【国家标准(GB)】 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验

中华人民共和国国家标准
GB4789.402010
食品安全国家标准
食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验National food safetystandardFood microbiological examination: Enterobacter sakazaki2010-03-26发布
中华人民共和国卫生部
2010-06-01实施
本标准代替GB/T4789.40-2008
《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验》。本标准与GB/T4789.40-2008相比，主要变化如下：-修改了标准的中英文名称：
-删除了附录A中A.3。
本标准的附录A、附录B为规范性附录本标准所代替的历次版本发布情况为：GB/T4789.40-2008。
GB4789.40—2010
1范围
食品安全国家标准
食品微生物学检验
阪崎肠杆菌检验
本标准规定了食品中阪崎肠杆菌（Enterobactersakazakii）的检验方法。本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验2
设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下2.1恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃。2.2冰箱：2℃~5℃。
恒温水浴箱：44℃±0.5℃。
天平：感量0.1g。
2.5均质器。
2.6振荡器。
GB4789.40—2010
2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。2.8
无菌锥形瓶：容量100mL、200mL、2000mL。2.9无菌培养血：直径90mm。
2.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.11全自动微生物生化鉴定系统。培养基和试剂
缓冲蛋白陈水（bufferpeptonewater，BPW）)：见附录A中A.1。3.1
3.2改良月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤-万古霉素（modifiedlaurylsulfatetryptosebroth-vancomycinmedium，mLST-Vm)：见附录A中A.2。3.3阪崎肠杆菌显色培养基。
3.4胰蛋白陈大豆琼脂（trypticasesoyagar，TSA)：见附录A中A.3。3.5生化鉴定试剂盒。
3.6氧化酶试剂：见附录A中A.4。3.7L-赖氨酸脱羧酶培养基：见附录A中A.5。3.8L-鸟氨酸脱羧酶培养基：见附录A中A.6L-精氨酸双水解酶培养基：见附录A中A.7。3.9
糖类发酵培养基：见附录A中A.8。3.10
3.11西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A中A.9。GB4789.40—2010
4检验程序
阪崎肠杆菌检验程序见图1。
5操作步骤
5.1前增菌和增菌
第一法阪崎肠杆菌的检验
检样100g（mL）
+BPW稀释液900mL
36℃±1℃,18h+2h
1mL+mLST-Vm10mL
44℃±0.5℃，24h+2h
阪崎肠杆菌显色培养基
36C±1C,24h±2h
挑取疑似菌落
25℃±1℃,48h±4h
挑取黄色菌落
生化鉴定
图1阪崎肠杆菌检验程序
GB4789.40—2010
取检样100g（mL）加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白陈水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h±2h
5.2分离
5.2.1轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色3
培养基平板，36℃±1℃培养24h±2h。GB4789.40—2010
5.2.2挑取1个～5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。25℃±1℃培养48h±4h。5.3鉴定
自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。表1阪崎肠杆菌的主要生化特征
生化试验
黄色素产生
氧化酶
L-赖氨酸脱羧酶
L-鸟氨酸脱羧酶
L-精氨酸双水解酶
柠檬酸水解
D-山梨醇
L-鼠李糖
D-燕糖
D-蜜二糖
苦查仁武
注：+>99%阳性：一>99%阴性：（+）90%一99%阳性：（-）90%—99%阴性。6结果与报告
综合菌落形态和生化特征，报告每100g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。第二法阪崎肠杆菌的计数
7操作步骤
7.1样品的稀释
固体和半固体样品：无菌称取样品100g、10g、1g各三份，加入已预热至44℃分别盛有900mL、7.1.1
90mL、9mLBPW中，轻轻振摇使充分溶解，制成1:10样品匀液，置36℃±1℃培养18h+2h。分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h±2h。7.1.2液体样品：以无菌吸管分别取样品100mL、10mL、1mL各三份，加入已预热至44℃分别盛有900mL、90mL、9mLBPW中，轻轻振摇使充分混匀，制成1:10样品匀液，置36℃±1℃培养18h+2h。分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h+2h。7.2分离、鉴定
同5.2，5.3。
8结果与报告
GB4789.40—2010
综合菌落形态、生化特征，根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数，查MPN检索表，报告每100g（mL）样品中阪崎肠杆菌的MPN值（见附录B中表B.1)。缓冲蛋白陈水（BPW）
A.1.1.1成分
蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）磷酸二氢钾
蒸馏水
A.1.1.2制法
