【商检行业标准(SN)】 苜蓿细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2666—2010

苜蓿细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法

Identification of Clavibacter michiganesis subsp. insidiosus (McCulloch) Davis

2010-11-01 发布 2011-05-01 实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局   发  布

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：张乐、张祥林、赵文军、王翀、高文娜、丁翠珍。

苜蓿细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了苜蓿细菌性萎蔫病菌[Clavibacter michiganensis subsp. Insidiosus (McCulloch) Davis]的检疫鉴定方法。

本标准适用于进出口苜蓿种子及其产品中苜蓿细菌性萎蔫病菌的检疫和鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

3 原理

苜蓿细菌性萎蔫病菌的分类地位属于厚壁菌门(Firmicutes)、厚壁菌纲(firmibacteria)、真细菌目(Enterobacteriaceae)、棒形杆菌属(Clavibacter)。该病菌的生物学特性(参见附录A)、血清学特性和分子生物学特性是制定本标准的主要依据。

4 仪器设备和用具

4.1 仪器设备

电子天平(感量1/10 000 g)、恒温培养箱、恒温振荡培养箱、高压灭菌器、超净工作台、生物显微镜(具照相系统)、高速冷冻离心机、低速离心机、纯水器、恒温水浴锅、低温冰箱、酶标仪、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像分析仪、电动搅拌机等。

4.2 用具

培养皿、试管、可调式微量进样器(2 μL、10 μL、20 μL、100 μL、200 μL、1 000 μL)及其枪头、研钵、96孔酶联反应板、离心管(1.5 mL、10 mL)、PCR管(0.2 mL)、量筒、烧杯。

5 试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。培养、鉴定苜蓿细菌性萎蔫病菌所用的试剂见附录B、附录C并参见附录D。