【农业行业标准(NY)】 香蕉种质资源离体保存技术规程

ICS 65.020.20
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1690—2009
香蕉种质资源离体保存技术规程Technical regulations for invitro conservation of banana germplasm2009~03-09发布
2009-05-01实施
中华人民共和国农业部
本标推的附录A和附录B为资料性附录。本标雅由中华人民共和国农业部农垦局提出言
本标准出农业部热带作物及制品标准化技术委员会归I。NY/T1690—2009
本标准起节单仪：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、国家重要热作物工程技术研究中心、农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室。本标雅主要起草人：李志英、徐立、马千余、黄羿兰、李克烈、陈佛。1范围
香蕉种质资源离体保存技术规程NY/T 1690 2009
本标准规定了否蒸(MusananLou.>种质资源离体保存技术的术语和定义、基术要求、保存技术、检验方法、技术指标等相关内穿。本标适用于香蕉种质资源的常温、低温利超低温离休保存。2规范性引用文件
下列文件中的条款过本标准的引用而成为本标推的条款。凡是注日期的用文件，共随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修计版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究足补可使用这些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本质用于本标准。NY/T357香蕉组培苗
3术语和定义
NY/357中确立的及下列术语和定义适用于本标准。3. 1
常温保存monnal temperalurc onservatiom在(25工2)℃下保存正常先长离体培养物的方式，3.2
低温保存lw lemperature conscrvation3.3
在（16十1)℃下通过改变培养基成分和光照条件保存缓慢生良离体培养物的方式。超低温保存cryoprescrvation
在液氮（一196℃)中保存代谢和生长几乎完全停止、生物学状态相对稳定的离体培养物的方式。4基本要求
4.1用于种质资源保存的材料必须保证品种纯正，来源川靠。4.2利用聚合酶链式反应（PCR)和反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测，确保材料不带否蒸花呼心腐病（CMV)和束顶病病毒(BTV)。4.3种质未发生变异。
4.4详纫登记材料情况（见附录A)。4.4.1名称：种质名、品系名、地方名，4.4.2产地：原产地
4.4.3号种情况：来源地，引种人、原保存单位、原保存单位编号、引种时间。4.4.4种质编号：国家统一编号、引种号、采集号、保存号。4.4.5保存情况：保存材料、保存者、保存数量、继代时问、继代次数、操作人。5常温保存
5.1保存材料
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选择符合4.1、4.2和4.3的种质材料并按4.4详细登记，终表面消毒后在无菌条件下切取大小约0.5cI的生长点组织，按照常规组织培养方法进行外植休诱导、塔殖（继代）培养，繁殖出的试管苗用作香蕉离体保存的材料。
5.2保存容器
采用规格为18mm25mm×169mm~-180nm的试管，用内置待胶的密封塑料盖均口，用标签污明种质编号。
5.3保存条件
保存温度（25+2)℃，光照强度20μmol/m·s）30umol/(m·s)，光照时8h/d-12h/d，养基为MS-30g/L燃栅-1.12mg/L6卡基腺呤（6-RA）+0.17mg/Lα蔡乙酸(VAA），PH5.8。每管培养湛 15 ml~20 mL。5.4保存数量
份种质保存10管以上，辑管1个从芽。5.5继代时间
每2-~3个月继代1次
6低温保荐
6.1保荐材料
6.2保存容器
间5.2。
6.3保存数量
每份种质保存10管以工，每管1个从穿。6.4保存条件
保存温疫16上1℃，光照强度15umol/（m2s）~20μmol/m：）.光照时问12h/d，培养基为MS+i0g/L照糖+1mg/L6-BA-0.1mg/L叫[哚/酸（TAA)，pH5.8。每管加培养基15ml20EnL.
6.5继代时间
每12-15个月继代1次。
7超低温保存
7.1保存材料
选摔符合NY/T357规定的一级标准的红培牛根瓶苗作为超低温保存材料：7.2保存数量
每份种质保存19管以上,每管5~7个紫尖7.3预培养
将7.1的材料在MS30g/1.燕蔗糖的固体培养基上预培养，培养条件为：温度（2土2)℃，光照时间16 h/d,光照强度40 μmol/m-)~-50μnl/(m2*s),时间30d~d。7.4分离先茵茎尖
选取预培养后假茎粗为0.5um~0.8cm的健康生根植株，在无菌条件下剥取0.8rmm-~1.0mm茎尖：
7.5装载
将无菌稀纸(1.5cm1~-2ctm×1.5cm-2cm)放微在磨养皿中,用装载液(附录B)湿润。将5~7个2
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艺尖包在帮纸中，迅速浸人装载液中，在22℃-~25下音处放置20tmin~30minm后取山，用无菌滤纸吸去多余的装载液。
7.6脱水
将棉纸团浸在预冷的PVS2溶液（附录B)中，冰浴20min7.7快速冷冻保荐
将冰浴后的棉纸团放人装满新鲜制备的用冰预冷的I\VS2溶液的小塑料冻存管中柠紧施盖后，用一层时口膜封，迅速将冷冻管漫人液氮中保存。7.8化冻
光菌条件下，将冷冻保存管在1s内从液氮中转移到40℃的水浴中，刷烈振荡90s.然后在超净T作台上将色有萃尖的棉纸团从冷冻管中取出，在灭过菌的下燥滤纸「放做30。7.9卸载
将棉纸团转移到卸载液（附录B)中，在22C～25℃下放置10min，每隔5min换一次御载液。然后将棉纸闭展开，鉴尖在卸裁液中再悬浮占min。7.10再牛
取两张灭过菌的滤纸，平铺于培养血内的半固体MS十100/L蓝糖的培养基上；将茎火从卸载液中捡山，放丁滤纸工，在22℃~25℃下，放置：12h~18h后，再将尖转移到半固休MS+30g/L熊糖0.5mg/L6BA的培养基上，暗培养10d--15d：然后在（25士2)C,光强度60μumol/（m°-s)~~80umol/（m°s），光照时间16 h/d条件下培养40 d~60d后，冷冻的鉴尖就会发育成幼苗。8检验方法
8.1批样方法、病毒和变异检测按照NY/T357进行。8.2冻后再生率用冻存后能够再牛成苗的茎尖数卢全部冻存您尖数的百分率衣求。9技术指标
9.1常温保
变异率2%无蕉花叶心腐病和束项病。9.2低温保存
变异率逐2%，尤香蕉花叶心腐病和束顶病9.3超低温保存
冻后再生率20火，变异率0.5%，无香蕉花叶心摘病和束顶病：3
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种质名
冰源理
原保存单位编号
引种时间
国家统编号
保行号bZxz.net
保存材料
继代茨数
继代间
保行数员
操作人
附崇A
【资料性附录】
香蕉种质资源离体保存登记表
品系名
原产地
原保行单位
引种人
引神号
采集号
保存方法
探存背
B.1装载液
附录B
【资料性附录】
香蕉茎尖超低温保存溶液的配制MS+184mL/I.甘油—137g/T.蔗糖，pH5.8,0.22μum滤膜过滤火菌。B.2PVS2溶液
NY/T 1690-2009
MS+300mL/L甘油1150mL/L（.二醇+150mL/L二甲基亚磁(DMSO)-137g/L熊辨，pH5.8.0.22m滤膜过滤灭。
B.3卸载液
MS411g/L蔗糖pI5.8.0.22μm滤膜过滤灭。注：以上溶液所用或剂至少为分析纯级。
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