【农业标准】 饲料中柠檬黄等7种水溶性色素的测定高效液相色谱法

中华人民共和国农业行业标准

NY/T 3322—2018

饲料中柠檬黄等7种水溶性色素的测定
高效液相色谱法

Determination of tartrazine 7 kinds of water-soluble pigment in feeds—
High performance liquid chromatography

2019-06-01 实施

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。

本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76）归口。

本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所。

本标准主要起草人：吴宁鹏、孟蕾、宋志超、陈小鸽、宋善道、舒畅、刘素梅、巩丹、邱天宝、周小娟、于辉、陈少栗。

饲料中柠檬黄等7种水溶性色素的测定 高效液相色谱法

1 范围

本标准规定了饲料中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红7种水溶性色素含量的液相色谱测定方法。

本标准适用于食品动物配合饲料和浓缩饲料、宠物饲料、观赏鱼饲料中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红7种水溶性色素的测定。

本标准亮黄的检出限为0.25 mg/kg，定量限为0.5 mg/kg；柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红的检出限为0.5 mg/kg，定量限为1.0 mg/kg；靛蓝的检出限为1.0 mg/kg，定量限为2.0 mg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

• GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
• GB/T 14699.1 饲料 采样
• GB/T 20195 动物饲料 试样的制备

3 原理

用碱性乙腈-丙二醇水溶液提取试样中的待测物，提取液稀释后调pH，弱阴离子交换固相萃取柱净化，高效液相色谱测定；外标法定量。

4 试剂或材料

除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

• 4.1 柠檬黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红标准品或对照品：含量均不低于95.0%。
• 4.2 甲醇：色谱纯。
• 4.3 乙腈：色谱纯。
• 4.4 甲酸：含量不低于88%。
• 4.5 乙酸铵溶液(0.02 mol/L，pH为5.0)：称取乙酸铵0.776 g，用水溶解并稀释至500 mL，混匀，用乙酸调节pH至5.0。
• 4.6 提取液：取乙腈250 mL、丙二醇50 mL、水190 mL、氨水10 mL，混匀。
• 4.7 2%甲酸溶液：取甲酸2 mL，用水稀释至100 mL。
• 4.8 1%甲酸溶液：取甲酸1 mL，用水稀释至100 mL。
• 4.9 甲酸甲醇溶液：取甲醇80 mL，用1%甲酸溶液(4.8)稀释至100 mL。
• 4.10 10%氯化甲醇溶液：取氨水10 mL，用甲醇稀释至100 mL。
• 4.11 标准储备液(1 mg/mL)：分别精密称取柠檬黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红(4.1)对照品约10 mg（准确至0.01 mg），置10 mL棕色容量瓶中，用水稀释并定容，分别配制成1 mg/mL的标准储备液。0℃～4℃避光保存，有效期为6个月；靛蓝标准储备液于0℃～4℃避光保存，有效期为1个月。
• 4.12 混合标准中间液(100 μg/mL)：分别准确移取标准储备液（4.11）各1 mL，置10 mL容量瓶中，用