【国家标准(GB)】 食品中栀子黄的测定

GB/T17335-1998
子黄作为食品着色剂已经列入GB2760一1996食品添加剂使用卫生标准最大使用量0.3g/kg。目前日本用气相色谱方法测定，我们用高压液相色谱法测定。本方法快速、准确、精密度好。本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责起草；卫生部食品卫生监督检验所参加起草。本标准主要起草人：李严巍、王梅、杨祖英。本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施
1范围
GB/T17335—1998
中华人民共和国国家标准
食品中子黄的测定
Determination ofcrocin infoodsGB/T17335—1998
本标准规定了食品中栀子黄色素的高效液相测定方法和薄层色谱法。本标准适用于饮料、酒、糕点中子黄的测定。第一法高效液相色谱法
2原理
样品中子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，子武是子黄的主要成分，为对照品。3试剂
试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.1甲醇。
3。2石油醚：60~90℃。
3.3乙酸乙酯。
3.4三氯甲烷。
3.5姜黄色素。
3。6子武。
3.7子武标准溶液：称取2.75mg子武标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27.5μg/mL子武。3.8子武标准使用液：分别吸取子标准溶液0，2.0，4.0，6.0，8.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，5.5，11.0，16.5，22.0μg/mL的子武标准系列溶液。
4仪器
4.1小型粉碎机。
4.2恒温水浴。
4.3高效液相色谱系统：WatersM501泵，U6K进样器，岛津RF-535。荧光检测器，Bluechip/PC计算机和Baseline810色谱控制程序。5分析步骤
5.1样品处理
5.1.1饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0.4μm过滤，滤液备作HPLC分析用。5.1.2酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。5.1.3糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3～5次，每次30mL，直至提取液无子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液于冰箱备用。
5.2测定
5.2.1HPLC参考条件Www.bzxZ.net
中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施
GB/T17335-1998
色谱柱：粒度5μmODSCis150mm×4.6mm流动相：甲醇：水（35：65）
流速：0.8mL/min
波长：240mm
5.2.2标准曲线
在本实验条件下，分别注入子武标准使用液0，2，4，6，8uL，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子武浓度作标准曲线。5.2.3样品测定
在实验条件下，注入5μL“5.1”项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中子武含量。6结果
6.1计算
按式（1）计算。
mx1000
式中：X——样品中子黄色素的含量，g/kg；进样液中子武的含量，ug；
V——样品制备液体积，mL;
一样品质量，g。
6.2本标准的检测限、回收率、精密度。(1)
本方法子武的检测限为3.2ug/mL，子黄色素浓度在0.2～0.3g/kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为94.1%，92%，91.3%。相对标准差（R.S.D）%：2.69,4.70,3.20。
第二法薄层色谱法
1原理
小样品中子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓
缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。
2试剂
所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。2.1甲醇。
2.2乙醇。
2.3乙酸乙酯。
2.4丙酮。
2.5甲酸。
2.6三氯甲烷。
2.7硅胶GF254：薄层色谱用。
2.8展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水（5：5：1：1）2.9展开剂：三氯甲烷：甲醇（6：3）。3仪器
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3.1全玻璃浓缩器。
3.2薄层板涂布器。
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3.3玻璃板，4cm×20cm，20cm×20cm。3.4层析缸。
3.5UV254nm荧光灯。
3.6微量注射器。
4操作方法
4.1样品处理：将酒、饮料、蛋糕、样品处理后，进行TLC检识。见5.2.2展开结果。
41.1酒：取样品100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取3～5次，至无子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。4。1.2饮料：取样品100mL，用乙酸乙酯萃取，每次50mL，萃取35次，至无子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL，此液留作薄层分析用。
4.1.3蛋糕：称取10.0g已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品（用手摸已干燥即可），加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。
4.2测定
4.2.1点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液0.5μL，板的右边点2uL子黄色素标准溶液，4.2.2展开：将4.2.1项已点好样和标准板，用2.8,2.9展开剂展开，待子黄色素明显分开后取出，晾干，与标准斑点比较，子黄Rf值为0.64和0.50。而姜黄色素为0.11和0.15。样品与标品的斑点的Rf值一致，则证明样品中的色素为子黄色素。
中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施
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