【国家标准(GB)】 SPF鸡 微生物学监测 第7部分：SPF鸡 胚敏感试验

ICS11.220
中华人民共和国国家标准
GB/T:17999.7—2008
代替GB/T 17999.61999
SPF鸡微生物学监测
第7部分：SPF鸡胚敏感试验
SPF chicken-Microhiological surveillancePart 7,Embryo susceptibility test for SrF chicken2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
全品伙伴
2009-05-01实施
GB/T17999&SPF鸡·微生物学测>分为10个部分第1部分：SPF鸡：微生物学监测总则；第2部分：SPF鸡·红细胞案集抑制试验；-第3部分:SPF鸡
第4部分SPF鸡
血清中和试验，
血清平板凝集试验：
第：部分SPF鸡琼脂扩散试验；
第6部分.SPF鸡醇联免疫吸附试验：第7部分:SFF鸡
胚敏感试验：
-第8部分：SPF鸡鸡白抄门氏菌检验；第9部分：SFF鸡：试管避集试验：第10 部分:SPF鸡
间接免疫荧光试验。
本部分为GB/T17999的第7部分：本部分代替GB/F17999.6-1999SPF鸡胚敏感试验》。本部分与GB/T17999.6--1999箱比主要变化如下：增加广资料性附录A“卵黄按种技术和EID。测定方法”重新制定了试验成立条件和结果判定标准。本部分的附录A为资料性附录：：本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国动物防标准化技术委员会（SAC/TC181)归口）GB/T ·17999.72008
本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物生与流行病学中心济南斯帕法斯家禽有限公司。
本部分主要起草人：曲连东，刘家森、韩凌霞、部卫屋、朱东、单忠芳、娄骞、司昌德、于海被、孟庆文本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T17999:6—1999。
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www.bzxz.net
SPF鸡
微生物学监测
第7部分SPF鸡：胚敏感试验
GB/T17999的本部分规定了胚缴感验的技未本部分适用干对SPF鸡避行脑脊髓炎病寿抗体的检测。规范性引用文件
下列文件中的条赖
件，其随后所有的修惠
协议的各方研究是差
部分。
GB/ 17999
Van Roel
体鸡群的鸡胚
鸡胚对经卵黄
试剂和器权
4.1·试剂
AF-Vau
SPF鸡蛋
T17999的本部分的引用而成为
包括勤
008:SF
CC AY33)
性,引起航
的病萨有拟
病毒（E
被捡蛋(取
.4.2.3
1mL注射器：
7号针头。
恒温培养箱。
超净工作台。
小型孵化器。
操作程序
不食、运动性降低、起
5.1取被检蛋、标雅SPF蛋孵至6日龄，GB/T·17999.7--2008
分的款，
凡是注日期的引用文
十本分
，鼓励根据本部分达成
的引鼠文其最新版本逝用于本
德生物管监测总观
应幸棕，其肴高度嘴神经性：对无折等特征性病变，
疫或感染鸡群的
5.2.取6日龄被检鸡胚，每胚经卵黄接称（接种方法参见附录A)0.2mt.含100EIDs的AE-VanRoekel病毒液，接种完毕刑蜡封孔，同时设6Ⅱ龄SPF鸡胚按种病与不接种病毒分别作为标准阳件、阴性对照。
5.3接种后的鸡胚，骨于37℃～37:5℃孵化器中孵化，每天照胚一次，取出死亡鸡胚，接种后第12d取出全部鸡胚待检。
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GB/T 17999.72008
6结果判定
6. 1阴性、阳性对照
当接种SPF对照鸡胚均呈食脑脊髓炎病毒所的特异病变（早期为胸腹部肌肉皮下水肿，当接种后 10 d~12 d解活胚时,见腿肌囊缩、足趾卷曲）,不接种 SPF对照鸡肝无特异病变时:试验成立,6.2被检结果判定
100%鸡胚有特征性病变，表明此鸡群未感染离脑脊懒炎病毒；鸡胚无特征性病变，表明此鸡群巴感染禽脑脊髓炭病。
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http：//foodmate.netA.1
卵黄囊(XS)接种
（资料性附录）
卿黄接种技术和EIDs测定方法
GB/T 17999.72008
选5日龄~7口龄鸡胚经照蛋检查后，画出气蜜和胎位，对应气室中央的蛋克先用2.5%碘酒消毒，再用75%酒精脱碘。用打孔器打一小孔，勿损伤充膜。接种时针头迅速稳亲地通过小孔，沿胚的纵轴深人约3cm，此时注射器轻轻往回插一下，如创头在那黄中，可见卵黄被抽出，此时就可将注射物注入，用融化的石蜡封闭壳孔，置37℃培养。A.2
EID剪测定
A.2. 1将AE-VunRockcl病毒忌液作10倍系列稀释，敢适宜稀释度的病渐0.2inI-按种6月龄SPF鸡胚，由最高稀释度开始，饿一稀释度接种4收6枚。接种后的鸡胚，置37℃-~37.5孵化器中孵化，每大照蛋一-次，取出死亡鸡胚，至接种后第12孔，统计鸡的死亡和感染数，A.2.2对于接种后21h内死1:的鸡胚忽略不计。与止常SPF鸡断对比，感染AE-VanRcckel病的鸡胚出现特征性病变（期为胸腹部肌肉皮下水肿，晚均表现为腿肌塞缩、足卷曲)的判为感染。A.2.3计算各稀释度接种鸡胚后死亡及感染个体的白分率。按Reed和Mucnch法计算病毒胚半数感染境（EID）。
试验举例：病毒稀释及鸡胚死亡情况见表A.1A.2. 4
病毒稀释度
距离北例三
感染及死亡数
88%-50%
88%-29%
抛察结巢
未感染激
分率/%
感染放死氏数
照计结果
未然染数
LgEIDa一高于50%的病毒翻释度的对数+距离比例×稀释系数的对数- 5+0. 64×(-1)= —5. 64
m：EIDa=10-5.4/0.2mlz。
百分率/%
即：将病毒悬液作10-5稀释后，接种鸡胚0.21nL，可以造成50%的鸡胚感染。将病毒悬液作10-314稀释后，即为100EIDs0/0.2mL。h
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