【国家标准(GB)】 变性淀粉 乙酰化二淀粉己二酸酯中己二酸含量的测定 气相色谱法

ICS 67.180.20
中华人民共和国国家标准
GB/T20377—2006/IS011215:1998变性淀粉
乙酰化二淀粉已二酸酯中
已二酸含量的测定
气相色谱法
Modified starch-Determination of adipic acid content of acetylateddi-starch adipates-Gas chromatographic method(ISO11215:1998,IDT)
2006-03-14发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-10-01实施
中华人民共和国
国家标准
变性淀粉乙酰化二淀粉己二酸酯中已二酸含量的测定气相色谱法
GB/T20377—-2006/ISO11215：1998*
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2006年11月第一版
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2006年11月第一次印刷
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GB/T20377-2006/IS011215:1998本标准等同采用ISO11215：1998《变性淀粉——乙酰化二淀粉已二酸酯中已己二酸含量的测定气相色谱法》（英文版），其内容和结构与ISO11215：1998-致。本标准的附录A、附录B和附录C均为资料性附录。本标准由中国商业联合会提出。本标准由中国商业联合会商业标准中心归口。本标准起草单位：江南大学食品学院、吉林淀粉批发市场、中国淀粉工业协会变性淀粉专业委员会。本标准主要起草人：顾正彪、张燕萍、洪雁、陈洪兴、钟立满、王旭、秦海丽、周心怡。r品纯体网httn·//nww.foodmatene1范围
GB/T20377—2006/ISO11215:1998乙酰化二淀粉已二酸酯中
变性淀粉
已二酸含量的测定气相色谱法
本标准规定了气相色谱法测定乙酰化二淀粉已二酸酯中已二酸总量和游离量的测定方法。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法ISO1666：1996淀粉水分含量测定烘箱法3原理
将待测样品分散在适当浓度的氢氧化钠溶液中，使已二酸从淀粉中彻底水解出来经过酸化后，用乙酸乙酯将游离的己二酸萃取出来；除去乙酸乙酯，并将干燥残留物甲硅烷基化。将样品注射到带有毛细管柱的气相色谱仪。采用庚二酸作为内标物。用水将游离的己二酸从淀粉中萃取出，酸化萃取液，然后用乙酸乙酯萃取水中的游离已二酸。甲硅烷基化后用气相色谱仪按上述方法测定。4试剂和材料
本实验中所使用的试剂均为分析纯。4.1水：所用的水需符合GB/T6682规定的三级以上。4.2蜡质玉米淀粉：商品级。
注：因为市场上销售的大部分淀粉已二酸酯的原料为蜡质玉米淀粉，所以选择蜡质玉来淀粉作为基准。如果合适，也可以采用其他原淀粉代替。
4.3已二酸（C.Ho0.）溶液：p=50.0mg/L。4.4庚二酸(CH120,)溶液：p=50.0mg/L。4.5氢氧化钠（NaOH）溶液：c=4mol/L。4.6盐酸（HCl)溶液：c=12mol/L。4.7乙酸乙酯（CHO2)。
4.8氮气：纯度99%。
4.9乙腈。
D甲硅烷基化试剂：双（三甲基甲硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA），其中包含1%三甲基氯硅烷4.10
(TMCS)。
氢气：纯度99.9999%（如N60级）。氢气：纯度99.99%（如N400级或更高级）。4.12
空气：纯度99.999%（如S级）。4.13
5仪器
5.1玻璃反应试管：100mmX16mm，带有旋盖，内衬有聚四氟乙烯（PTFE）材质，采用橡胶密封，能够1
GB/T20377—2006/ISO11215:1998抵抗浓盐酸（4.6)的侵蚀。
5.2可调移液器：量程1.00mL~5.00mL，精确到0.01mL。注：移液器在使用前应进行校正，检验是否符合制造公差。5.3旋转振荡器。
巴氏移液管。
5.5加热装置：温度可保持在30℃士2℃。5.6气化装置：根据溶液特点，选择氮气流。5.7
超声波水浴：功率120W。
5.8气相色谱仪安装有毛细管柱，同时配有火焰离子化检测器和微机积分仪。色谱条件参见附录A。5.9
试验筛：孔径为800μm。
5.10螺旋式磨粉机。
实验室离心机：可在1100g离心力下工作。5.11
6取样
