【YY医药标准】 一次性使用医用手套 第1部分:生物学评价要求与试验

ICS11.140.01
中华人民共和国医药行业标准
YY/T0616.1—2016
代替YY/T0616-2007
一次性使用医用手套
第1部分：生物学评价要求与试验Medicalglovesforsingleuse-
Part 1:Requirements and testing for biological evaluation2016-01-26发布
国家食品药品监督管理总局
2017-01-01实施
YY/T0616《一次性使用医用手套》.由下列部分组成：第1部分：生物学评价要求与试验！第2部分：测定货架寿命的要求与试验。本部分为YY/T0616的第1部分，
本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。YY/T0616.1—2016
生物学评价要求与试验》，与YY/T0616—本部分代替YY/T0616一2007(一次性使用医用手套2007相比，主要技术变化如下：修改了标准名称；
修改并补充了“3
术语和定义”：
增加了“4.4粉末，4,5可沥滤蛋白质和4.6标示”修改了附录B天然橡胶胶乳过敏原的免疫学测定方法：修改了附录C高效液相色谱法（HPLC)测定氨基酸(AAA)；删除了附录D术语。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本部分由国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心归口，本部分起草单位：山东省医疗器械产品质量检验中心、北京市医疗器械检验所、江苏省医疗器械检验所，
本部分主要起草人：郝树彬、刘斌、刘肖帅、黄永富、林红赛、高静资、金梦。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：YY/T0616—2007.
YY/T0616.1—2016
最近几年，常有报道胶乳产品由于含有胶乳蛋白质对医护人员和病人产生不良反应，由于化学物质、润滑剂、灭菌残留物（环氧乙烷）、致热物等残留物产生的不良反应也在科学文献中有所描述，其中报道最多的是天然橡胶胶乳手套产生不良反应，但其他聚合物制成的手套也可以引起一些不良反应。GB/T16886系列标准规定了医疗器械生物学评价的要求和试验方法。但未涉及使用医用手套所产生不良反应（如速发型超敏反应），这些不良反应主要是由手套中存在的特异性过敏原所引发，导致这些反应风险的因素有：
皮肤接触手套的时间和频次；
黏膜和皮肤（尤其是在不完好时）直接接触了过敏原（又称变应原）和吸人微粒；手套使用过程中与皮肤贴敷的紫密程度。c)
美国FDA认为，手套中的粉末也是一种危险源，可能导致患者产生异物反应而形成肉芽肿，还可能导致刺激性皮炎、V型过敏等，且可作为天然乳胶的空气传播载体面导致使用者过敏。本部分给出了用以评价医用手套生物学安全性的要求和试验方法，作为按YY/T0316和GB/T16886风险分析过程的一部分iKAoNiKAca
1范围
一次性使用医用手套
第1部分：生物学评价要求与试验YY/T0616.1—2016
YY/T0616的本部分规定了一次性使用医用手套生物学安全性评价的要求，给出了标签和公开所用试验方法的信息的要求
本部分适用于一次性使用医用手套生物学安全性评价，2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件、GB/T16886（所有部分）医疗器械生物学评价GB/T21869
医用手套表面残余粉末的测定
YY/T0316医疗器械风险管理对医疗器械的应用（YY/T03162008.ISO14971：2007.IDT）医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号YY/T0466.1
第1部分：通用要求
(YY/T0466.1—2009.ISO15223-1:2007.IDT)中华人民共和国药典
二部（2010年版）
ISO7000
synopsis)
3术语和定义
设备用图形符号索引和—览表（Graphicalsymbolsforuseonequipment—Indexand下列术语和定义适用于本文件。3.1
化学物质
chemicals
