【商检行业标准(SN)】 栎枯萎病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1271--2003
栎枯萎病菌检疫鉴定方法
Inspection and identification of Ceratocystis fagacearum (Bretz) unt2003-05-28发布
中华人民共和国
国家质带监督检验检凝总局
2003-12-01实施
SN/T t271—2003
本标准的附录C和射录E为规范性附录，射录A、附录B和附录为资料性附录：本标准由同家认证认可监督受理委员会据山井回口，本标准负斑起草单位：国家质盘监督检验检疫总局动植物检疫实验所，本标准主要起单人严进，吴品册，本标准案首氏发布的检验检疫行业标准。范
栎枯菱病菌检疫鉴定方法
SN/T1271--2003
本标准确立了人境探属（rr,)植物和其他栎枯粪病菌等主，包指原木，本制品（会木质包装(铺兹材料))和苗术的怀钻病菊检疫检测和登定方陆，本标准适用于对来自拼拍美病发牛国家和地区（见附录A)的所有标风粒物和据枯萎病菌其他等主的人境检疫。
2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。2. 1
传据介体medFasm
对于怪染性病害的病紧体起转移作用并包道妥人杀件的生物，如民虫，线出等。2.2
边树apood
树皮下较软的白木质。
异宗配含heterothailsm
苗体在性的配合上有雌携和（或）亲和力的分化·只有一定的异宗删体（一般以十和一或A，和A加以区别)才能配合。
3原理
3.1分类地位
枯美病［CraturytifuarmBreta）Hunt城真菌界（Fungi)，子囊苗（Agcomyeata)校纲（Pyrznomypetes），陈壳日（Sphaeriales），长啄壳科（Ophiostomate.rewe），长球完属（Crula:ystisEll.&Halst..
3.2寄主
标质QuereusL，，栗属CastanraMill，维同Cus/amusisSpacl和石据属LithucartusHl.的全部种，怀帖弦病菌可以通过奇丰原木、木制品和苗本或其上所擦带的传播介体在国际上传播。3.3监定原理
标估爽痴菌的寄主范国，传播途径、造成的植操症状（见附景D国4)和病原形态（见附录D图L.1、图E.2.图D.3)是据枯美病删校流整定方法的做据，4收器设备和实验用具
4.1仪器设者
立体显做境，生物显微镜（其润筑和测微尺）电了分折天平（量0.01g）首通天平（感盘0.1g）、距净工作台、生物养箱、高压火荫器4.2试验用具
等子、婚于、手持放大、培养皿、三角瓶（500ml..试（直径12mm）、尧怀(1000ml)、手术刀、手术剪、锻子，载玻片，益板片盘商、吸笋、酒精灯、SV/T1271--2003wwW.bzxz.Net
5试剂和标准曲抹
葡萄糖(CH,U:H)甲（苯)丙氮胞，萨酸二孵（KH,P,含量不少于93.）减酸策（Mg50-H,0含最不少了99.0）疏醛铁[Fe（S门,：xH,0含量以Fe计21,0~23.0%翻锰(MrSU含量不少,0%妞单锌（ZnSO,?H含量不少于S9.G%），维定本H5.2标准商炼
Chratystisfagdera(BreauatA,和A：棉雅南课6抽样
格货物总件数0.5%-~5%拍查,500件以下池声3件~5件,501件~~10C件抽查6片~10件1001件-300件抽套11件25件.3001件上，每增加500件抽查件数增加1件7检绘方法
7.1现场检验
将披取的原术或不制品或品木用并子或铝子分别横向知纵向打开·存细规察横断面和纵断面有无黑色承纹（梦死附录D），如带皮，则要检查树支利不质部之间是否有垫状菌丝层和边材上长否有传编体（及时B)。
标本带回实验率作进一步检验。7.2实验室检难
7.2.1分禹培养
采,再变获出液府母培养基或NFP培养基(参见附录C),用于病娠苗的分离、培养形状测定和恶种保存。
