【农业行业标准(NY)】 转基因植物及其产品检测通用要求

丰环难由农业部科技教育司按：前言
NYF5/2—2003
本标准起草单位中区农业科学究拮物保护研究所、中国农业科学院生物技术所、装业部科技发展中心，中国农业大学，
木标准上要起章人：丁发、王锅锋李宁、张大、罗云、费昆仑、证其怀、贸士果。本标难首次发布
1范围
转基因植物发基产品检测
通用要求
NY/T672—2003
本标准规定了转基因植物改其产胜检测的通用要求及转基因植物PCR检测实冷室的操作规范，本标维适用于转肽因植物及其产品中转基因成分的检测.2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡尺亡日期的引开文仰，其随后所有的修改单（不包括期的内容或偿订版均不适用丁本标准，然而：鼓励根据本标催达成协议的各力别究是否可使用这些义行的量新版本，从是个注口期的引用点件，其展新版本适用于本标准，GT/154812J0检所校准实龄室俄J的通内要求GB/T6682分所实验室月水规格和试验方法NY/T673转基内拉物其产品检测抽样NY/T671转基围拮物效其产站检副DVA取和纯化G转果内植物及共产品检硬大互定性PCR方法NY/T675
3本册和定义
下划术语和定义造用于本标准。3.1一摄术语generalterms
转画因生物genelirallyuwditied urganum（GMO）适过基因1理技术费变基因组树成的生物。包括转基四拍物，动物利械生特：3.1.2
转基因物weneticallymodifledplantrganism(fiMPj.1rnusgerieplunt通过基因工愁技术改定减因纠构成的枯物，足转基因生物内·类。3.1. 3
定性控副极限detectinu limit
以转款医尘物（如种卡)册取的DNA或标准双链LNA分于作为PCR反应的模板，所能检则到的脱氧核恢核酸（DNVA)的极限（需要确保旧性样品的纯度，才非达到本标准检测方法的灵敏度）。3.2与DNA握取和湾化相关的术语termsrelalivetaextractinnal nrificatiua时LNA3.2 1
DNA提取DNAextractinn
将DNA从·个样品的多种组分中分离来。3. 2.2
DNA纯化DNApurificuliun
获得不含PER反应冲制固子的DNA.NY/T672—20Q3
3.3与DNA扩增和PrR技水相关的术语lermsrelatlvetoDNAamplirieatiunandto1h:PCRtechninne
DNA扩增DAA Mmplifieuliom
体外放大DNA分于拷贝数的生物学方法.如PCR，3.3.2
扩增子amplicon
HPCR等INA扩治方达产牛的INA片段，3. 3. 3
彩含降游式反应（PCR）polymerasechainreactinn模板DNA经高变件为单链，在DNA聚合爵和适宜温度下，两条引物分别与模板DNA两条链上的一段补序到发生退火，排在[NA聚合降的霍化下以四dN1deoxyribontscleosidetriphosPhate.脱氧核甘三瞻）为底物，使返火引物延伸以而合成DNA，如此之性，退火合成工NA反复循环，使位可两段口知序列之间的DNA片秘呈儿何倍数扩增，3. 3. 4
引prinier
亲长度杠顾序的享核自践链。
师查检测法detecllonbyscreealng用多种转基固植物共有的标记基应、表达凋整序则等证用元件对被检产品中是吉含有转苯内成分进行PCR检测的方法：
身份检测法detectlumbyIdenlifiratian与标准品比较确定M身份的检方法。3 3. 7
把序列日的DNA）targetseqDence(targetDNA）PLR低应中控测特并性扩增的DYA作列.3.3. 8
旁邻片段（这界序列）borderfragseent(harderreglon，bordersequenee）插入在染色外上的外其因字列和窄主生物基围组儿段库接的DVA片段。3. 3. 9
整点法分析ons
