【YY医药标准】 ISO 16604 :2004 血液和体液防护装备防护服材料抗血液传播病原体穿透性能测试Phi-X174噬菌体试验方法

ICS11.100
中华人民共和国医药行业标准
YY/T 0689--2008/IS0 16604:2004血液和体液防护装备
防护服材料
抗血液传播病原体穿透性能测试Phi-X174噬菌体试验方法
Clothing for protection against contact with blood and body fluids-Determination of resistance of protective clothing materials to penetration byblood-borne pathogens--Test method using Phi-X174 bacteriophage(ISO 16604:2004,IDT)
2008-10-17发布
国家食品药品监督管理局
2010-01-01实施
TIKAONIKACa-
本标准等同采用1SO16604:2004
为使于使用,本标准做了下列编辑性修改：“本国际标推\一词改为\本标推”；用小数点代替作为小数点的逗号“，\；册去国际标准的前言。
本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家食品药品监督管理局提出。YY/T 0689—2008/IS0 16604:2004本标推由全国医用临床检验实验室及体外诊断系统标雅化技术委员会（SAC/TC136)归口。本标准的起草单位：北京市医疗器械检验所。本标准主要起草人：潘四春、王军、李劲松、王峰崎、岳卫华。YY/T0689--2008/IS016604:2004引言
工作人员，尤其是在卫生保健行业中对仿者或病人进行治疗及护理的工作人员易接触到可以传播疾病的生物液体。这些山各种微生物引起的疾病会对生命和健康遗成严重危害。尤其是可引起肝炎T乙型肝炎病毒（HIBV)和丙型肝炎病毒（HCV)]和获得性免疫缺陷综合症（AIDS)L人类免疫缺陷性病举（HIV)了的血源性疾病。由于工程学控制不能消除所有接触可能，因此人们将注意力放在使用防护服来减少与皮肤接触。
本标准关注防护服和设计用来抵抗血和体液穿透的防护装备：由于卫生保健机构、活动及接触血液或体液可能情况的多样性，对防护服的屏障要求可因应用情况而改变。
本标准描述了防扩服材料抗代表性病毒穿透能力的流体力学压力测试方法。对试验方法的合现选撑敢决于防护服及其材料的特殊应用情况和预期用途。应对试验方法的确定进行风险评估。本试验方法不适用于所有形式或条件下的血液传播病原体接触。试验人员应对工作人员/衣服接触力式进行评价，并对该试验方法针对其特定用途的合理性逊行评价。本试验方法已通过对肝炎病每（乙肝和丙肝）、人免疫缺陷病毒等在血液和其他具有潜在传染性的体液中传播的病毒建立穿透模型而定义。用于该试验方法中的代表性微生物一噬菌体P1i-X174在大小和形状上与内型肝炎病封(HCV)相似，并且也可代表乙型肝炎病毒（HBV)和人类免疫缺陷性病率（HTV）。其他病原体对防护的影响应逐例评价。
本试验方法只对材料或防护所使用的某些材料结构（如接缝）的性能进行评价。本试验方法不对设计、总体结构和部件、或服装接面或可以影响防护服整体防护性能的其他因紊进行评价。值得强调的是，本试验不必模拟实际使用时防护服材料接触液体的情况。因此，试验数据应限于对病毒穿透的抵抗能面对材料进行一般比对性评价。物理、化学和热力学因素可能降低材料的防扩性能，在这些因素产生影响之前进行试验，可能会导致对材料防扩护性能的错觉。应该考您灭菌，贮存条件和效期对一饮性产品，以及清洗和灭菌对可重复使用的产品抗穿透能力的影响的评价试验。防护屏障的完整性也可因使用过程中弯折、摩操或由污染物如酒精和汀浸湿等内紊的影响而受损。如果将这些情况考虑在内，防护服材料抗噬菌体Phi-X174穿透的性能可用能够代表期望使用条件的合适的预处理技术进行评价。医用防扩服材料预期用作对血液、体液和其他潜在传染性物质的屏障。多种因素，例如液体的表面张力、粘度和极性，以及结构利亲水性或疏水性，可以影响体液的湿润和穿透性能。血液和体液（唾液除外)的表面张力范围约为0.012N/m～0.060N/m。为有助于模拟血腋和体液的湿润性，将Phi-X174噬菌体悬浮液的表面张力调整到接近这一范围的下限。得到的Phi-X174噬菌休浮液的表而张方为(0.042±0.002)N/m。
