【YY医药标准】 医疗器械生殖和发育毒性试验 第1部分:筛选试验

ICS11.040.01
中华人民共和国医药行业标准
YY/T1292.1—2015
医疗器械生殖和发育毒性试验
第1部分：筛选试验
Test for reproductive and developmental toxicity of medical devices-Part1:Screening test
2015-03-02发布
国家食品药品监督管理总局
2016-01-01实施
YY/T1292.1—2015
YY/T1292《医疗器械生殖和发育毒性试验》拟分部分出版，目前计划发布如下部分：第1部分：筛选试验；
—第2部分：胚胎发育毒性试验；本部分为YY/T1292的第1部分
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家食品药品监督管理总局提出本部分由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会（SAC/TC248)归口。本部分起草单位：国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心、深圳市医疗器械检测中心、中国医学科学院北京协和医学院新药安全评价研究中心。本部分主要起草人：侯丽、乔春霞、曹苹、叶向锋YY/T1292.1—2015
GB/T16886.3中给出的检测潜在生殖和发育毒性物质的试验方法均为经济合作与发展组织(OECD)《化学品测试指南》中规定的方法，但这些方法是针对化学品的特性制定而成，同时未给出详细的试验步骤，因此不适宜直接用于医疗器械或材料的检测。本部分参照OECD421试验方法的基本原则，并根据医疗器械或材料的特性对试验方法进行了适当的修改，规定了详细的试验步骤，可作为GB/T16886.3中生殖和发育毒性试验中的一项方法标准医疗器械或材料的生殖和发育毒性潜能对人类健康有十分重要的影响。特别是针对可吸收性医疗器械或含可沥滤物的医疗器械。GB/T16886.3中推荐下列医疗器械或材料，在缺乏排除生殖和发育毒性风险证据的情况下，需考虑进行生殖和发育毒性试验：a）具有可能与生殖组织或胚胎（胎儿）直接长期或永久接触的器械、可吸收或可沥滤物质（如硅凝胶乳房植人物）；
b）储能医疗器械。
本部分用来设计评价医疗器械或材料对雌性和/或雄性生殖功能影响的试验，例如性腺功能、交配行为、受孕、胎儿发育和分娩，结果获得的信息是有限的。由于受到试验样品制备以及试验方法确认等方面局限性的影响，在确定进行生殖和发育毒性试验之前，需充分考虑GB/T16886.1和GB/T16886.18的要求。需在评价医疗器械使用中引发生殖和发育毒性风险的基础上，对进行试验的决定予以论证。对可吸收性或含可沥滤物质的医疗器械，如果在吸收，代谢和分布研究方面有充分可靠的数据，或者医疗器械或材料浸提液中鉴别出的所有成分均无生殖和发育毒性时，就无需再进行试验。对医疗器械进行可接受的生物学风险评估后，如生殖和发育毒性的风险已被排除，则无需进行试验。Ⅱ
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1范围
医疗器械生殖和发育毒性试验
第1部分：筛选试验
YY/T1292的本部分规定了医疗器械或材料生殖和发育毒性筛选试验方法。本部分适用于医疗器械或材料生殖和发育毒性试验2规范性引用文件
YY/T1292.1—2015
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T16886.1
医疗器械生物学评价第1部分：风险管理过程中的评价与试验医疗器械生物学评价第2部分：动物福利要求GB/T16886.2
GB/T16886.3医疗器械生物学评价第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验GB/T16886.12医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品3术语和定义
GB/T16886.1，GB/T16886.3和GB/T16886.12界定的以及下列术语和定义适用于本文件3.1