生产过程的任何工序中或贮存期间加人或形成的物质，这些物质可从最终产品中检出。注：这些化学物质包括润滑剂、化学涂层和灭菌剂等手套加工过程中常使用一些化学成分，它们中一些成分已知可导致IV型趣数反应，所加人的化学物质的类型和残留量以及最终存在形式是不确定的。3.2
内毒素
endotoxins
来源于革兰氏阴性菌细胞膜外层结构的脂多糖。注：内毒索是一种致热原，内毒紫可来源于手套原材料、特别是生产过程中的工艺用水和手工处置过程中的细菌污染，
powder
在该试验条件下，手套表面上能用水清洗去除的所有水不溶性物质，［GB/T21869—2008.定义3.1]
注：包括有意添加的粉末和其他加工助剂或非有意随机存在的物质，这些物质能客易地从手套表面分离。本部分规定任何含有小于或等于2mg粉末的手套为无粉末手套，大于2mg粉末的为有粉末手套（要求见4.4)1
iKAoNirKAca
YY/T0616.1-2016
过程限值process limit
某一确认过的加工过程可能出现的最大值。3.5
变应原性蛋白质
allergenicproteins
能够引起工型变成反应的蛋白质。3.6
可沥滤蛋白质
leachableproteins
从最终产品中溶出的不同分子量的水济性蛋白质和肽，3.7
pyrogens
使家免发热的物质，这些物质也能使人体产生发热反应和其他不良反应。4要求
4.1总则
-次性使用医用手套应按照GB/T16886进行评价，GB/T16886.1措述了医疗器械生物学评价的一般原则并用于选择其他部分中描述的适宜试验，应按照YY/T0316进行风险管理。4.2
化学物质
手套应不含有或不涂滑石粉末（硅酸镁）。如技术上可行，应避免使用已知具有变应原性的化学物质，只要可行，应使用GB/T16886.17确定日沥滤残留化学物的可允许限量，并符合这此限量，如不可行，该残留化学物水单应是“可行的最低水平\[ALARP（AsLowAsReasonablyPracticable）见YY/T0316]。若有要求，制造商应说明生产过程中添加或产品中已知存在的化学成分，如促进剂、抗氧化剂和杀菌剂等依据现有文献资料已知对健康有不良影响的物质。4.3内毒素
如果手套标示“低内毒素含量”，制造商应按5.1规定的方法监测无菌手套内毒素污染，有这种标示的手套，每副手套的内毒素含量应不超过20EU。4.4粉末
对于无粉末手套，根据5.2的试验方法测定的残留的粉末总量应不超过每只手套2mg。任何粉末含量超过2mg的手套为有粉未手套。4.5
5可沥滤蛋白质
制造商应按5.3规定的方法监测含天然橡胶胶乳成品手套中可溶出蛋白质的过程限值。应保留试验结果的文件。应能按要求提供试验结果和所采用的试验方法，该可沥滤蛋白水平应是“可行的最低水平\（ALARP），注：变应原性蛋白质，本部分规定了测量变应原（如可溯速蛋白质）的近似方法，可衡德蛋白质与变应原之间无直接相关性。附录B描述开发中的变应原性蛋白质的定量检测方法，4.6标示
除了YY/T0466.1中给出的相关符号之外，下列要求也适用：2
TiKAONiiKAca
YY/T0616.1-2016
含天然橡胶胶乳的医用手套其最小包装单元上应至少标有下列符号，见图1(ISO7000的符号2725给出了该符号应用的一般要求）；LATEX
图1含天然橡胶胶乳产品的符号
除符号外，标签中还应包括以下警示声明或等效警示声明：b)
“（产品）含有会引起过敏反应（包括过敏性响应）的天然像胶胶乳，”：c）标签应醒目地给出该手套是否含有粉末的陈述；d）无菌有粉未手套应标有以下或等效文字说明：“注意：手术前应无菌去除表而粉末，以使组织不良反应的风险降至最小。”；注1，该注意事项可在内包表物上给出。对于任何含天然橡胶胶乳的医用手套，产品标签不应包含：e
任何表明具有相对安全性的描述，如低变应原性或低蛋白质：任何对存在的过原的不合理的描述；制造商如标示含有蛋白质，应给出按5.3规定测定的过程限值，注2：不允许标示蛋白质含量低于50g/g，因预期的制造过程和实验室间的试验结果具有变异性，标称较低的蛋白质含量被认为是不可信的。
5试验方法
内毒素
除非益试剂（LAL）试验中出现无法排除的干扰，应按《中华人民共和国药典》（以下简称中国药典》）规定的细菌内毒素检套法对方法进行选择、确认和使用。结果应用每副手套含内毒索单位（EU）表示。