本适用方法中涉及将防护服材料样品与赚菌休Phi-X174悬浮液接触时需将测试植压力加到14.0kPa（见试验步骤A和B)。这一流体静力学压力的试验结果已经过验证与从人体因子获得的病毒穿透结果有关。然而，些研究表明临床使用中可产生超过345k卫a的机械压力。因此，重要的是理解本试验方法不感模拟所有物理压力和施加到防护服上的实际压力。试验步骤C和D使用逐步加玉方法将压力升至20.0kPa，这些试验步骤模拟可能的压力范围以对材料进行分级：TKoNiKca-
1范围
YY/T 0689-2008/IS0 16604.2004而液和体液防护装备
防护服材料
抗血液传播病原体穿透性能测试Phi-X174噬菌体试验方法
本标准规定了测定防护服材料抗血被传播病原体穿透能力的实验室试验方法。本试验方法使用了一种含替代微生的悬浮液。随护服测试“合格/不合格\是运用YY0699规定的试验仪器在一特定的流体静力学压力下测定病毒穿透能力。本试验方法对较厚，有衬重易吸收试验液体的防护服材料可能无效。本试验方法中某些试验步骤灵敏度较高，由丁本方法对完成时间有要求，因此本方法不适宜作为防护服或防护服材料质量控制或保证程序。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。尼是注日期的引用义件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标泄，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注甘期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T3820纺织品和纺织制品厚度的测定（GB/T3820—1997.eqvISO5081:1996)GB/T 1669机织物机织物单位长度质量和单位面积质量测定（CB/T 4669-2008,ISO 3801:1977, M0D)
GB/T5549表面活性用试剂拉起液膜法测定表面张力（GB/T55491990，ne1ISO304：1985）GR/T 6682
YY/T 0G99
分析实验室用水规格和试验方法（1SO3696；1987,MOD)液态化学品防扩装备
(YY/F0699—2008,ISO 13994.1998,1DT)防护服材料抗加压液体穿透性能测试方法YY/T07002008血液和体液防护装备防护服材料抗血波和体液穿透性能测试合成血试验方法(1SO 16603:2004,)
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3. 1
琼脂agar
用了支持细菌和其他微生物尘长的培养基的凝固剂。3.2
试验 assay
对混合物进行分析以测定某一特定组分的存在或含量。注：本试验方法中，被分析的组分即指懒菌体Phi-x174。3.3
试验液assay fluid
用于冲洗测试材料表面以决定微生物穿透能力的无菌液体。注；本试验方法巾，试验液即指营养肉汤,微尘物病毒即指噬脂体 Phi-X174。用试验液把噬菌体 Phi-X174 从测试样品的内表面冲洗下亲。
YY/T 0689—2008/TS0 16604:20043.4
噬菌体hacteriophagc
能感染细菌的一种病毒。
注：本试验方法它，需体即指Phi-X17。Fii-X174对人类不足致病病毒，但可儿于模拟对人类有致为性的病毒。3. 5
血液传播病原体
blood-hornepathogen
血液或其他体羧携帮的具有传染的分泌或排泄的细菌病毒或其他致病微生物。流：不试验方法中，J1液传摄病源体婴包括肝炎病毒（乙肝和丙肝）、人类免疫缺陷病非（HIV)。实他款坐物迹避例冬察、
体液body flnid
山身休产牛（分泌惑排泄的任何瘘体）注：在本标准中，体液包括摄此液接痛病原体潜在感染的液体，包括但不夜限于血液液，阴道分秘物、扇脊液，滑波胶水、羊水、噬液，及其他往何被血液明显污染伪体浪和所有很难基案小可能区分的体液。3.7
体液模拟物hodyriasimlant
模拟人体液的液体
注：本试验方法保液燃拟物印为随幽体营养肉汤其装面张力接近人血液和体液（睡被跨外）表面张力的下限(0. 042+0. c52)N/R