Ereproductiontoxicity
生殖毒性
表现为对亲代雄性和雌性生殖功能或能力的损害和/或对子代的有害作用。3.2
母体毒性maternal toxicity
表现为对雌性妊娠动物特定的（直接）或非特定（间接）的不良作用。3.3
繁殖力的损害impairmentof fertility表现为雌性或雄性动物生殖功能或能力异常。3.4
发育毒性developmentaltoxicity生殖毒性的表现，系指子代在出生以前、围产期和出生以后所显现出的结构或功能异常。3.5
剂量dose
给予供试物的量。表示为每单位试验动物的体重给予供试物的量（mg/kg），或掺入饲料或饮水的恒定浓度。
用量dosage
包括剂量、给予频次及给予期限的统称。1
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evident toxicity
明显毒性
给予受试样品后出现的明显的毒性症状，这些症状宜足以用于危害评定，宜能预计随着给予剂量的增加会发展成严重的毒性症状直至死亡。4主要设备
生物显微镜、体视显微镜、游标卡尺（百分尺）和病理检查器具等。5试验基本原则
5.1雌性动物在整个试验中，都应持续给予供试物。这包括交配前期至少2周（相当于至少两个完整的发情期），交配期，妊娠期和哺乳期，直至处死前一天。雌性动物试验周期的长短取决于雌性动物的状态，一般为54d，即交配前期至少为14d.交配期最多为14d.妊娠期22d和哺乳期4d。5.2如器械预期应用于男性，则雄性动物宜从试验开始至处死前一天给予供试物，给予期至少为4周，即交配前期至少2周，交配期和交配后期2周。由于雕性动物在交配前期接触试验样品的时间较短，仅以生殖能力的大小来评价医疗器械或材料对雄性动物生殖系统的影响是不够的，因此应进行睾丸的病理组织学检查。以全面评价医疗器械或材料对雄性动物生殖能力和精子形成的毒性作用。5.3试验过程中应每天观察动物的毒性症状，在试验过程中死亡或被处死的动物都要进行大体解剖，试验结束时，存活的动物也要处死并进行大体解部5.4如采用植人方式，宜根据植人物的特性确定植入的频次和时间，以确保实验动物在整个实验周期中接触供试物。
6实验动物
6.1总则
所有的动物试验应在经国家认可机构批准并符合实验室动物福利全部适用法规的实验室内进行，并且还应符合GB/T16886.2的要求。6.2动物的种属和要求
本部分推荐使用健康、性成熟大鼠。如果使用其他种类的动物，需要对试验方案进行相应的修改。不宜使用低生育力或者已知发育缺陷率高的动物品系。宜使用健康、未交配和未曾做过试验的动物。宜识别实验动物的种属、品系、性别、体重和年龄。试验开始时，动物的体重差异宜控制在最小范围，每只动物的体重不能超过同性别平均体重的土20%。7样品制备
7.1根据GB/T16886.12的原则，制备试验样品。只要可能，医疗器械都应在*备用状态下进行试验7.2对于储能医疗器械，应以动物全身接触为宜，使用剂量应为人体与生殖器官接触所预期剂量的倍数。
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8试验步骤
8.1动物数量和性别
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在试验开始时每组雌雄动物的数量能保证获得足够多的孕鼠（一般至少每组8只）。目的是能获得足够数量的妊娠鼠和子代以确保正确评价受试物对动物繁殖能力、妊娠、母体和其哺育行为的影响，以及对从受孕到F子代出生后第4天的生长和发育的潜在影响。注：推荐试验开始时每组至少10只雌性动物。如实验方案包括评价雄性动物的生殖毒性作用，则每组宜包括同等数量的雄性动物。
8.2用量的选择
8.2.1宜参考现有的毒理数据以及关于受试物或相关物质的毒代动力学方面的所有信息来选择相应的剂量范围以免造成过度的母体毒性反应。这些信息也可有助于确定剂量的频次8.2.2以最大耐受剂量或动物模型的生理限量作为动物接触的最大剂量，该剂量应为估计的人体最大接触剂量的倍数（以每千克体重和/或表面积表示）。注：与典型的化学物生殖和发育毒性试验不同，多数材料可能得不出明显的剂量-效应关系，对于这些材料，可以考虑采用接触的最大剂量进行单剂量试验来判定是否存在毒性危害，但宜对试验所采用的剂量范围提供相应的支持性数据。
