【商检行业标准(SN)】 住白细胞虫病诊断方法 显微镜检查法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1225—2003
住自细胞虫病诊断方法
显微镜检查法
Protocol of diagnostic method for leucocytozoosis--Microscopicexamination
2003-05-28 发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2003-12-01实施
本标准的附录B是规范性附录，附录A是资料性附录。本标准由国象认证认可监肾管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准起章人：范方红、刘友君、钟安清。本标准属首次发布的检验检疫行业标推，SN/T1225—2003
1范围
住白细胞虫病诊断方法
本标准规定了住白细胞虫病鉴定的方法显微镜检查法
本标准适用于佳白细胞虫病的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。2诊断原理
SN/T 1225—2003
本标准是来用显微镜检查染色的血液涂片和器官组织切（压）片来对住白细胞虫病进行确诊的。任白细胞虫的发育（参见附录A)包括裂殖生殖、配子生殖和孢子生殖三个阶段。第一阶段及第二阶段的大部分在家禽体内完成.第二阶段的一部分及第三阶段在吸血昆虫体内完成。不同种住白细胞虫在家禽体内的生活史基本相同，其在禽体内的配子生殖阶段分为五个时期。如从病禽的心、肝、脑等脏器、肌肉或血液中找到裂殖体或配子生殖中五个不同时期中任何一个附期的虫体即可确认。3器材与试剂
3.主洁净的藏玻片、盖玻片、75%酒精棉球、灭菌注射针头、研钵、棕色小[\试剂瓶、染色缸.显微镜。3.2甲醇双蒸水、2%和 10%姬姆萨氏染色液(见附录B),中性纯甘油、牛理盐水。4操作方法
4.1血片检查法
4. 1.1制备血液涂片
取无油脂的洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片为推片，用左手的拇指及中指爽持载片，右于持推片。先以75%酒精棉球消家离的翅下小静脉或头冠并用消等的注射针头以消毒处采血一小滴，放于载片的右端，将推片倾斜30℃40℃，使其一端与载片接触并放于血滴之前，向后拉动推片，使与血滴接触，待血液扩散形成一条线后，以均等的速度轻轻向前推动推片，使血液均勾被涂于载片上形成一薄膜。待血片白然于燥后，滴甲醇2滴～3滴于血膜.l.1min使其固定，然后染色。4.1.2血液涂片染色
取10%姬姆萨氏染色液加于固定好的血片上染色20min～0min，然后用蒸馏水冲洗2min~5mi，晾干后镜检。也可以将血片真立于2%姬姆萨氏染色液内过孜，取山后用蒸馏水冲洗，晾十，镜检。
4.1.3显微镜检查
油镜下斑红细胞变形，少数细胞被裂。在红细胞和白细胞中均有不同发育阶段的虫体（配子体）典型的配子体出现在白细胞中（参见附录A），虫体近圆形，有一个染色较淡的核。宿主细胞核呈染色较深的带状，环貌虫体的一分之一。整个宿主细胞呈近圆形。4.2器官组织小结节压片检查法下载标准就来标准下载网
4. 2. 1制备器官组织小结节压片挑取肝脏、心肌、胸肌、脑或肾等处结节状小白点的病变组织一小块（米粒人小），于载玻片上，滴加2滴一3滴1*1甘油牛埋盐水，用另一载玻片按压数次，使片.1组织块变薄，液体浑浊，然后盖上盖玻片，待镜检。
SN/T 1225-2003
2显微镜检查
普通光学显微镜下检查，可见大量的裂殖体（灰色，球形）和裂殖子(参见附录A)。结果判定
通过血液涂片检查法或器官组织小结节压片法检查，只要在显微镜下找到配子生殖无个不同时期中任何一个时期的配子体或裂殖体(参见附录A)即可诊断为住白细胞虫病。2
附录A
（资料性附录）
自细胞虫（卡氏)的发育史
SN/T1225—2003
不同种住白细跑虫在家离体内的生史基本相同，现以鸡卡氏往白细胞虫的生活史（见图A，1)为例说明。
孢子生殖
卡氏住自细胞虫生活史
鸡卡氏住白组胞虫的生活史包括三个阶段：裂殖生殖（见图人，2）、配子生殖（见图A.3)和孢子尘殖。第一阶段及第二阶段的人部分在鸡体内完戒，第二阶段的第一部分及第三阶段在库螺体内究成。A.1裂殖生殖
