【行业标准】 饲料中烟酰胺的测定 高效液相色谱法

1CS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2130—2012
饲料中烟酰胺的测定
高效液相色谱法
Determination of niacinamide in feeds-High-performance liquid chromatography2012-02-21发布
2012-05-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.120G9给山的规则起草。本标准出中华人民共和国农业部畜牧业司提山。本标准由全国饲料T业标推化技术委员会（SAC/TC76)归I，本标雅起草单位：农业部饲料质量监肾检验测试中心(西安)。本标雅上要起草人：贾青、张屑、冯西辉、李会玲、李胜、郭洁、任均良。NY/T2130—2012
一范围
饲料中烟酰胺的测定
高效液相色谱法
本标准规定了饲料中烟酰胺含量的高效液和色谱检測方法。本标推适用寸配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中烟酰胺的测定。本标准的定量限为1mg/kg。
2规范性引用文件
NY/T2130—2012
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件：议注日期的版木适而于本文件。凡是不注期的引用文件，H最新版本(包括所有的修改单)适于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
试样中的烟酰胺经提取液提取、离心后，取上滑液过0.45pm滤膜，用高效液和色谱仪紫外/：极管阵列检测器检测，外标法定景。4试剂和材料
除作另有规定，仪使H分析纯试剂和符合G13/TG682中的=级用水，色谱用水符合GB/T6682中一级用水的规定。
4.1非醇：色谱纯。
4.2异内醇：色谱纯。
4.3辛烷磺酸钠：色谱纯。
4.40.1%辛烷磺酸钠（pH--2.1)：称取1￥烷磺酸钠（1.3)加约800ml一级水溶解，用高氯酸调pl=2.1，-级水定穿1009ml.混匀,过0.45um滤膜。4.5样品提取液：800ml.水巾加人50mL乙睛，10ml.冰乙酸混合，用水定容垒1000ml.混4.6烟酰胺标准储备液：称取烟酰胺标准品（纯度98%)0.1g（精确至0.0001g）.置于100ml.窄晨瓶中，用提取液（4.5）游解并定容，该溶液浓度为1mg/mL，置4℃冰箱中保存，有效期3个月。4.7烟酰胺标准中间液：准确吸取5.0ml.烟避胺标准储备液（4.6)于100ml穿带瓶中，用提取液(4.5）稀释至100ml。该溶液浓度为50jg/mL，置4冰箱巾保存，有效期1个月。4.8烟酰胺标准7.作液：准确移取10.0ml.烟酰胺标准中问液（4.7)至100ml.穿量瓶中，用提取液(4.5)稀释定容，该系列标准济液浓度为5.0μg/ml.．有效期1周。4. 90.45 m有机微孔滤膜。
5仪器设备
实验室常加仪器、设备及以下设备。1
NY/T2130--2012
5.1高效液相色谱仪：配备紫外或二极管阵列检测器。5.2离心机：转速为5000r/tmin以上。5.3超声波清洗器，
6试样采集及样品的制备wwW.bzxz.Net
按GB/T14699.1的规定来集试样后，按GH/T20195的规定，选取具有代表性的样品，叫分法缩溅分取200g，粉碎过0.45tm孔径（40月）的分析筛，混匀，装人磨T1瓶中备用。7分析步骤
7.1提取
准确称取适量试样（配饲料5g，浓缩饲料2g，添加剂预混合何料0.5g.精确到0.0001g），置100 rml.容景瓶中，人提取液(4.5)约70mL，超市振荡10min，放置室温，用提液(4.5)定容至刻度混合均匀，然后在5000r/min离心机(5.2)上离心5min,移1清液过(.45 putr滤膜（4.9)过滤，供商效液相色谱测定或提敢液适当稀释后测庭。7.2色谱参考条件
检测波长：267nm.
色谱柱：Cg柱，5μm,柱长150mm,内径4.6mm，或性能类似的色谱柱。流动柑:0.1%宰烷磺酸钠pH=2.1(4.4）：甲醇(4.1）异丙醇(4.2)=91：7：2.流速：l.0mL/min。
栏激:25
进样量:20 μL。
7.3HPLC刚定
取适量标准工作液（4.1])和试详制备液(7.1)测定，以色谱峰保留时间定性，以色谱峰面积积分值作单点或多点校推定量。烟酰胺标准色谱图参见图A.1。8结果计算及表示
8.1结果计算
饲料4烟酰胺的含量X：，以克每T克(mg/kg)表示，做单点校正按式(1)计算。P。C×V
式中：
P。—一试样溶液峰而积；
Cs一-标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/ml）：V---试样总稀释体积,单位为毫升(mL);Ps-标准溶波峰面积值；
m-一试样的质量，单位为克（g）8.2结果表示
定结果用平行测定的算术平值表示，计算结果保留3位有效数字。9重复性
在同-实验室+由同-操作人员完成的两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。2
附录A
【资料性附录】
烟酰胺标准色谱图
烟酰胺标准(5.0μg/ml)色谱图见图A.1。12-
PL6'8-
图A.1烟酰胺标准（5.0μg/ml)色谱图NY/T2130--2012
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