和定性定或的分析方，如ETJSA-PCR，可对ILR反应的护增子进行定性定分析。3. 3. 10
实时分析reartlmeanalysls
一种热单ICR反应过格，对PR扩增效半，打增情况及效据迷行监控的定ICR分护方法，如究光探针的杂交过程的临应。
连接片段junctionfragment
两个十同需基因床列之间的在接序列或片段。3.4与对相关的术谱Lrusrelntivetoenntrnls3.4. 1
GMO阳性对熙GMOpoeitlvecontral2
州于PCR扩增的标准的LNA变转基固植物源材料的LNA分子，3. 4.2
CMO明性对照CMOnegntlreeontno用了PCR扩增的标准非转基内植物材料的DNA分工。3. 4. 3
PCH内部对票YCRiniernalcuntrulNY/T 672—2003
加人一种无关的[NA序列别纯化DVA的样品中，然后再进行PCR扩增，以检测是否存在PCR反应的抑制物质。
阳性 P(:R 对照payiltive PCR cunlrol用宫有日的序列的样品A进行PCR扩增。3. 4. 5
阴性PCR对照vePCRcontrot
用术含有日的的样品AA进行PCR扩增3. 4. 6
PCR 室白对照 PC.R hlank,negative reapent conirml以水或不含月的DNA试剂进行IER反应，以验证1CR反避过程中.个整污染。3. 4.7
阴性假定对密egtivepremisentrol在样品险测整个操作过程，散开PCR反应体系，以证需检测的操作环境中不含有目的基内片污染。
明性提取对照EkgitiveexIrictfoncontrnl以水悦为材料提取A，以证A的提和制备逆程中是否发生污染。3.5与探针相关的水培termsrelatlvetoprobes3. 5. 1
探针prabe
在引物之间的与的片段特性交的再核数酸链，3. 5. 2
内部探针Enternalprobe
标记的内部探剂：
内标准基因（内源多果基因enilogenonsreferencegene其有殖物物种专性日转习数忆定，退示等位基西变亿的保守[NA序列，可用于对毕因组其·日的国进行定量分析和验运PCR反应体系中是否存在冲制物质：马源删
转基因生物及其产品的定性利定量心R检测带包括四个求聚抽样：在·批物品中抽取其有状长性的材料：用于检测分析、样品TMA揽收和纯化：详品NA提取和纯化一般包括样品组组破碎、DMA蜂总和DNA从其他化合物十纯化等所个步环
DNA扩增：对日的序测进行PCR扩培，据期IR扩蹭产物。错果分析对PCR产物进行定生或定量分析，定试验样而是否含有转基因成分或确定转基3
NY/T 672—·2003
因度分的含量，
5实验室通用要求
5.1一般要求
转基内检物及其产品测验案一股要求按G3/T15M%1一200执行，5.2特殊要求
转准固披物及具产品检测实验实分为三个区，5.2. 1前PCK区
服FCR区专：用丁准备各种PCR反应林系，此区域监保持清活工净，而且没有来自分子克隆和样品准备的污染概，前1R区的试剂，世备和正水活塞式移液类应是专用的5.2.2样品准备区www.bzxz.net
详品准备区门用于详品的制备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应果取以下顶防措施：a！CR产物和带有要扩增的序列的TNA充降不生该区域迷行b）检测的机舒带人样品准务间此理，板据需要提取DWA，DNA样品用专门质护或士压活速式移浓器据作，防止在账报样品时有气奔胶函；e
！大体积群品用单地包装的无菌一次性移波管吸取注何时候都应等实验累利账手意，于衰要经常更换，尤其在提取DNA过程中每一步之间都恶更换。实验服要专门用于样战性备间，经常消：5.2.3PCH区
PCR区安门用于PC浪反成和反局详的处理，区倒用的所有试剂、次性据材和仪能部是用的，由于PCR实龄室所遇到的主要污莱源是前一次PCR过我的产物，因此前PCR区和PCR区之所试剂和人员不能混牵，实验室的交通方向是单向的，永远以“区”到\胎区”。6试剂