challenge suspcas
材料抗穿透能方试剂的液体：
含有能用于测
注：本试验力法
菌苔lawn
欢验悬浮波能菌体试验敏译液，即含有嘴菌体hFxI?的营养内初！培养肌中琼泌层生长致的微生物集合体注：本试验方法中
溶解lysis
拨希氏大肠杯菌C：co)作为产生菌落的细菌。整个细菌细肪裂能或破
：本试验方法中,宿主缩瘤cobc 医Phi-x1?4侵义而引起落祭。3. 11
培养基medium/medin
培养细胞或组织的营养系统
注：本试验士法中，培养其是指支持续定微生物牛食耐复答菌，例如噬菌体婚养夫汤和上层球脂。3.12
形态morpaology
-特定有机传的彤状和结构。
营养肉汤
nutrientbroth
羧体培养基。
注：本试验方法中，营养肉荡品指用于培养宿主菌E.cut:C并助于在程序的各个阶段1hi-x174增值的噬国体背养肉汤，例如穿透档中悬浮Pli-X171据战试材料，测试材料内表面：或按要求将试验波翁释制成+板。3. 14
pemetration
在防护服材料1液体以非分子水平方式穿过包熹物、密孔材料，接缝处、孔隙或其他缺降处的现象。2
TIKAONIKACa-
噬菌斑plaqe
YY/T 0689-—2008/IS0 16604:2004(病毒学)理论上由单个活病毒感染,溶解宿主细胞而形成的清晰可见区域注：本试验方法中，噬菌证即指琮胎层上E.uiC 的菌落中的游晰可见区域,理论上是单个存活的 Phi-X174 感染和溶解细菌的结柴。
空斑形成单位plaque-forming unitPFU
通过感染和溶解琼胎上层的细菌而产牛噬菌斑的病毒粒子。3. 17
(微生物学)装有珺养基的培养Ⅲ。3.18
protective clothing
防护服
特殊设计及结构服装：预期用途是将全部或部分人与潜在的危害隔离；或通过着装将外部环境污染隔离。
surrogate micrabe
替代微生物
用于模拟对人类有致病作的其他微生物的微生物。注：本试验方法中，代表微生物即指噬菌体 Phi-X174,用于模拟HCV、HBV和 HIV。3.20
滴度titre
与另一给定最的底物作用或对应的底物最。注：本试骏方法中，滴度用于描述荐活的噬菌体的浓度，用PFU/mI.表示3.21
病毒virs
无独立的代谢系统，具能在活的主细胞内复制的具有感染性的微小生物。3.22
病毒穿避viral penctratian
病毒对某一材料的穿透。
注：本试验方法中，病紊穿透是指菌体 Phi-X174遵过包衰物,接缝处,孔隙针眼或其他缺陷处的物理易位。3.23
抗病毒穿透viral resistant
在特定的实验究测试条件和检测方法下材料阻止病毒穿透的能力，注；本验方法于，测试结果“合格”的防护腰材科被认为具有抵抗病毒穿透的能对。4原理
将样品置于YY/T0699规定的测试装置上，加人试验悬浮液，按规定时间和压力进行试验。按照本试验方法，即使在活不见体穿透的情况下，仍能检测到穿过材料的活病，它补充了月测穿透试验的不足。病毒穿透了测试样品即认为该样品不合格。本试验方法要求具备基本的微生物学技术。5微生物和试剂
5.噬菌体Phi-X174(A1CC 13706B1),滴度至少为1.0×10°PFU/mL。注；由于噬菌体Phi-X174体积小,球形(二十面体),具有环境稳定性，对人类不其有感染性,灵敏度离、生长快，滴度高,因此选作最适宜的血戒传插病原体模型。3
YY/T 0689-—2008/IS0 16604;20045.2
肠杆菌（ATCC13706）。
依GB/16682—2008等级3
营养肉汤。
氯化钙（CaCl）。
氯化锻（KCI)。
氢氧化钠(NaQH):2.5 mol/L。
表面活性剂：聚山梁醇酯80
5.9琼脂。
装背和树料
穿透试验猎：见YY/TG65.用于在与压试验液体接触过程中保住样品。6.1
在试验枯中，防护服材料作为隔离物，将噬菌体Phi-X174试验悬浮液与试验槽的市视面分隔。试槽体可容纳约60mL噬菌体Phi-x174试验悬浮液。试验槽还装有验的槽体固定在一个支撑物
个法兰盖，其上有一形台区杀肉眼观察与外还有，透明盖，槽体工有孔用了填充液体，有一排泄阀用于试验梢中液你的非版。其他所需部件还有如将空气管和槽体上的乳连接的适配件，垫陶、支撑网等。试验槽及其部件示意图见图和图2。o
透即盖；
法兰蓝：
支择内；
诚验样品：
图1试验槽结构
