【地方标准】 食用菌液体菌种生产技术规范

DB12/T1012—2020
食用菌液体菌种生产技术规范
Technique standard for liquid spawn production of edible mushroom

前言
本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市林业果树研究所。本标准主要起草人：罗莹、周永斌、钱磊、刘连强、王文治、李风美、暨惠君、李淑芳。

1 范围
本标准规定了食用菌液体菌种的生产场地、设备设施、工艺流程、生产技术规程、使用方法以及标签、贮存。本标准适用于食用菌液体菌种的生产。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB5749 生活饮用水卫生标准
GB/T12728 食用菌术语
GB50073 洁净厂房设计规范
NY5099 无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求
NY/T528 食用菌菌种生产技术规程

3 术语和定义
GB/T12728界定的术语以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1 罐压 (jar-pressure)：食用菌液体菌种生产过程中培养器保持的空气压力，单位：Mpa。
3.2 通风量 (quantity of aeration)：液体菌种培养过程中每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用V/V（培养基体积/通入空气体积）标示。
3.3 接种量 (inoculum)
3.4 液体菌种菌龄 (age of liquid spawn)：菌种接入培养基开始计算的液体菌种生长发育时间。
3.5 空消 (sterilizing fermentor)：利用蒸汽对无物料的发酵罐及附属设备进行加热灭菌的过程。
3.6 实消 (intermittent sterilization)：将蒸汽通入装有培养基的发酵罐中进行加热灭菌的过程。
3.7 摇瓶液体种 (liquid spawn in shake flask)：装在玻璃三角瓶内在摇床上恒温振荡培养的液体菌种。

4 要求
4.1 生产场地
4.1.1 基本要求：环境应干净整洁、空气优良、通风良好、水源充足且符合GB5749生活饮用水卫生标准、排水畅通、电源充足、交通便利。
4.1.2 环境卫生要求：应符合NY/T528食用菌菌种生产技术规程的规定。
4.2 生产设备设施
4.2.1 厂房设置和布局应符合NY/T528食用菌菌种生产技术规程要求。
4.2.2 发酵间应按照GB50073洁净厂房设计规范执行，地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，排水坡度1.0%～1.5%，排水沟必须是圆弧式不锈钢的明沟；墙角为圆角，墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水、易清洗。
4.2.3 接种间应按照GB50073洁净厂房设计规范执行，液体菌种接种间设置缓冲间：入口处设置洗手、消毒和干手设施；车间设封闭式废物桶，安装排气管道或者排风设备，门窗应设置防蚊蝇纱网。
4.2.4 主要仪器设备应配备水处理设备、液体菌种培养器、空气压缩机、空气过滤器、液体菌种接种器、高压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅炉、净化工作台、恒温摇床、恒温培养箱、冰箱、显微镜、磁力搅拌机、磅秤、天平、酸度计等。在经常停电的地方应有自备电源（发电机）。
4.2.5 主要生产用具应配备玻璃三角瓶、接种器、试管、量杯量瓶、玻璃漏斗、定量定性滤纸、精密pH试纸等生物实验室常规用品。
4.3 培养基质
原材料应符合NY5099无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求的规定。
4.4 生产品种
4.4.1 选用高产、优质、抗逆性强、商品性好的食用菌品种，应使用经省级以上农作物品种审定委员会登记的品种，并且从具有相应技术资质的供种单位引种且种性稳定。
4.4.2 菌种生产过程应符合NY/T528食用菌菌种生产技术规程的要求。

5 液体菌种生产工艺
5.1 工艺流程
原料 $\rightarrow$ 培养基配制 $\rightarrow$ 空消 $\rightarrow$ 实消 $\rightarrow$ 冷却 $\rightarrow$ 种子罐 $\rightarrow$ 发酵培养 (通入无菌空气) $\rightarrow$ 液体菌种。
注：涉及摇瓶菌种与活化母种。
5.2 制备母种
5.2.1 容器：使用18mm $\times$ 180mm或20mm $\times$ 200mm玻璃试管，试管应保持清洁、干燥。
5.2.2 培养基：根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基，常用的配方参见附录A。
5.2.3 灭菌：高压