8.2.3若认为试验样品可能对试验动物产生生殖和发育毒性时，宜至少设置3个剂量水平和1个对照组。剂量水平可依据急性毒性试验或重复接触剂量试验的结果来确定。供试物的剂量选择宜考虑到试验样品或相关材料已有的毒性和毒代动力学资料。设置的最高剂量宜诱导出现毒性效应，但不能出现动物死亡或严重痛苦表现。然后设置递减次序的剂量水平，原则是反映出剂量-反应关系和最低剂量时应未观察到有害作用的剂量（NOAEL），递减剂量水平通常选择2倍～4倍间距为最佳，如果设置第4个剂量组，则可使用很大的组距（如，超过10倍）。8.3动物处理
8.3.1宜根据器械的特点和预期临床使用部位采用原位接触法。对于难以模拟临床使用接触的器械，宜对所选择的接触方式进行说明。8.3.2宜使用平行对照组。除了不给予受试物以外，对照组动物的处理方式与试验组完全相同。8.3.3动物在至少5d适应期结束后，宜在开始交配前至少2周对雌鼠、雄鼠（如适用）给予供试物。试验日程宜安排在动物性成熟后。在不同实验室不同品系的大鼠的性成熟时间会略微不同，如SD（SpragueDawley）大鼠10周龄、Wister大鼠12周龄。产后母鼠宜在产后第4天处死。出生当天（就是当分完成时）被定义为出生后第0天。没有交配迹象的雌鼠在交配期最后一天后再过24d～26d处死。雌鼠和雄鼠（如适用）在交配期间持续给予供试物。雄鼠（如适用）宜在交配期结束后继续给予供试物，直到完成总计最少28d给予期。随后处死雄鼠，如认为合适，也可留下来继续给予供试物用来进行二次交配。
8.3.4亲代雌鼠在妊娠期宜每天给予供试物，一直到（包括）仔鼠出生后的第3天，即处死前一天。对于吸人或经皮途径给予供试物的试验，至少要一直持续到妊娠第19天（包括当天）。8.3.5附录A给出了试验日程表。8.4动物交配
雌鼠和雄鼠按1：1的比例同笼，每日早晨观察阴栓（或阴道涂片），查出阴栓（或精子）的当天定为孕期第0天。一只雌鼠要与同一只雄鼠同笼一直到受孕或者两周时间。若交配两周仍未受孕，可将未3
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孕雌鼠与同组的其他已证实有生殖能力的雄鼠重新交配9结果
9.1观察
9.1.1宜每天至少进行一次临床体征观察，最好在相同时间并在给予供试物后预期反应的高峰期进行观察。宜详细记录动物的死亡，濒死，持续的行为改变和所有毒性体征，9.1.2妊娠周期应该从怀孕的第0天开始计算。尽快记录每窝仔鼠的出生数、性别、活胎、死胎、低体重仔鼠以及出现的畸形。
9.1.3宜记录活仔鼠的数量和性别。以每窝为单位，分别于仔鼠出生的当天和第4天进行称量。除了按9.1.1观察亲代动物外，宜记录子代的任何异常行为9.2体重和食物消耗量
9.2.1亲代动物应在给予试验样品的第1天称重1次，以后每周至少称重1次。雌鼠还应在妊娠的第0天，第7天，第14天和第20天，以及分娩后的第24小时内和产后第4天称重。宜报告每只成年动物的个体数据
9.2.2在交配前、妊娠期和哺乳期宜至少每周测量动物的食物消耗量。动物在交配期的食物消耗量的测量是可选择的。
9.3病理检查
9.3.1大体解剖检查
9.3.1.1试验中有成年动物被处死或死亡时，宜肉眼检查有无任何异常或病理改变。尤其要注意生殖系统的组织器官。宜记录着床的数目。宜对黄体计数9.3.1.2宜对所有亲代雄鼠（如适用）的罩丸和附罩进行称重。9.3.1.3宜至少仔细检查死亡仔鼠和产后4d处死的仔鼠的外观有无畸形。9.3.1.4保留所有亲代动物的卵巢、睾丸、附睾、附属性器官和有肉眼可见损害的所有器官标本。对睾丸和附睾的常规检查时避免使用福尔马林固定，建议使用Bouins固定液9.3.2组织病理学检查
宜对试验组和对照组动物的卵巢、睾丸、附睾进行详细的组织学检查（特别强调精子生成的阶段和睾丸间质的细胞结构）。必要时也可检查保存的其他组织。在高剂量组发现组织病理改变时，宜对其他剂量组的动物进行检查。
试验数据和报告
10.1试验数据
