【商检行业标准(SN)】 出口食品中B群链球菌检验方法

中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN/T 0477-95
出口食品中B群链球菌检验方法
Method for deleclion of group B streptococci in faods for export1995-09-06发布
1996-01-01实施
中华人民共和国国家进出口商品检验局发布中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中B群链球菌检验方法
Method tor deiecilon of group B Bireptococci I ropdg for export1主题内客与适用范因
SN/T 47795
不标准定了存编羊l惊脂平板上.用CAMP（Chrlstie、Atktng、Munch—Petcrgen的缩写>试塑作为对出口食品中B群链好函按收力法去标准适用于出「1肉类，奶和奶制品中B样链效菌的均验，其他食品可梦熙使用，2设音和材料
2.1离机5000r/mn，离心片50mL，10mL2.2葬天选器。
2.3微孔德膜孔轻1.45m。
2.4玻抽滤瓶。
2.5玻璃水循形真空泵。
2.6电热机温箱温度20~-60
2. 7要微资。
2.8定性滤纸。
2.9不钢氧菌增养。
2.10电冰箱。
2.T1事体研捧或均质器。
2.12工形玻梯。
2.13余黄色面萄球萄菌味 ATCC-2.923,3培养基和试剂
3.1Todd Hrwilt因参见附录A<补充件A17.3.2牛心汤培基梦贝附录A（充件A23.3选择生牛心涵增苗增养薪（优附求A（款充件)A3：3.4牛心汤琼赠附录A（补充件)A).3.5绵单立统脂平报惠见附录A（补亲件5）3.6溶血素参见附录点（补充件)A6)3.7B-落止素带参贝附录A1X充件)47，3.日绵球附录A！补充件A8].
3.9星抑盐本：或尚的5.85%NsCl.3.1苹兰氏染色液见附录A（补充件）A0元3.11按触醇（过氧化群）试验参见附求（充件）1中华人民共和国国率进出口商品检验同1995-09-06批准httn：
1996-01-01实施
4样品的制备
4.1肉类
SN/T0477—95
4.1.1冷冻产点应存2~~5C过夜解床，或在45C及以下经15min解陈.文即格雅。着不能及时按将，应受十一15左右骨存。其他非冷冻易腐的食品，应鼠于4冰箱保存。4..2以无菌操作称取剪范肉类样品25·置于灭商之乳内或均质杯内，入25ml灭菌生理带水进行研磨或均质（%000--10000r/min+均质1nim），移人盛200m生理益求的5(00mL，广口瓶内，混会均可.制成1：10筛疫，4.2奶都奶制品类
4.2.1鲜奶、酸奶，以无菌手缤去掉瓶单纸盖，瓶口经火均灭菌后，月无菌操作吸25mL检样，放人装有225ⅡL火菌生理益水的二用烧瓶内，报摄与匀4.2.？站粉，以无虚于续开封取单，称取25%放人能有25m热的灭菌生理盐水装有适量率玩范灭密」瓶内·据违使其充分落解混汀，4.2.3奶酪，先用灭茵刀削去郁分表函封蜡，然片用点崧范酒精棉沫火菌表面后，用灾菌21切升奶醋，再用无菌圾作切收志和深检样25，置十火用乳内动萨，加入25ml牛理盐水研成相次，格入需有2CmL灭菌生理盐水的11瓶内.绳合均列。制成11释择液。4.3其他食品
样品的制各求决干食品的种类和状态。店体或半同休食品楼4.1.2或4.2.3进行，液休食品按4. 2. 1走行。
5检验步骤
5.增菌培茅
上然制爸的抢样各取1心m分别接种于101nL牛心齿培茅基内如粒样污策较产重可时按上述量按种于选挥性牛心汤增菌液内.经35士1C培养15h，可进行CAMP-带或CAMF-点试验：5.2CAMP试验转条件
将C4网P试验的缔羊血坏脂平板写于不锈钢质氧菌落关道内，在5士1心培养。5.3CALMP带试验
取溶素带1~-2条平行轻贴于缩羊上琼脂平板上、间距20m血，将样品或经过增诺的培养物直接车-删我带两期（推取3~5mm处）乘划线3~4条或布接钟，经14~5h培养后观结果。如在接种线与3溶血紊周围麟肢溶血区重叠处能见攻协同产生清晰的前头\达的增强溶血区为刃性反应，可鉴定为月群链球菌，不见境提熔血阴性反应，判为卫群链球菌性。5.4CAMP-点试验