TiKAoNiKAca=
下部人口；
-PTFE垫图材料：
试验梵体：
非放阅，
试验据支架。
正缩空气或氮气：
2-气体皙路接头；
气体调节朗；
可调节阀放气阀；
压力计；
阀门；
连接头；
带连接头橡胶管；
安余外壳；
帮液阀：
-转动夹：
防滋裁：
双片轴环。
6.2其他设备
图2试验装置（三维视图）
6.2.1测厚仪：能测量约0.02mm的厚度。YY/T 0689—2008/IS 16604:200410
日.2.2支摔网：方形、网状磨光塑料或金属网，用于支持可伸展的或弹性的物质，应满足以下特性：）开放区域≥50%；
b）试验样品变形≤5.0 mm。
6.2.3气源：能提供20.0kPa~-22.0kPa的气压。6.2.4培养箱：能保持温度在（36士1)℃。6.2.5水浴锅：能获得(45土2)℃的温度。6.2.6天平：精度为0.001 g。
漓流混勾器。
YY/T 0689—2008/ISO 16604:20046.2.8冰箱：能维持温度在（5±3)℃压力蒸汽灭菌器：能维持温度在(121土1)℃，绝对压力在（214士7)kPa。6.2.9
计时器，准确度至少为1。
振荡。
pH计，录敏度为O.IpH单位。
6.2.13接补环。
扭矩板手：具有13.6N·m的扭矩，6. 2. 14
分光光度计：能在640nm处测量吸光度。6.2. 152
离心机：具有100001/rnin加速度。6.3实验室玻璃器ⅢL
6.3.1培养mL无菌
6.3.2移液管：无菌，1ml.、5mL、10mL。6.3.3试管：13mmX100mm。
6.3.4试管架。
6.3.5玻璃瓶：无菌，100mL~500mL。6.3.6移液器：能精确吸圾2μL
7试验样品
7.1测试样品的选择
7.1.1从单一的材料样品或单个防护服样品（如果适用，应灭菌中选择，可选：个单层或按正确顺序叠在一起的能代表防护服实际结构的多层材料。如果防护服设计中不同部位使用了不同的材料或规定了不同厚度，则各个部位均应取样。如果闭护服设计中声明接继处能提供与基本材料同样的防护效果，则应对含有接缝的样品进行试验。
将每一材料样品剪成边长至少为70mm的正方形，75mm最佳。从每-个防护服材料、组成、部位（非均一性材料设计时或其他条件下随机选择3个样品进行试验。
如果本程序用了防护服质量控制或为防护服材料抗病毒穿透性能提供一般证据时，应对大批数据进行正确统计学设计利分析，而不是用本标准中规定的试验方法。拥样计划可参见如GB/T2828.1等参考资料。
7.1.2如果防护服材料在两个纤维层中夹有一层密封层，则材料边缘的毛细作用可导致试验结果出现假阳性而健结果不合格。在进行试验前，应用粘合剂、帕拉胶膜、固体不蜡或附有粘合剂的泡沫将试验样品的边缘封好以避免出现“毛细作用”的影响层。只对试验样品的边缘进行封固，中心部位留一边长为57mm的正方形区域供试验。封固剂不能对试验区域的样品结构产生干扰、破坏或阻寒。应选择与防护服材料相容的封固剂过固方法。7.2测试样品的制备
每一个防护服释品应在温度为(21土5)℃，相对湿度为（60±10）%的环境中放置至少24h。如果适用，可应用灭菌等其他预处理来评定防扩服可能的损害性变化。8试验步骤
8.1培养基的制备
8.1.1噬菌体营养肉汤(Phi-X174)噬菌体营养肉荡配方如下：
胺蛋白陈（8.0±0.1)g：
氯化钾(5.0±0.06)g；
氯化钙（0.2士0.003)g
纯水(1000±12.5)mL
表面活性剂（0.1±0.00125）mL。YY/T0689-—2008/ISO16604.2004用2.5mal/L的氢氧化钠调整pH至(7.3±0.1)。用9份噬菌体营养肉汤稀释1份0.1%的表面活性剂。为保证充分混合，灭菌前，一边搅拌一边加热噬菌体营养肉汤。推荐最终浓度为0.01%的表面活性剂以调整衰面张力为(0.042土0.002)N/m。用压力蒸汽灭菌器对噬菌营养肉汤灭菌。依据GB/T5549测试灭菌后液体的表面张力。如果噬菌体营养肉汤的表面张力不在（0.042+0.002)N/m范鼠内，购不能使用。8.1.2下层琼脂
下层鲸脂配方如下：
-琼脂（15.0±0.19）g，
营养肉汤(8.0-10.1)g;
一氯化钾（5.0±0.06)g；
—水(5.3)(1000±12.5)mL
