【农业标准】 动物皮张源性成分鉴定实时荧光定性PCR法

中华人民共和国农业行业标准

NY/T 3308—2018

动物皮张源性成分鉴定
实时荧光定性PCR法

Identification of animal-derived materials in leather—
Qualitative realtime PCR method

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。

本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院生物技术研究中心。

本标准主要起草人：步迅、范阳阳、刘艳艳、张全芳、胡悦、谷玉霞、马德源、李燕、杨雪、谭皓皓、陈雪燕、刘国震、王兴军。

动物皮张源性成分鉴定 实时荧光定性 PCR 法

N/T 3308—2018

1 范围

本标准规定了利用实时荧光定性PCR法对水貂、狐狸、兔、牛（普通牛、黄牛）、马、猪、羊（绵羊、山羊）和家犬9种动物皮张源性成分进行检测。

本标准适用于动物皮张及初加工品中水貂、狐狸、兔、牛（普通牛、黄牛）、马、猪、羊（绵羊、山羊）、貉子和家犬9种源性成分的定性检测。

本方法检出限为1%。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 27403 实验室质量控制规范——食品分子生物学检测

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

实时荧光PCR qualitative real-time PCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定性或定量分析。

3.2

Ct值 cycle threshold

每个实时荧光PCR反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

4 原理

根据线粒体16S rDNA基因在不同物种间保守区设计通用引物，在可变区设计物种特异性探针，采用TaqMan实时荧光PCR技术进行扩增，根据PCR扩增反应的荧光信号及循环阈值，判定水貂、狐狸、兔、牛（普通牛、黄牛）、马、猪、羊（绵羊、山羊）貉子和家犬9种动物源性成分。

5 试剂或材料

除另有规定外，仅使用分析纯试剂。

5.1

水，GB/T 6682，一级。

5.2

1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0) 溶液：称取12.1 g Tris置于100 mL烧杯中，加入80 mL水，用浓HCl调节pH至8.0，加水定容至100 mL，103.4 kPa（121℃）灭菌20 min，室温保存待用。

5.3

1 mol/L Tris-HCl (pH 6.4) 溶液：称取12.1 g Tris置于100 mL烧杯中，加入80 mL水，用浓HCl调节pH至6.4，加水定容至100 mL，103.4 kPa蒸汽压（121℃）灭菌20 min，室温保存待用。

5.4

0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 溶液：称取18.61 g Na₂EDTA·2H₂O置于100 mL烧杯中，加入80 mL水，用10%的NaOH溶液，调节pH至8.0，加水定容至100 mL，高压灭菌后室温保存待用。