将样品或经过增菌时培养物直妾划线或用I.形获璃降涂布接种于绵羊血琼脂平板上+经14～18万密举质，用接种还取游血帝范作以形穿起，细小的可疑为链球激的单个感边数，再将平板进行学，分别在30，45，的mi检查搭血变化情况，在加将血素的酋落边续有协而产生痴长”增强游区的为问性应，可签定为B群链球菌，个出规现增强立现蒙的为肉性反成，判为非群钝球苗。每次揽验时都要过已判性菌荣作为对烈试验。5.5C.AMP-节或C4MP-点试验险性反度，亚进行革兰氏弹色，度验和接科酶式验.以此来与其他落血性纸菌如李所特民菌，内毒快状茅胞计菌和葡商球菌等区别开。6报告结果
6.1CAMP-节成CAMF-点试验性-细菌形牵相符，革兰氏阳生，長触酶附生+报告B样链球菌性：6.2CAMF件或CAMP·点试验医性.报告B群链球菌明性。品欧伴网
A1Todd-Hewlli肉汤
牛肉没液
强自陈
10 mol/L KaOH
N..HPO, + 12H,0
1occ mL
SN/T 0477
附录产
培养基和试剂
（补充件）
将许成分溶解说pH7.各：分装在150正烧瓶中,每瓶Innml..代11=亡下灭菌20 mim.42牛心汤培辨基
心经商可以用牛肉膏5g禁愉水1000ml.代节）1c05ml蛋白陈
葡莓糖
MO,12HD
将各成分弃解冶,加人1 mol/L.3%Na0H,校正pH7.4,分装试管中，每件10 mL,于115下高压灭弟20min.
A3选择性牛心汤增菌培排基
牛心涵培养考
一氨化韵
结品紫
1 occ mL.
除结品紫外将其他成分混台，弧热溶解，发正?H7.4，再列入纠品紫.充分混个铲解后分装1试管内，书香10rml.，了115下高压灭菌mta，A4牛心汤琼脂
牛心漫可以用牛肉高，蒸密水代替）蛋自陈
橘萄锦
bt
NHPO,-12H.0
琼脂粉
SN/T 0477-95
将各成分游解片加入1mot/3N>1I.楼正5[7.4.周人脂粉12，」115下高压灭菌20 min..
A5绵单血琼脂平板
将牛心汤统瞬加热将化片，往冷部到50（时，加经洗过的约羊而或5，能转混含划的，俩注平板冷凝备用。
A6溶血薪
将金黄色葡街球出ATCC-2=$23当袜接种在Tartd-Henitl肉业，千3511T:坐长18b.培养减以3500r/min离心1mm，乳其上液，用炎与微孔滤慎美费民泌器作真空抽然险英，感减零P资血兼。分赖在灭菌带盖小瓶内每册！mI.冰冻保存，备用。A7β-溶血衰带
把灭菌的定性读红条（约m×点4m浸袍在装有自溶血来的带案放瑞瓶中，则制成3络血索带。丝4么箱中备用，
A8统单血球制备
将光菌新来绵羊血，用一倍灭生理垫本以230t/min离心1irin.弃洁上清滤，选两次最后用生理盐水将血牌甚浮到京体识
A9草兰氏染色液
A9.1站服素染色液：
结是素
新%乙醇
1岁草像教水游液
将结晶紫溶解于之醇中，数后与草酸铵落触滤合A9.2蓝兰氏棋液：
磷化钾
将碘与碘比铜光迷行妮合，加人蒸询求安许，充分报播待完全浮晖后，再加热馅水至300m，9.3克染商：
95%之醇
燕馏术
将沙黄落饼十飞醇中，然后用然愉水理。49.4染色法：
A9.4.1将涂产在火增上固定,滴圳结品紫在他液.染1nr.水洗，49.4.2滴加革兰氏碑液，作用：min.水流。A9.4.3滴95%乙说约50：或将/养缩情整个涤产，立即恤大再片乙醇滴满格个送斤，脱点4
欧伴ht
105。
SN/T 0477—95
A9.4.4水洗，滴友染液，减菜1min水缆，待干，镜检，A9.4.5结果，草兰氏阳性菡呈笨色，革兰氏阴生茵呈垒色，附录Ⅱ
接触酸（过氧化氢酶?试验
（补充件】
B1试荆
2%过氧化数潜液，管月时配制，B2试瞻方法Www.bzxZ.net
挑取固体培养基上菌落一按种坏，置于造净试管内，或涂于十净的载较片上，然后分判液加%过氧化氢潜液2mL.或滴观察结果：H3结果
下0.5mim尚发生气推氧)者则次播糖酵阳性反应（商微球密）.不发生气离者为因生反应（链球菌）
谢加说明
本标准士中华人民共和国国家进出口商品检验员提出本标准由中华人民大和国医西进出口南品检验局负志其，本标谁主要起草人卢敬室。
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