10.1.1宜分别记录每只动物的数据。宜按附录B中的表格形式表示实验结果10.1.2由于受到研究规模的限制，对试验中的许多终点，光其对生殖终点进行的统计学分析很难保证其准确性。选择的统计方法宜适合所研究变量的分布，而且宜在试验前就确定统计方法。由于试验的样本量小，如果有历史对照数据（如窝的大小)也可能有助于本研究结果的分析。4
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10.2结果评价
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10.2.1宜根据观察到的毒性作用，大体解部和病理组织学检查结果来评价实验结果。评价内容包括研究受试物剂量与畸形出现或消失，发生率和畸形的严重程度之间的关系，以及大体损伤、识别的靶器官、无生育能力、临床畸形、受影响的生殖和产仔功能、体重变化、死亡率以及其他毒性效应。10.2.2当评定雄性的生殖功能时，由于雄鼠给予试验样品的时间短，对睾丸和附睾进行组织病理学检查时应与生育数据一起考虑。
10.3试验报告
试验报告应至少包含下列信息：a）试验物质：
物理性状和相关理化特性；
识别信息。
b）介质（如适用）：宜对介质的选择进行论证。c）试验动物：
种属、品系；
数量、年龄和性别；
来源、饲养条件、饮食等；
试验开始时动物的个体重量。
d）试验条件：
剂量水平选择的说明；
试验物质/饲料配比、浓度、配比的稳定性和均勾性的详细信息，如适用；试验样品给予的详细信息；
饲料/水中实验物质的浓度（ppm）转换成实剂量［mg/（kg·d）]，如适用；饲料和水质量的详细信息。
e）结果：
体重/体重变化；
食物消耗量和水消耗量（如适用）：性别和剂量的毒性反应数据，包括繁殖力、妊娠和其他毒性症状：妊娠期长度；
关于生殖、子代、产后生长等的毒性或其他效应；临床观察到的现象、严重程度和持续时间（是否可逆)；存活仔鼠数量和流产数；
可见异常的仔鼠数量、矮小仔鼠数量；试验过程中动物死亡时间；
着床数、黄体数、记录时窝大小和窝重；亲代动物被处死时的体重和器官重量的数据：大体解剖检查结果；
镜检雄鼠生殖器官（如进行）和其他组织的详细信息；流产数据（如果能获得）；
结果的统计学处理，如适用。
结果的讨论。
g）结论。
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结果的解释
该研究可评价动物在长期或多次接触某一试验样品后所引起的对生殖和发育的毒性作用。可为是否需要进一步的研究提供指示并为随后的实验设计提供指南附录A
（资料性附录）
生殖和发育毒性筛选试验日程图YY/T1292.1—2015
表A.1中给出了生殖和发育毒性筛选试验日程图（在14d交配期基础上的最大研究周期）。雄鼠/雄性亲代
交配前期
说明：
交配期
（最长14d）
未孕雌鼠
妊娠期
（大约22d)
解剖雄鼠
（至少4周给予供试物后）
给予供试物/对照物；
不给子供试物/对照物。
延长接触（可选）
哺乳期
生殖和发育毒性筛选试验进程图54
产后第4天解剖雌鼠
和仔鼠或雄鼠（可选）
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附录B
（资料性附录）
生殖和发育试验效应汇总报告表表B.1中给出了生殖和发育试验汇总报告表B.1
生殖和发育试验汇总报告表
剂量给予
起始配对数
交配过的雌鼠数
成功受孕雌鼠数
交配1d~5d内受孕动物数
交配6d~nd内受孕动物数
妊娠≤21d动物数
妊娠=22d动物数
妊娠≥23d动物数
产下活仔鼠的母鼠数
产后4d仔鼠存活的母鼠数
母鼠黄体数(平均）
母鼠着床数(平均）
出生时存活仔鼠/母鼠数(平均）出生后4d活仔鼠/母鼠数（平均）出生时仔鼠性别比（雄/雌）（平均）出生后4d仔鼠性别比（雄/雌）（平均）出生时窝重(平均）
出生后4d窝重(平均）
出生仔鼠重量(平均）
出生后4d仔鼠重量（平均）
为○个的母鼠数
畸形仔鼠
后代丢失
为1个的母鼠数
为≥2的母鼠数
为0个的母鼠数
着床前（黄体数
减着床数）此内容来自标准下载网
为1个的母鼠数
为2个的母鼠数
为≥3个的母鼠数
0（对照组）
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