注1：LAL试验中出现无法排除的干扰时，即不能准确测出细菌内毒案水平。推荐的供试手套最小副数，检验量根据批量确定，批量少于30副时，取样量为两副：批量在30副～100副之间时，取样量为3副：批量超过100副时，取样量为3%，但每批最大取样量为10副。每副手套的外表面以确保手套的所有外表面与浸提介质接触的方式用40mL无内毒素水（《中国药典》中规定的细菌内毒素检查用水）在37～40下浸提40min～60min，必要时将浸提液以2000g离心15min，以除去微粒。离心后取出液体成分立即进行内毒素试验。注2：其他现有公认的内毒素分析方法，只要经过确认并与本部分中所规定的基准方法具有相关性，也可用来进行营规质量控制。
应使用GB/T21869中措述的方法进行粉末残留的测定。3
iKAoNiKAca
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可沥滤蛋白质
测定可沥滤蛋白质的方法应采用附录A给出的改良后的Lowry法，或用该改良后的Lowry法确认过的方法
注1，附录B中的蛋自质的免疫学测定法目前还没经改良后的Lowry法确认，但可与临床反应数据相关联。注2：附录C给出了一个确认过的分析方法实例，试验报告
试验报告至少应包括下列信息
本部分编号：
手套类型和生产批号：
制造商或供应商和实验室（如果不同)名称和地址：试验日期：
所用试验方法的描述；
试验结果，
iiKAoNiiKAca
附录A
（规范性附录）
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用改良过的Lowry分析法测定天然橡胶手套水溶性蛋白质的方法A.1范围
本法用手天然橡胶制成的医用手套内水申可溶出蛋白质量的测定，本法已经在实验室闻进行的励同试验中得到了确认。本法最低检出限约为每克手套10（即每毫升没提液2蛋白质），取决于手套重量。
像表面活性剂、催化剂和抗氧化剂等在手套生产过程中添加到天然橡胶中的化学物质在测试过程中会对显色过程有干扰作用，有些物质可能会降低显色，面有些物质可能会增强显色，如果在试验中因干扰导致出现错误，则可以采用任何经确认过的氮基酸分析方法（如附录C给出的方法）。注：使用该方法的人员应熟悉实险室一般规程。该方法没有涉及到安全间题，如使用方法涉及到该类间题，使用者有责任建文相应的安全与卫生规程，并确保与国家见定的要求相一效。A.2原理
水溶性蛋白质被没提到一种缓冲溶液中，然后加人脱氧胆酸钠，用酸使其沉淀、浓缩并将其从水溶性物质（可能对测定有干扰）中分离。沉淀出的蛋白质重新溶解于碱中，并用改良Lowry法比色定量，分析的原理是基于蛋白质与铜和Folin试剂在碱性介质中反应呈现蓝色的特征，用分光光度计在600nm~750nm波长范围内测量
A.3试剂
A.3.1总则
试验用水应为二次蒸馏水或相同质量的水，所有试剂应为分析纯。A.3.2漫提介质
A.3.2.1N-tris-[Hydroxymethyl]-methyl-2-amiocthanesulfonicacid(TES)，N-三(羟甲基)甲基2-氨基乙烷磺酸（TES），半钠盐（hemisodiumsalt)，A.3.2.2、没提缓冲液，0.1mol/L.用水溶解24gTES（A.3.2.1）并稀释至1L，任何能使手套没提液的pH值保持在7.4士0.2的等效的缓冲系统都可以使用。注：制备足量的手套浸提液（A.6.2)、蛋白质标准液（A.6.3.2)和空白。A.3.2.3染色液，溴酚蓝的钠盐溶液，用水溶解100mg溴酚蓝并幕释至1L，每4周制备新鲜溶液。A.3.3
Lowry蛋白质分析试剂盒
注，该试剂盒可以采用现用的化学品制备，也可以响买试剂盒，本部分的方法是用试剂盒”进行确认。试剂A，铜试剂（碱性酒石酸钢或柠檬酸铜溶液）。A.3.3.1
LowryMicroDC蛋白质分析试剂盒（分类号为500-0116）可从BioRad实验室购得，地点，2000AlfredNobel13
Drive，Hercules，CA9456547，USA，这一信息仅为本部分的使用者提供便利，并不意味着对这一产品的认可，5
iKAoNrKAca
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试剂B，稀释的Folin试剂。
氢氧化钠溶液
[e(NaOH)=0.1mol//L].