根据秋叶(AkibaK.）等1968对人工感染鸡的研究，含有成熟子抱子的囊，在库螺叮咬鸡体时进人鸡体内，子孢子首先脊生于血管内皮细胞（宿主细胞)在这里，子孢子可以繁殖形成十几个裂殖体，于感染后日d一10d，宿主细胞被破坏，释放出裂殖体，并从血液流转到其他寄生部位，主要是肾、肝和肺，其他器官组织如心、脾、胰、胸腺、肌肉、腺骨、肌胃、肠道、气管、卵巢睾丸及脑等也可寄牛。从血管内皮细胞释放出来的裂殖体在上述器组织内继续发育成熟，到第14d～15d裂殖体破裂，释放出成热的球形裂殖子。这些裂殖子可以：a）再次进入用实质细胞形成肝裂殖体；b）被巨噬细胞吞食从面发育为巨型裂殖体，c）进人红细胞或白细胞开始配子生殖。肝裂殖体及巨型裂殖体可重衰繁殖2代-~3代。3
SN/T1225--2003
A.2配子生殖
成熟的裂殖体进人血液后，即开始配子生殖阶段。这一阶段的大部分，即从成熟的裂殖体进人血至大小配子体的发育成熟，是在鸡体的米梢血液或组织中完成的，宿主细胞是红细胞感成红细胞及白纲胞。配子生殖后期，即大小配子体成蒸后释效出大、小配子是在媒介昆虫一一库蟒体内完成的。Pan(1962)和秋叶AkibaK.）(1968)把卡氏住白细胞在鸡体内的配子生殖阶段分为五个时期。A，2.1第1期从成熟發殖体释敢出的虫体尚未进入宿主细胞，仍散在于血浆中，涤片中见到的虫体卵圆形，直径为1.0xm×1.7um，钝端处有红色咽形的核，细胞质为淡肯色（姬姆萨氏染色，下同）A,2.2第Ⅱ期:虫体已侵人红细胞或成红细胞中,其大小与第I期相尚,但可见小颗粒。每个红细胞刊寄生1个～7个这样的虫体。
A2.3第孤期：这是一个过渡期，虫体已并始生长并明显地比第Ⅱ期大，但还不能区分配子体性别，即还分不出大配子体和小配子体。此期虫体可在宿主细胞内，也可游离于宿主细胞外，其大小为11. 0 产mX9, 2 产m,而箱主细胞也增大到 15. 1 Ar:× 13. 6 μzn。此期虫体在末梢血液涂片中的捡出率低，但肺,脾、肝、肾等组织切片或脏器涂片中可大量见蓟。虫体的细胞质均勾著色，设有浓染的颗粒，校较第期和第期虫体大，
A.2.4第期：虫体在宿主细胞内或外寄生，已能区分出大配子体和小配子体。其大小及染色情况与第V期没有多大差别，但在末梢血液涂片中还较少见到。此时宿主细跑增大至20.9μm×17.7m，而虫体大约是15.1mx13.6μm
A2.5第V期：已完全从宿主细胞内游离出来，大、小配子体明显不同。大配字休细胞质丰富，核较小，圆形核约3.5μm×5.0μm卵圆形核约2.0um×7.0μm。小配于体细胞质少.核几乎占去安体的全部面积。此期虫体在末梢血获涂片中容易找到。整个配子生殖阶段所需时间为8-12，也就是说，果把裂殖生殖的14d～15加起来，即从子孢子感染经过裂殖生殖到形成成熟的大、小配子体，鹭个过程所需时间为22d--27d，平均虑23d。A.3孢子生殖
在求梢血获中的大，小配子体在库嫁吸血时，进人库懿的胃内.并在其胃壁里迅速发育形感大，小跑子，大,小配子络合形成合子，以后逐渐增长，成为平均是21.1 μtn×6.87m的动合子,继而发育成卵囊。戒熟的窕塞含有大量的子孢子,具有感染力，聚集在摔蝶的睡液腺及口器中，一有机会便会随浑螺的唾进入鸡的血液中，使之感染。从大、小配子进人库体内到形成具有感染力的命囊，需时约2d～7d。形成于孢子的最适温度是25吃，在此温度下，2d即可形成。图A.2
卡氏住白细胞虫裂殖体
雄配子体12-
雌配子件
卡氏住白细胞虫配子体
SN/T1225—2003
SN/T1225—2003
A.1姬姆萨氏染色原液配制
附录B
（规范性附录）
姬姆萨氏染色液的配方法
取市售姬姆萨氏染色粉0.5g，中性甘油25mL，无水中性甲醇25mL。先将姬姆萨氏染色粉置研钵中，加少量甘油充分研磨，再加再磨，直到甘油全部加完为止。将其倒人60mL～100mL容量的棕色小口试剂瓶中；在研钵中加少甲醇以冲洗甘油染液，冲洗液仍倒人上述瓶中，再如再洗再倒人，直至25mL甲醇全部用完为止。塞紧瓶塞，充分摇句，然后将瓶受于65℃温箱中24h或案温下3d-5d，并不时摇动，此即为原液。
A.210%和2%姬姆萨氏染色液配制染色时将姬姆萨色原液10 mL利2mL分别加双蒸馏水到100 mI.,即为I0%染液和2%染液。
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。