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
加热搅拌至溶解调节pH，121℃高压灭菌15min10.0g
1000mL
GB4789.40—2010
A.2改良月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤-万古霉素（Modifiedlaurylsulfatetryptosebroth-vancomycinmedium，mLST-Vm)
A.2.1改良月桂基硫酸盐胰蛋白陈（mLST）肉汤A.2.1.1成分
氯化钠
胰蛋白陈
磷酸二氢钾
磷酸氢二钾
十二烷基硫酸钠
蒸馏水
pH6.8±0.2
A.2.1.2制法
1000mL
加热搅拌至溶解，调节pH。分装每管10mL，121℃高压灭菌15min。A.2.2万古霉素溶液
A.2.2.1成分
万古霉素
蒸馏水
A.2.2.2制法
10.0mg万古霉素溶解于10.0mL蒸馏水，过滤除菌。万古霉素溶液可以在0℃～5℃保存15天。A.2.3改良月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤-万古霉素（Modifiedlaurylsulfatetryptosebroth-vancomycinmedium，mLST-Vm)
每10mLmLST加入万古霉素溶液0.1mL，混合液中万古霉素的终浓度为10μg/mL。注：mLST-Vm必须在24h之内使用。A.3胰蛋白陈大豆琼脂（TSA）
胰蛋白陈
植物蛋白陈
氯化钠
蒸馏水
pH 7.3±0.2
A.3.2制法
1000mL
加热搅拌至溶解，煮沸1min，调节pH，121℃高压15min。A.4氧化酶试剂
A.4.1成分
N,N,N,N-四甲基对苯二胺盐酸盐蒸馏水
A.4.2制法
少量新鲜配制，于冰箱内避光保存，在7d之内使用。A.4.3试验方法
GB4789.402010
用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸平板上。如果滤纸在10s之内未变为紫红色、紫色或深蓝色，则为氧化酶试验阴性，否则即为氧化酶实验阳性。注：实验中切勿使用镍/铬材料。A.5L-赖氨酸脱羧酶培养基
A.5.1成分
L-赖氨酸盐酸盐（L-lysinemonohydrochloride）酵母浸膏
葡萄糖
溴甲酚紫
蒸馏水
pH6.8±0.2此内容来自标准下载网
A.5.2制法
1000mL
将各成分加热溶解，必要时调节pH。每管分装5mL，121℃高压15min。A.5.3实验方法
挑取培养物接种于L-赖氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30℃+1℃培养24h+2h观察结果。L-赖氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。A.6
L-鸟氨酸脱羧酶培养基
A.6.1成分
L-鸟氨酸盐酸盐（L-ornithinemonohydrochloride）酵母浸膏
葡萄糖
溴甲酚紫
蒸馏水
pH6.8±0.2
A.6.2制法
1000mL
将各成分加热溶解，必要时调节pH。每管分装5mL。121C高压15min。7
A.6.3实验方法
GB4789.40—2010
挑取培养物接种于L-鸟氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30℃±1℃培养24h±2h，观察结果。L-鸟氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。A.7L-精氨酸双水解酶培养基
A.7.1成分
L-精氨酸盐酸盐（L-argininemonohydrochloride）酵母浸膏
葡萄糖
溴甲酚紫
蒸馏水
pH6.8±0.2
A.7.2制法
1000mL
将各成分加热溶解，必要时调节pH。每管分装5mL。121℃高压15min。A.7.3实验方法
挑取培养物接种于L-精氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30℃±1℃培养24h±2h，观察结果。L-精氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。A.8糖类发酵培养基
A.8.1基础培养基
A.8.1.1成分
酪蛋白 (酶消化)
氯化钠
蒸馏水
pH6.8±0.2
A.8.1.2制法
1000mL
将各成分加热溶解，必要时调节pH。每管分装5mL。121℃高压15min。A.8.2糖类溶液（D-山梨醇、L-鼠李糖、D-蔗糖、D-蜜二糖、苦杏仁武）A.8.2.1成分
蒸馏水
A.8.2.2制法
分别称取D-山梨醇、L-鼠李糖、D-蔗糖、D-蜜二糖、苦杏仁武等糖类成分各8g，溶于100mL蒸馏水中，过滤除菌，制成80mg/mL的糖类溶液。A.8.3完全培养基
A.8.3.1成分
基础培养基
糖类溶液
A.8.3.2制法
无菌操作，将每种糖类溶液加入基础培养基，混匀：分装到无菌试管中，每管10mL。A.8.4实验方法
挑取培养物接种于各种糖类发酵培养基，刚好在液体培养基的液面下。30℃±1℃培养24h+2h，观察结果。糖类发酵试验阳性者，培养基呈黄色，阴性者为红色8
9西蒙氏柠檬酸盐培养基
柠檬酸钠
氯化钠
磷酸氢二钾
磷酸二氢铵
硫酸镁
溴百里香酚蓝
蒸馏水
pH6.8±0.2
8.0g18.0g
1000mL
GB4789.40—2010
将各成分加热溶解，必要时调节pH。每管分装10mL，121℃高压15min，制成斜面。A.9.3
实验方法
挑取培养物接种于整个培养基斜面，36℃±1℃培养24h+2h，观察结果。阳性者培养基变为蓝色9
附录B
（规范性附录）
阪崎肠杆菌最可能数（MPN）检索表B.1
阪崎肠杆菌最可能数（MPN）检索表每100g（mL）检样中阪崎肠杆菌最可能数（MPN）的检索见表B.1表B.1阪崎肠杆菌最可能数
（MPN）检索表
阳性管数
95%可信限
注1：本表采用3个检样量[100g(mL)、上限
阳性管数
10 g(mL)和 1 g(mL))
每个检样量接种3管。
GB4789.40—2010
95%可信限
注2：表内所列检样量如改用1000g(mL)、10g(mL)、未和1g(mL)时，表内数字应相应降低10倍：如改用10g(mL)、1g(mL)、和0.1g(mL)时，则表内数字应相应增高10倍，其余类推10
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。