脱氧胆酸钠(DOC)
用水溶解0.15g脱氧胆酸钠并稀释至100mL，溶液制备后超过4周不能再使用。A.3.6
三氯乙酸（TCA)
4.4mol//L水溶液，用水溶解72gTCA并稀释成100mL即得，A.3.7
磷钨酸（PTA）
用水溶解72gPTA并稀释至100mL，溶液制备后超过4周不能再使用。A.3.8
卵清蛋白
从冻干的鸡蛋”中提取，无盐。A.4
合成手套，无粉末。
离心机，离心力至少可达到6000g，离心试管，30mL或50mL聚内烯试管，试管的蛋白质吸附量每管不超过10g，不要使用玻璃器具，因其表面吸附蛋白质。
注：A,5给出了一种测定蛋白质吸附量的方法A.4.4
滤膜，一次性使用，孔径为0.22μm，每个膜的蛋白质吸附量不超过10g。注：A.5给出了一种测定蛋白质吸附量的方法。A.4.5
注射器，一次性使用，20mL，用聚乙烯或聚丙烯材料制造。微型试管.2mL，用聚内烯材料制造，石英比色池，光路长1em，
酶标板，96孔，平底，用案苯乙烯材料制造，或一次性板池（A.4.9）。一次性板池，1.5mL半微型，光路长1cm，用聚苯乙烯材料制造酶标仪，波长范围600nm~750nm，分光光度计，波长范围230nm~750nm，涡旋式混合器，
微量移液器，带有一次性紊丙烯吸头，爽具，用于没提过程中密封手套防止滞水，推荐使用衬有泡沫橡胶可旋紧的铝质夹具（见图A.1)，或170mm长的血液透析塑料夹具，该卵请蛋白是用鲜鸡蛋白通过在pH4,5下用硫酸钱分馅和反复结品制得，如SigmaA5503、鸡蛋白，V级，可2
从SigmarChemicalCo.P.O.Box14505，StLouis，MO63178，USA购得，这一信息仅为本部分的使用者损供便利，并不意味着对达一产品的认可。6
-iKAoNrKAca
说明：
外手套（手套1)：
2—内手套（手套2)：
3浸提缓冲液：
A.4.15振荡器。
—-荣色落液；
5-—手套夹具
手套浸提
强白质吸附量（proteinbindingcapacity）测定A.5
YY/T0616.12016
单位为米
推荐使用一次性聚丙烯器具（聚丙烯被认为具有低蛋白质吸附量），在使用一批新的离心试管或过法装置以前，应使用下列方法检查其蛋白质吸附量。该试验应在1d之内进行，离心试管的蛋白质吸附量
A5.2.1在离心试管（A.4.3)中加30mL含10μg/mL卵清蛋白的标准溶液，标准溶液的配制方法是用浸提缓冲液（A.3.2.2）稀释蛋白质备液（A.6.3.1）A.5.2.2移取两份10mL卵清蛋白溶液（A.5.2.1）至两只新的离心试管中，在振荡器（A.4.15）上振荡两个试管。确保试管所有表面被落液浸润，静置30min后再将两管溶液移至另外两个试管中报荡，重复以此步骤，直到每个10mL溶液浸润5支试管。贮备剩余的试验液。A.5.2.3用A.6.4~A.6.6所给方法分别测定标准溶液和两份试验液中蛋白质浓度，各测量三次。A5.2.4
按式（A.1)计算每管卵清蛋白平均吸附量：10(R-T)
=2(R-T)
式中：
每只试管吸附的卵清蛋白量，单位为微克（ug)；o
R标准溶液卵清蛋白含量三次测量的平均值，单位为微克每毫升（μg/mL）；T
...(A.1)
流过试管后的试验液中卵清蛋白含量的平均值（即，六个测量值的平均值），单位为微克每毫升（μg/mL）。
每只试管吸附的卵清蛋白量（O)应小于10B，否则，这些试管不适合用于测量，过滤装置的蛋白吸附量测定