在锅色录效处取一块组织.切成4mr×1mru的小片，用0.%N=nCl表面灭菌5nia,无水冲追，效在直检9cTm的板培养茶上，每血效4片6片，于24℃培养内培荠，黑喷和光照（32Cmm4m)各12h交整，了后用显铺检查艺发现传媒介尾限：则须检查是补携带标枯要病菌，苔先进行鼠虫形态整定，再将其脏解，组织比用上违方法分离培养，
7.2.2形态观
从荫游中挑收少量培养场，以水作浮载前，制成戒片，在最微饶下观案。如为CeraroeysisuuM的无悼阶段，四可观亲到分生孢于梗和分生孢子。详细记录并激量分生孢了于梗和分生孢子大小。
用直径1mm的打孔握表菌落边缘的座此两块分别在两个NFP培养基平板的一；用同法分别取标准率或Crrutryst'sfanaceurwmA，和A，交配型的盘快各一块.分职放在上述半扳培新圣的另制，于叫下落获了～d。月立体显微镜现密同一平板培菲基的两齿落交界处是否产生子套充，挑取两菌落交界处产生的可囊壳制吡玻片，于显微镜下观察。与A：交配型菌落交界处产生子囊充刻待据菌快为A交配型，如与A，充配型菌落交界处产生子雍充，列等测菌袜为A，交配型划过子囊走，子囊和子衰括子大小，并作洋细录。8鉴定标准
1米问的[，，标准菌标保将冷变实验所8.1,1普养形变
SN/T 1271—2003
菌落呈城毛状，厚」mm~3mm.初为白色，后为谈东色至英绿色，常有据色斑块。菌丝线有两签色至调色.5um~.6m，落中泛能形或卤核，燕钱蒸裕色丝熙色，质地松，形状不定，直径可达2.5m。此外，还可形成一种做色罩昼抢子8.1.2无性器真量富形态
分生孢了内生，无色，单池，四简形，假端平载，大小为（2μm--4.5μm）×（4m~-22mm）在塔非基上叫可形成分生孢子链，分生子梗分枝或不分校毫么.5产m～5Tl长20%~B0m，淡色率累色，有分闲，项端逐渐变尖(枣见附录D用1),8. 1. 3有性效殖器官形态
子囊壳单生或丛生，黑色，瓶形，基部球形，直径240m38VMm几乎个于茶质内，子餐充具有长吸嗪长250m+450以m，项端生有无色状物（参见附录D图D.2)，于囊球形到近球彩，最大卓径？m10m内含八个手塞瓶子，子套泡子单题.无包摊形，微弯大小为（2m~3m）×（Mm1m参见附录图13），子囊望晶消解，成熟后，子毒跑子从孔口两出，案在自色粘中翌小流妆,在水中不易分散。
9运采划定
如症状利分离物的各形态特征分别与摘违的症状和病原菌形态相吻合，日可将定火erazocisfagarearu(Brerz)Hunt,
I0样品保存
10.1菌种保存
分离到的Ceratocysrtsfaracearam·菌种，应转人试件斜面上，运于15限瞻条件下保存至少：2+月，以备复题、读判和仲载，
10.2传病介体保存
捕缺的传病医些除用于分商病原苗外，式余的应使其在质至检验鉴定先感然后制标本。尽垦保持其身件各部位的完整证、
1C.3检瞻接告与资料保存
检验报告内容包据，样品案源，神类、数量，实验日期.古法、结等，并要有检验人员整字【参死附录F).实弦原始记录以及标本和照片等资需保存完随，以便需要对变检，涉判和件裁。11现核
出函家质晓督检验检总局指定的单位或专家负资。主要复换分高到的通种和搏获到传病已虫鉴定的正确性，实弦原始记录、标牛和照片资料的完救性。SN/T t2712003
A. 1欧别
时景A
（资料性附案）
振枯尊柳首CararacysrisJagacearum（Bretz）Huni世界分布保利亚，被兰、马尼亚。
北繁酬
英国（阿肯色、印地安纳，伊利诺斯，依阿华，烘萨斯片塔基、马甲兰，密执安，明尼达、齿州单、内布拉斯加.北卡罗菜钠、南卡罗莱钠、南达料他、俄家俄、概克拉马、宾今法尼亚、田纳西、得克萨斯，兆吉尼亚、西弗尼亚、威斯康星
B. 1 果实再尾甲围
C,Inguoris
E.2医尾甲属
附录B
【资轻性附率】
样枯蔓病菌Ceratocystisfagacearum（Brelz）Hnnt传病蝶介Cargophilus Stepheng