—氯化钙（1.0士0.0125)mL（高压灭菌后加人）。制备mol/L的氯化钙溶液并经压力蒸汽灭菌。用2.5 mol/L的氢氧化钠调整 pH至(7.3±0.1)。用压力蒸汽对底部琼脂灭荫。bzxZ.net
8. 1.3 上层琼脂
上层琼脂配方如下：
—Bacto-琼脂(7, 0士0. 09)g;
营养肉汤(8.00.1)g：
氯化钾（5.0士0.06)g;
一纯水(5.3)(1000±12.5)mL;
氯化钙（1.0士0.0125）ml.（高压灭菌后加人），制备1mol/L的氯化钙溶液并经高压蒸汽灭菌。用2.5mo1/L的氢氧化钠调整pII至(7.3+0.1)。压力蒸汽对顶部琼脂灭菌。
8.2制备对照物
对每一件防护服或防护服材料进行试验时要同时使用下列对照物：a）气溶胶/空气污染对照物：测定Phi-x171噬菌体时，用平板或其他适宜的方法测定浮的或空气携带的本底数日；
每天应至少--次使用下列对照控制物：阴性对照试验样品：严格防渗的单一膜制成的样品，如医用包扎聚酯膜；b)
c）性对照试验样品：由微孔过滤介质制成的样品，孔径为（0.050十0.005）um，比Phi-X174赚菌体的直径(0.027μm)略大。
8.3材料相容性测定
因为怀疑其影响噬菌体试验悬浮液的滴度，应进行防扩服材料相容性试验。7
YY/T0689—2008/IS016604:2004a）测试三个能代表试样的样品；b）.将试验猎水平放置在实验台上，无菌操作将已灭菌的样品的正带外表面面向试验放入槽内；，
c）试验槽的各个部件灭菌后按图1所示组装；d）将试验槽的螺钉拧至扭矩13.6N·m：保持试验水平放置，将2.0μL含900PFUJ~1200PFU的噬菌体营养肉汤放在样品的中央e)
部位，加5mL已灭菌的噬肉体培养肉汤；将2.0L噬菌体总浮较直接加到5mL已灭菌的噬菌体培养肉须中，制得对照物；f
g）1.0 min后,按 8. 9定量测试；计算质控物滴度与测试样品滴度之比；保持试验悬浮液的滴度（见8.4）用于试验暴露的过程（见8.8），等同于2×10PFU/mL～3X10°PFU/mL，如果计算值大于5.0，则噬菌体试验悬浮被应为1X10*PFU/mL。8.4噬菌体悬浮液的制备程序
噬菌体悬浮的制备程序如下：
将10rmL～25mL噬菌体营养肉加人250mL二角瓶中，用接种环将大肠杆菌接种于培养a)
液巾，在温度为（36士1)℃，转速为（225士25）r/min的条件下培养过夜b）用100mL新鲜制备的噬菌体营养肉汤将上述培养过夜的细菌培养液1：100稀释，置于1L的三角瓶中。在温度为（36+1)℃，转速为（225士25)z/min的条件下培养。大约3h后，细菌增殖至浓度为(3士1)×10°CFU/mL，与此对应的在分光光度计上测得的640nm的培养液吸光度为 0. 3～0. 5。
将5mL～~10mL噬菌体Pli-X174接种到上述细菌培养液中，使噬菌体的滴度为1.0×10%PFU/mL~1.0×10lPFU/mL。确保噬菌体个数与细菌个数之比在0.1和2.0之间。将接种后细菌培养液在（36士1）C培养，剧裂震荡1h～5h，直垒细菌裂解，当培养液640nmd
下的啵光度不再下降时可认为细菌完企製解。将培养液在10U00r/min下离心20min以去掉细胞碎片。将上层液倒人一干净的试管中。e
将合有噬菌体的悬浮液用0.22IL的膜过滤，以纯化噬菌体溶液。f
g）测定噬菌体溶液的滴度并（5士3)℃保存。此时测得的噬菌休滴度-般在<5.0士2）×100PFU/mL的范围内。
h）将噬菌体培养液稀释至8.3要求的浓度以制得嘧菌体试验悬浮液。按8.9规定的试验程序测定噬菌体最终的浓度。
8.5沉降平板制备
可选择在已灭菌的试验样品放入，装液，试验、排液和测试过程中，将平板放在关键的位置，这样有助于识别与由气溶胶或空气传播Phi-X174有关的潜在间题。按下述步骤制备平板：a）将么5mI化的已灭菌的上层琼脂倒人已灭菌的试管中，保持上层琼脂的温度在(45±2)℃。每一平板制备一试管：b）将100L过夜放置的大肠杆菌培养液加入到上层琼脂试管中；e）充分混合试管后倒入下层琼脂平板上；d）让琼脂凝固。制备好的平板应立邸使用；e）使用后，随同试验样品平板、明性对照、阳性对照一起培养。8.6基本测量
如果样品需要灭菌，应在灭荫前按照GB/T3820对每一样品的厚度进行测量，精确至0.02mm。8
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