A.5.3.1在离心试管（A.4.3)中加30mL含10μg/mL卵清蛋白的标准溶液，标准溶液的配制方法是用7
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没提缓冲液（A.3.2.2）稀释蛋白质贮备液（A.6.3.1)：A.5.3.2准备两叠滤膜（A.4.4），每叠五张，每叠各过滤10mL标准落液至一离心试管中（A.4.3）A.5.3.3用A.6.4~A.6.6所给方法分别测定标准落液和两份试验液中蛋白质浓度，各测量三次。A.5.3.4按式(A.2)计算吸附的卿清蛋白平均吸附量：O=10(R-T)
-2(R-T)
式中：
每只滤膜吸附的卵清蛋白量，单位为微克（g）；R
标准溶液卵清蛋白含量三次测量的平均值，单位为微克每毫升（rg/mL）(A.2)
流过滤膜后试验液中卵清蛋白含量的平均值（即，六个测量值的平均值），单位为微克每毫升(pg/mL）
每只滤膜吸附的卵清蛋白量（O)应小于10=g。否则，这些滤膜不适合用于测量。5步骤
A.6.1总则
步骤包括了手套没提、然后以系数5对没提液提纯浓缩，用同法浓缩的标准蛋白质溶液制作校准曲线，依据校准曲线测定浸提液中蛋白质含量。采用的没提程序是，取两只手套，一只浸提内部和另一只同时浸提外部，这可使浸提体积最小至25mL，且由于浸提缓冲液只与手套接触，避免了与容器表面接触所引起的蛋白质损失。注：其他授提程序只要参比本方法经过确认也可以使用。在款洲和美国与所选定的一些实验室中所进行的实验室间的比对试验表明，按ASTMD5712把手套剪成辞片再在pH值为7.4的TES缓冲液中25C下没提2h的测定结果与本法相当，
漫提程序
A.6.2.1最合成手套（A,4.1)操作用于没提的手套样品。取8只同规格、同批手套样品，并分成4对，若手套是分左右手的，则择选4只右手样品、4只左手样品，分成两对右手和两对左手。先在每对手套中选一只自中指尖至部（200士10）mm处做一标记，对其称重（m，），精确到0.1g。再将每对手套中的另一只手套插人到做了标记的手套内，使其完全吻合，如图A.1a)所示，注：将一只手套插入另一只的方法对试验并不十分重要，但其操作要尽可能简化，为此可以先向内手套的拇指和小拇指插人一圆棉帮助将其播人外手套的相应的手指内，同样用圆棉将其他三个指插入。A.6.2.2将足量的染色液（A.3.2.3）充满内手套的五个手指内。在内外手套之间注人温度为（25士5）℃的浸提缓冲液（A.3.2.2）25mL。对于规格较大的手套，加人的缓冲液体积可增加至50mL，排出大多数空气泡，并按图A.1b）所示用夹具（A.4.14)在20cm标记处密封，以封闭液体。A.6.2.3将手套置于振荡器（A.4.15）上于（25士5)℃下振（120士5)minA.6.2.4取下夹具，仔细分开手套，注意不要使染色液污染浸提液，如果浸提液呈蓝色，应弃之用新手套重新没提，
A.6.2.5将没提液移人离心试管（A.4.3）中，在不低于2000g条件下高心15min，或用一次性使用滤膜（A.4.4）过滤，也可两种方法并用，使之没清。制得的清激液可在2℃～8下冷蔽并在48h内测定，也可在分析前一18℃以下冷冻，不超过两个月。A.6.2.6将没提过的外手套20cm标记以上的腕部切下，用吸水纸擦去表面液体，室温下晾干，称重(m，），精确到0.1g，按式（A,3)计算该手套浸提部分的质量：m一一m
..(A3)
A.6.3蛋白质标准液
A.6.3.1蛋白质购备液
