 色谱条件 色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm（内径），5 μm或相当者；柱温：35℃；流动相：乙腈-水（95:5，体积比）；流速：1.0 mL/min；检测波长：452 nm；进样量：20 μL。 3.4.2.2 色谱测定 根据试样中被测物含量，选取适宜浓度的标准工作液进行色谱分析。标准工作液与待测样液中加丽素黄的响应值应在仪器线性范围内。标准工作液与待测样液等体积进样。 3.4.3 空白实验 除不称取试样外，按上述测定步骤进行。 3.5 结果计算 按下式计算： x = (A × c × V) / (As × m) 式中： x —— 试样中加丽素黄的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A —— 试样溶液中加丽素黄的峰面积； As —— 标准工作液中加丽素黄的峰面积； c —— 标准工作液中加丽素黄的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V —— 定容体积，单位为毫升（mL）； m —— 最终样液所代表的样品质量，单位为克（g）。 3.6 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4 方法二 定性方法 4.1 试剂 Sakaguchi试剂：将1 g硼酸溶解于100 mL 80%的硫酸中。 4.2 仪器