6. 1 通用要求
6.1.1用水应获合GBT6682中一级水的现答。B.1.2听有化学试剂如果让有特别说期监没有DNA和核游的污染·应不含R抑制剂：6.1.3所有减测应按照说明书要求进有保存6.244提取和纯化试剂
按4Y/T674执行。
5.30N4扩增试剂
按NY/T675拟栏。
/收出和设备
7.1通用设备按GB/1154812320执行7.2所石仅器设备应避免指物I外A和核酸酗的泛渠7.3所有议器设备，比其取样器等与试验样品按触的器其：应消洁、不对性配选感行架。7.4需装单品的咨器或包装袋应为一次性使用的，以避免交。8操作程序
8.1通用票求
变没可以控则或分析下列情况的对照：假座性：
低阅性：
存在干扰分折的物质：
分析物质降解：
降低检到方法的灵敏册，
降低分析物质国收率：
日.2抽样
白.2.1接照NY/T573的5法抽样
日.2.2灿取的样品应具有代表性，B.2.3根样过程中应整免样品救落，防土转基内植物及其产品抗牧。8.3实验声样品和试验样品的准与储存NY/T672—2003
9.3.1样品的制备方然现样品的状态和特性而定，固态样品的判备宜先粉牌至满定小A提取的技术要求，或用液惠渐磨至DNA充分释成非满足DNA抽提的技术要求，液态样品的制等定月經冲液成水充外滞涤，直举共中的1)N人完全十缓冲液或水中为止。83.2在搭收时席江明作记录样品易、牛产和包装条性，8.3.3样品在避试前后应放置在案闭的容器内防止交互污架，8.3.4择品应在保持组分不发生变化的条件下储存83.5易房兴的样量在分新前应根满需客在4V，一20心或一80储存，如有特殊要虚在无氧条件下储存：
8.3.6应光我借最条件和时前。
8.3.7存查样品虚安善保存3个月，检衡为GM(）的样品应要替保存6个月，以备复验，保存期網后，带经无等化处我！
8.4DNA摄取和纯化
DNA提取和化接照VY/T的万法
B.5定性PCR检测
8.5.1定性PCR检测按限我后或国际认可的方法852定PCR检测对家包括转内的的内.启动子然正子，标！基因等外源草四和亢件，检测时应设用忙对照，阴性对服，试剂空白时照和搬收空自对照，同时成检测内源准间，8.6以蛋白质为基础的检测
以强凹质为范础的检副按照我国或国际认川的方达。9运用质量保征措施
9.1检制物品的处盟按GB/T154512530执行，9.2检测结果质量的保证技G3/154812000中的5.9机：。10结果分析与衰述
10.1通用要求
检谢站果不宜表逆为分析样品不含转基因生物。102果分析
10.2.1通用要求
感下情税认为推品含有转需内适效必A：扩单段的特异性通过闻切诺.字Souhe:n杂实.1\CR-ELISA，点杂交或实时PCR区应进行了监正，月上述方送该特异性末发改变，片段人小致·而与阳性对照相同不含M的非GM别强不疗个任何扣似大小的扩增片段：E
NY/T672—2003
一新有对服和标准品都显示证带结典，2个行样品的检副结果应致。出规不一致的，应重做2个平行样吊，最统果以多数结果准。
定性PCR检测错果的表述
10.2.2.1在模板DNA的量能过测物种草因纠（内标准因?DNA量200L0倍范情说下按下列力式表述站果：
对于阴注结果：“该样品术检山义文×基\对性结果：“孩品检基因”：
10.2.2.2在模板DNA的并低干额测物种基四组（内标准.因)DNA昆20)00(1倍的情况下，按下列力或者述典：
对于阴性结果：“该样品中TNA含量不足，建议对样品做定量分析以确定所而格测方法的灵敏度”
对于浙性结果：“该样品检山X文X片图\：11检险报告
检验报告应包括下列内：
-，整定样品新需的所有信息；
引用的标难和,方法，并说明是定性还是定最方法及灵敏度！应州嘱种定量方法(繁点法或实时PCR)：接收群品和分析样品的大小；
样品的接收日期：
样品的分折凡期；
测成样品的大小！
检测结果，
测试中观索到的并何特辣情沉
对喆果可偿产生影响的任何其他异常情况。
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。