要求样品具有代表性，同时在运输或贮藏过程中不发生任何损伤或变化。7样品的制备
将样品过孔径为800μm的筛子（5.9）。如果样品不能通过筛子，需用螺旋式磨粉机（5.10）研磨，至其全部通过800um筛子。充分混匀样品。8操作方法
8.1已二酸总量的校正
8.1.1称取4份约50mg蜡质玉米淀粉（4.2）（精确至0.0001g）分别置于4个玻璃反应试管中(5.1)。
8.1.2用移液管（5.2)吸取1.00mL、0.75mL、0.50mL和0.25mL已二酸溶液（4.3）分别放入这4个玻璃反应试管中。
8.1.3在每个试管中分别加水（4.1)至溶液总体积为1.5mL，然后在每个试管中加人1.00mL庚二酸溶液（4.4)。使每个试管中都含有50μg庚二酸，同时分别含有50.0μg、37.5μg、25.0μg和12.5μg已二酸。
注：庚二酸溶液中可能含有少量已二酸，因此应准备第5支相同的试管，但不要加人已二酸溶液（4.3)。8.1.4轻轻摇动试管，直至淀粉完全分散。然后加人2.5mL氢氧化钠（NaOH)溶液（4.5）。8.1.5密封试管，并置于旋转振荡器（5.3）中振荡5min。8.1.6取下试管，在冷却条件下，加人1.0mL盐酸溶液（4.6)，混合均勾。8.1.7加人5mL乙酸乙酯（4.7），封紧试管，并剧烈振荡1min。8.1.8静置试管，直至溶液清晰分层。用巴氏移液管（5.4)将上清液（乙酸乙酯层）转移到-个干净的具有螺丝塞的试管中。
注：不要将水层混人有机溶剂层。8.1.9将试管置于30℃加热装置（5.5）中，用气化装置（5.6）在氮气流下（4.8）将乙酸乙酯彻底蒸发掉。
8.1.10重复8.1.7～8.1.9步骤至少三次，将干燥残留物收集到同一个试管中。8.1.11将干燥残留物溶解在0.6mL乙腈（4.9）中，并将试管封闭好，放于超声波水浴（5.7)中均质2min。
8.1.12加人0.3mL甲基硅烷化试剂（4.10），再将试管封好，并在超声波水浴中均质2min。2
GB/T20377—2006/ISO11215:19988.1.13将试管置于30℃加热装置（5.5）中，反应30min，使样品完全衍生化。8.1.14吸取0.5μL溶液注射到气相色谱仪中，详见附录A中的色谱操作条件。8.2己二酸总量的测定
8.2.1称取约50mg待测样品（蜡质玉米淀粉（4.2)精确至0.0001g），置于玻璃反应试管中（5.1)。8.2.2加人1.5mL水（4.1)和1.00mL庚二酸溶液（4.4），摇匀。8.2.3其余步骤参照8.1.4~8.1.14。8.3已二酸游离盘的校正
8.3.1称取4份约500mg蜡质玉米淀粉（4.2)（精确至0.0001g），分别置于4个玻璃反应试管中(5.1)。
8.3.2用移液器（5.2)吸取1.00mL、0.75mL、0.50mL和0.25mL已二酸溶液（4.3）分别放人这4个玻璃反应试管中。
8.3.3在每个试管中分别加水(4.1)至溶液总体积为4.0mL，在每个试管中加人1.00mL庚二酸溶液（4.4）。使每个试管中都含有50g庚二酸，以及分别含有50.0μg、37.5μg、25.0ug和12.5μg已二酸。
注：庚二酸溶液可能含有少量己二酸，因此应准备第5支相同的试管，但不要加人已二酸溶液（4.3）。8.3.4密封试管，置于振荡器中振荡16h。8.3.5取下试管，在离心机（5.11）上以1100g离心力下离心5min。8.3.6将澄清的上清液转移到一个干净的玻璃反应试管中（5.1)，加入50μL浓盐酸（4.6)和5mL乙酸乙酯（4.7）。
8.3.7试管封紧，并剧烈振荡1min。8.3.8其余步骤参照8,1.8~8.1.14。8.4己二酸游离盘的测定
8.4.1称取约500mg被测样品（精确至0.0001g），置于玻璃反应试管中（5.1)。8.4.2加人4.0mL水（4.1)和1.00mL庚二酸溶液（4.4)，摇匀。8.4.3其余步骤参照8.3.4~8.3.88.5水分含量
按照ISO1666标准测定样品的水分含量。9结果计算
9.1校正图
测定庚二酸和已二酸的保留时间，并测定校正溶液（8.1.3)中各组分的峰面积，参见附录B的色谱图。
将加到蜡质玉米淀粉中的已二酸的不同质量（ug）标在X-轴上，相应地，把已二酸对庚二酸的峰面积之比标在Y-轴上。通过线性回归法，画出工作曲线。对于每一个样品，计算出已二酸的峰面积与庚二酸的峰面积之比，从而从曲线中查出已二酸的质量。
9.2已二酸总盘和游离的计算
以干淀粉计，运用下面的式（1)计算已二酸总量和游离量：twa
式中：
（100-wm）
被测样品的己二酸含量（干基），单位为毫克每千克（mg/kg）；(1)
GB/T20377—2006/ISO11215:1998m,