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将25mg卵清蛋白溶解于25mL浸提缓冲液（A.3.2.2），制备标称浓度为1mg/mL卵清蛋白溶液。用0.22μm滤膜（A.4.4）过滤，用UV分光光度计在280nm处用石英池（A.4.7）测定吸光度，计算实际卵清蛋白浓度。吸光度除以0.715”即是实际的浓度值（mg/mL）。该溶液在冷戴条件下可稳定2d，在一18C以下冷冻可稳定两个月。解冻需加在45℃C下加热15min，A.6.3.2蛋白质标准液
用浸提缓冲液（A.3.2.2)稀释贮备液制成系列标准液（A.6.3.1)，使溶液浓度约为100μg/mL50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL.5ug/mL和2μg/mL，用没提缓冲液作空白，这些溶液在冷藏条件下可稳定2d.在-18℃以下冷冻可稳定两个月。解冻需在45℃下加热15min。A.6.4蛋白质的沉淀与浓缩
A.6.4.1在(25±5)℃下做平行试验，A.6.4.2分别精确移取1mL空白液、蛋白质标准液（A.6.3.2)和四个手套没提液（A.6.2.5）至（6个）微型试管（A4.6）中，（各管）加0.1mLDOC（A.3.5），满旋混合后放置10min，（各管）加0.1mLTCA（A3.6）和0.1mLPTA（A.3.7)，涡施混合后放置30minA6.4.3在6000g下离心15min，例出上清液，并将各离心管例置于吸水纸上5min，A.6.4.4向包括空白在内的各试管中（各）加0.1mol/L的氢氧化钠溶液（A.3.4)0.2mL，在涡旋混合器上混合使沉淀出的蛋白质再次溶解，确保使蛋白质完全溶解成清激液，有些手套有时需在（5士3）℃下过夜冷藏。如果仍有沉淀物，以0.20mL为单位，逐步加入标定过的氢氧化钠溶液，最多至总量为1mL，以后步骤均用0.2mL的整数倍。沉淀前稀释这种样品没提液可能是有效的。注：将蛋白质沉淀后再落解的口的是使蛋白质纯化，排除干扰物，这一过程中难免会有一定量的蛋白质损失，本试验假定蛋白质标准液损失与样品没提液中摄失的百分比相同，但尽管如此，宜使损失为最小，因为过量的损失是不具有重复性的。
A.6.5显色
A.6.5.1本部分所描述的方法是采用市售的用于确认的试剂盒，其他试剂盒或自行制备的试剂可能需要采用不同的体积和孵育时间。A.6.5.2向含有再次溶解的蛋白质溶液和空白微型试管中各加0.125mL试剂A（A.3.3.1)，充分混合，加1mL试剂B（A.3.3.2），加盖。涡旋混合30min，使显色完全，这一阶段会产生沉淀，测量吸光度前离心或滤除沉淀物。
A.6.6测量
薛标仪
移取一定量的溶液（A.6.5.2）至酶标板（A.4.8）的孔中，充满孔，如500μL孔中注人490μL.在600nm～750nm规定波长范围内以空白作参比测量吸光度，注，标准液和手套没挑藏在显色稳定后1h内进行分析，这样做的结果具有一致性，A.6.6.2分光光度计
移取溶液（A.6.5.2）至一次性板池（A.4.9），在600nm~760nm（译注，按前面的原量和仪器，应该假定分子量为43000D，280nm和30745的率尔消光（molarextinction），且在pH7.4下1cm比色池下pH7.43)
的0.1mol/LTES缓冲减中1mg/mL卵清蛋白的消光是0.715。9
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