【SN商检标准】 植物病毒分子生物学检测规范

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3457-2012 植物病毒分子生物学检测规范 Criterion on detection of plant virus by molecular biology 2012-12-12发布 2013-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局发布 前言 本标准按照GB/T1.1-2009规则起草，由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、厦门出入境检验检疫局、深圳出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、北仑出入境检验检疫局。主要起草人：梁新苗、邓丛良、郭立新、陈红运、周琦、边勇、汪万春、李桂芬、郑耘、朱水芳、李建光。 1 范围 本标准规定了进出境植物检疫工作中植物病毒、类病毒的分子生物学检测方法与要求，适用于进出境植物及植物产品中植物病毒、类病毒的分子生物学检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用必不可少：SN/T1193 基因检验实验室技术要求。 3 术语和定义 3.1 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction; PCR：模板DNA先经高变性为单链，两条引物分别与模板DNA两条链上的互补序列退火，在DNA聚合酶作用下以四种脱氧核糖核酸为底物进行延伸，通过循环重复变性、退火和延伸，实现目标DNA片段的几何倍数扩增。3.2 反转录-聚合酶链式反应 reverse transcription/polymerase chain reaction; RT-PCR：以RNA为模板，采用Oligo(dT)、随机引物或特异性引物，在反转录酶作用下将RNA转录为cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增。3.3 实时荧光PCR real-time fluorescence PCR：在常规PCR基础上，在引物扩增序列中加入特异性荧光探针，探针酶切后释放荧光信号，实现荧光信号累积与PCR产物形成同步。3.4 Ct值 cycle threshold：荧光信号达到设定阈值所经历的循环数。3.5 核酸杂交技术 nucleic acid hybridization：两段来源不同的核酸分子在适宜条件下互补区段退火复性形成异质双链分子。3.6 核酸序列测定 nucleic acid sequencing：通过化学方法测定基因片段核苷酸排列顺序，主要技术包括Sanger双脱氧链末端终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。3.7 基因芯片技术 gene-chip detection：将探针DNA固定于载体上，样品核酸经标记后与探针杂交，通过激光共聚焦荧光检测扫描芯片，分析杂交信号强度，从而获取样品分子数量和序列信息。 4 原理 植物病毒由核酸和蛋白质外壳组成，具有侵染活性，可分为DNA病毒和RNA病毒。PCR、RT-PCR、实时荧光PCR、核酸杂交、核酸序列测定和基因芯片技术均利用核酸碱基配对特性进行检测。RNA病毒检测需先提取总RNA并转录为cDNA，再进行后续检测；DNA病毒直接以提取的DNA为模板进行检测。 5 实验总体要求及工作人员操作要求 植物病毒分子生物学检测需严格遵循实验室技术规范，保证检测结果的准确性与可靠性，并严格遵守生物安全操作规程。