【SN商检标准】 刺激隐核虫检疫技术规范

SN/T 3988—2014 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 刺激隐核虫检疫技术规范 Quarantine protocol for Cryptocaryon irritans (2014-11-19 发布，2015-05-01 实施) 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、福建农林大学。 本标准主要起草人：王武军、张志灯、张体银、郑腾、陈红燕、白泉阳、郭书林、于师宇、陈学群、江一帆。 1 范围 本标准规定了鱼类刺激隐核虫的检疫技术规范。本标准适用于鱼类刺激隐核虫病的检疫。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SC/T 7103 水生动物产地检疫采样技术规范 3 概述 刺激隐核虫简介参见附录A 4 设备、材料和试剂 4.1 水：GB/T 6682中二级水的要求 4.2 经121℃、15min高压灭菌的海水或3.5%氯化钠溶液，制备方法见B.1 4.3 0.85%氯化钠溶液 4.4 固定液：4%福尔马林、70%酒精 4.5 Giemsa染色液，制备方法见B2 4.6 解剖盘 4.7 载玻片、盖玻片、培养血 4.8 手术剪、眼科手术镊、解剖针、吸管、体视显微镜 4.9 显微镜 4.10 普通冰箱 5 临床诊断 5.1 发病症状 患病初期，病鱼在水中漫游不止，分布散乱，开口呼吸且频率加快，食欲衰退。患病后期，病鱼离群于水面缓慢游动，食欲废绝，皮肤和鳃上白点愈加明显，体表发炎溃疡，鳍条缺损，开叉，眼角膜混浊发白。病鱼体表、鳃因粘液大量分泌而形成白色混浊薄膜，体表、眼角膜、口腔周围和鳃等与外界接触处可肉眼观察到0.3mm~0.5mm大小的白点，特别是深色皮肤上更容易观察到（参见图C.1），病情严重时体表被一层混浊白膜包裹。 5.2 病理变化 刺激隐核虫幼虫侵入鱼上皮，随着滋养体的生长发育，上皮层表面逐渐出现肉眼可见的白点。病鱼体表一个位点通常只生长一个虫体，严重感染时可见2~4个虫体共同感染一个位点。严重感染部位可出现上皮渐进性坏死、外层脱落；鳃丝组织显著增生；眼角膜增生，眼球混浊。 5.3 流行病学 刺激隐核虫为世界性分布，由其引起的刺激隐核虫病流行地区很广，海水养殖鱼类中几乎都可发生。从晚春到初秋，水温在20℃～30℃时本病最容易流行。刺激隐核虫在宿主组织内体积增大但不分裂，在宿主体内停留生长3d～4d后便离开宿主，在水底形成包囊。经4d至2周，每个包囊可释放100～300个感染期幼虫，侵入鱼的体表。因此，多数病例在低水平感染后数日内病情加重。 5.4 初步诊断 海水鱼存在皮肤和鳃上出现白点，在水面漫游等上述症状的，可初步诊断为刺激隐核虫病。 6 样品采集 按照SC/T 7103的规定进行采样。在水温为20℃～25℃时，海水养殖区网箱中随机抽取样品进行表观健康检查，发现有疑似症状的，采样送实验室检测，优先采集尾鳍或胸鳍出现白点的病鱼，每份样品采集10～20尾。对于外表健康无临床症状的鱼体，适当扩大采样数量。采样后，将样品放入完整、结实的包装容器内，保持样品处于活体状态尽快送达实验室。样品送达实验室后，参照D.1介绍的方法采集虫体。必要时，对采集的虫体参照D.2介绍的方法进行固定后保存。 7 实验室镜检 7.1 虫体直接镜检 将第6章中采集的虫体或取病鱼全鳃条（选取每边鳃的第一片鳃片接近两端的位置各剪取一小块鳃丝），用高压灭菌海水或3.5%氯化钠溶液制作水封片，在10×4的低倍镜下观察。刺激隐核虫为呈圆形或卵圆形、体色不透明、全身具有纤毛、做缓慢旋转运动的虫体（参见图C.2)。 7.2 虫体染色镜检 刮取体