【农业标准】 香蕉黑条叶斑病原菌分子检测技术规范

NY

中华人民共和国农业行业标准

NY/T 2258—2012

香蕉黑条叶斑病病原菌分子检测技术规范

Molecular detection for pathogen of banana black leaf streak disease

前 言

本标准按照 GB/T 1.1 给出的规则起草。

本标准由农业部农垦局提出。

本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口。

本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。

本标准主要起草人：谢艺贤、漆艳香、张欣、蒲金基、张贺、陆英、张辉强。

香蕉黑条叶斑病菌分子检测技术规范

1 范围

本标准规定了香蕉黑条叶斑病原菌(Mycosphaerella fijiensis Morelet)分子检测方法。

本标准适用于香蕉种苗及大田植株上的黑条叶斑病菌的定性检测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

SN/T 1193 基因分析检测实验室技术要求

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1
香蕉黑条叶斑病 banana black leaf streak disease

由斐济球腔菌(Mycosphaerella fijiensis Morelet)引起的一种为害香蕉叶片的检疫性真菌病害。该病害病原菌的分类地位、寄主范围、地理分布及其为害症状是 A.1、A.6、A.7 和 A.8。

3.2
核糖体基因内转录间隔区 ribosomal DNA internal transcribed spacers, rDNA-ITS

真核生物核糖体基因内转录间隔区(rDNA-ITS)，通常包括 ITS1、5.8S 和 ITS2。

3.3
聚合酶链式反应 polymerase chain reaction, PCR

模板基因序列先经高温变性成为单链，在 DNA 聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板 DNA 两条链上相应的一段互补序列发生退火而互相结合，接着在 DNA 聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。

4 原理

根据香蕉黑条叶斑病菌核糖体基因内转录间隔区(rDNA-ITS)特有碱基序列设计特异性引物进行 PCR 扩增。依据是否扩增获得预期 1 008 bp 的 DNA 片段，判断样品中是否携带香蕉黑条叶斑病原菌。

5 仪器设备及试剂

见 B.1 和 B.2。

6 取样

按附录 A 描述的症状仔细检查香蕉叶片，发现香蕉黑条叶斑病疑似症状，即取叶片 200 g 以上，装入牛皮纸袋中，送实验室检测。

7 显微观察

从疑似病样病斑上挑取或用透明胶带粘取灰色霉状物制成临时玻片进行镜检，观察有无类似斐济球