从曲线(9.1)中读出的己二酸质量，单位为微克（μg)；被测样品的质量，单位为克（g）；被测样品（见8.5)的水分质量分数，%。结果精确至1mg/kg。
9.3已二酸结合量的计算
已二酸总量减去游离量即为已二酸结合量。10精密度
10.1实验室内的实验
对于这一方法实验室间测定的精密度具体细节参见附录C，实验室内测得的数据在样品浓度以一定的梯度变化和矩阵变化时不适用。10.2重复性
在很短的时间间隔内，在同一实验室由同一实验者采用同样的仪器、同样的材料、同样的方法进行的两个独立实验结果的绝对差值不应超过表1所列的重复性限(r)的5%。表1重复性限(r)与再现性限(R)
已二酸总量平均值/（mg/kg）
10.3再现性
r/(mg/kg)
R/(mg/kg)
在不同实验室由不同实验者采用不同仪器、相同材料、相同方法进行的两个独立实验所得结果。绝对差值不应超过表1所列的再现性限（R）的5%11实验报告
实验报告应详细说明：免费标准bzxz.net
样品完整识别须用的必要资料；取样方法；
一实验方法；
获得的实验结果；
若重复性已被核对，最后获得的结果。还应提及在本标准中所有的未列出的或非必要的操作细节，还要写出任何偶然的可能影响实验结果的细节。
rhttr/Faodmaton
A.1色谱柱
附录A
（资料性附录）
典型的色谱仪工作条件
GB/T20377—2006/ISO11215:1998内径为0.32mm，长度为10m；WCOT熔融硅胶担体，涂有CP-SIL5CB固定相，涂层厚度为0.12μm。
A.2操作条件
载气：氢气（4.11)：
氢气(4.12)：
空气（4.13)：
色谱仪工作条件
检测器：300℃。
A.4温度-时间程序
初始温度：
保持时间：
升温速率：
最终温度：
保持时间：
冷却温度：
100℃
25kPa(0.25bar);
50kPa(0.5bar);
100 kPa(1.0 bar)
25℃/min;
290℃;
100℃。
注：上述条件已经成功地应用于分析实验。r品佳dhttn//wwwfoodmaten
GB/T20377-2006/ISO11215:1998附录B
（资料性附录）
典型的色谱图
图B.1为一个乙酰化二淀粉己二酸酯玉米淀粉样品的典型色谱图。图中显示，已二酸衍生物的保留时间为3.2min，庚二酸的保留时间为3.7min.信号强度
乙酰化二淀粉已二酸酯玉米淀粉样品的典型色谱图图B.1
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附录C
（资料性附录）
实验室间实验结果统计
GB/T20377-2006/ISO11215:19989个实验室按本标准进行实验，对五个不同的乙酰化二淀粉已二酸酯样品（蜡质玉米淀粉为原料）分别进行测试。
获得的结果都是按照GB/T6379[1]进行统计分析，给出精确度的数据见表C.1和表C.2。己二酸总量的统计结果
消去异常数据后的实验室数目
有异常数据的实验室数目
可接受的实验结果
己二酸总量的平均值/（mg/kg）重复性标准偏差S./（mg/kg）
重复性变异系数/(%）
重复性限r(r=2.8×S.)/(mg/kg）再现性标准偏差Se/（mg/kg）
再现性变异系数/（%）
重现性限R(R=2.8×SR）/（mg/kg）9
注：参考文献[2]表明用此方法获得的结果精确度较高a
所有的乙酰化二淀粉己二酸酯样品的原料皆为蜡质玉米淀粉。表C.2
消去异常数据后的实验室数目
有异常数据的实验室数目
可接受的实验结果
已二酸游离量的平均值/(mg/kg）重复性标准偏差S./（mg/kg）
重复性变异系数/(%)
重复性限r(r=2.8×S）/(mg/kg）再现性标准偏差Se/（tmg/kg）
再现性变异系数/（%)
再现性限R（R-2.8XSR）/(mg/kg）9
己二酸游离量的统计结果
a所有的乙酰化二淀粉已二酸酯样品的原料皆为蜡质玉米淀粉。r品h网httn//wwwfoodmatene
GB/T20377—2006/ISO11215：1998参考文献
[1]GB/T6379-—1986，测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性
[2]SandersP.AndBrunt，K乙酰化交联淀粉中已二酸总量测定方法的改进，Starch/Starke1994,46(7).255-259.
[3]SandersP.AndBrunt，K.已二酸酯交联淀粉中游离已二酸含量的气相色谱测定方法，Starch/Starke,1996,48(11/12)：448-452版权专有侵权必究
书号：155066·1-28229
GB/T20377-2006
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