Gtischrochit as Reiffer
G.sanghirofentus
G.quadrisigratus
G. fesiarus
B.3期小藍属PseadopitynphturusSwiainP.minurissimus
P,pruitnsis
毛束小套
Scotyras iniricetusRatzeburgSN/T1271—2003
SN/T 1271—2Q03
C, 1 变醇浸出脏醇母培养基
（规范性附晕）
培雅莱民方
芬设山满
称脂粉
先调酸鹿至pH6.0,然后在151b.或13它下灭菌15m。C.2NFP\:培养基
硫萄神
甲(华)丙氨酸
磷酸二氢钾(KH,P)
抗酸镁（Mgs,）
现酸铁(Fe(S,)
疏酸锰（MnS),)
硫酸锌（2S0,）
唯牛索H(VitaminH)
琼脂粉
燕馏水
在1511，或121℃下灭酋1501
2）FP，南京称业大学（原生京体产工业学院）乘林病型教研组配方（均自植物检疾物江农业大学工-一一上海科学长太出版社075，
附录D
（资料性附索）
病原菌形态示意图和症状
图I.1栋枯姜病菌分生抱子和分生地子梗即D.2标枯萎病苗子豪壳
SN/T1271—2003
SN/T1271—2003
袜枯萎病菌于囊孢子
田D.4标古萎病菌造成标树边材上黑色条斑祥品
将业国索或地区
欧输疑整及方式。
检疫要求，
鉴定疏采
检验日期，
控验疗泌，
站果：
实验审有任，
(规范性谢录
检空些定报告单示例
数度/黄置
均种位地区：
验监,
单安创责人：
(蓝章)
日期：
SN/T1271—2003
市批号
取详对间
SN/T 1271—2003
誉考文
[1］中毕人民共和国动摘物疫局了”中国进境植物检变有书生物选编中国衣业出版片[]应传光1植物学名词解释-病理分册和学出版社E3
斯江农业大学汇编187a植物疫上海科学技术出版社Bretz T, w.ig52 The Ascigerous Srage ol the Uak Wilt Fungus Phytopathodogy 42:135-43?-5.
Henry B. W. Is44 Caalare qucreine n, sp. , ine cause uf cak wil Phytopathology 34 re3i ·535La] CAAT & FPPO Taa Qalan'n Prs' far Fnujie zrFalitiunCAB Imierniunal(OETP/EPP() 1997 Data sheers pr guaraotise organisms No.s Ceratocystis fagaceer.m JiulletirOEP2/EPPOBu.lecinU(2)
1MT 1923 's!-iluli Mus : Pln' istr+ Nu. 2sdelinen-CAB Ineritiuni.Splawa N. S et al. ls85 Blzestain of cak sapwand caused hy Cerairicystis Eagiscearam Sp:awixela-nia Komisja T'echnolog:; Drewna, Polandf,[oIRosteu B. e: ul. 19s, Vasetlar mycosis tisease af Qrruus peirzea in the easturn Star Pinninzmnn-sins Gnrsko-Stopanstv, 3R:$.50-:t_11] Ha-ing I', et al. 1932 Wi't disezse ct sessile uns(Quereus Fut:aea Lieb. )caused by Ccrz.tocystisFagazeurum.Bretz.Hur.t Cantnibcti-Botanicc.7?-3s10
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