【商检行业标准(SN)】 化妆品微生物检验方法 第3部分：肺炎克雷伯氏菌

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2206.3—2009
化妆品微生物检验方法
第3部分：肺炎克雷伯氏菌
Determination of microbiological in cosmetics-Part3:Klebsiellapneumoniae
2009-02-20发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-09-01实施
SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为以下部分：第1部分：沙门氏菌；
第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；第3部分：肺炎克雷伯氏菌；
第4部分：链球菌；
一第5部分：肠球菌。
本部分为SN/T2206的第3部分。
本部分的附录A为规范性附录。
本部分由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2206.3—2009
本部分起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。
本部分主要起草人：许龙岩、胡科锋、刘静宇、易敏英、杨捷林、翁文川、凌莉、阳静、袁幕云、陈碧玲本部分系首次发布的出人境检验检疫标准I
1范围
化妆品微生物检验方法
第3部分：肺炎克雷伯氏菌
SN/T2206的本部分规定了化妆品中肺炎克雷伯氏菌的检验方法本部分适用于化妆品中肺炎克雷伯氏菌的检验2规范性引用文件
SN/T 2206.3—2009
下列文件中的条款通过SN/T2206的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法总则
3材料和设备
吸管：2.0mL和10.0mL.分刻度0.1mL。3.1
三角瓶：150mL，250mL。
3.3培养血：直径90mm。
3.4接种针、接种环。
3.5载玻片。
3.6样品处理器具：镊子、剪刀、勺子。3.7天平：0g~600g，感量0.1g。3.8均质器：转速1000r/min以上。3.9恒温培养箱：36℃±1℃
3.10高压灭菌器。
VITEK全自动微生物鉴定系统或类似设备。注：VITEK是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用这些等效产品。4培养基和试剂
4.10.85%生理盐水。
SCDLP液体培养基（见附录A中第A.1章）。4.2
4.3胆硫乳琼脂(DHL)（见附录A中第A.2章）。4.4营养琼脂斜面培养基（见附录A中第A.3章）。4.5
动力半固体琼脂（见附录A中第A.4章）。4.6
氧化酶试剂（见附录A中第A.5章）。4.7API20E生化鉴定试剂条或其他等效产品。注：API20E生化鉴定试剂条是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用这些等效产品。1
SN/T2206.3—2009
4.8GN测试卡。
注：GN测试卡是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者.并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用这些等效产品。5方法提要
化妆品中肺炎克雷伯氏菌检验方法是通过增菌、分离、生化鉴定对化妆品中可能存在的肺炎克雷伯氏菌进行定性检验。
6检验程序
肺炎克雷伯氏菌检验程序见图1。检样 10 g/ml.制成1:10
祥品稀释液
取10 mL
90 mL SCDLP 增菌液
36 ℃+1 芒培养 18 h ～~ 24 h选择性培养基 DIIL-板
36 ℃±1 ℃培养 18 h ~ 24 H
染色镜梳载化嗨试验动力试验
API20E、VITEK或按表1进行生化试验报告结果
7样品制备
化妆品中不同类型的检样制备参照GB/T7918.1进行制样。8操作步骤
8.1取1：10样品稀释液10mL接种到90mLSCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养18h~24h。8.2自上述培养液中，取（1～2)接种环，划线接种于胆硫乳琼脂平板（DHL)中，置36℃士1℃培养18h～24h。在DHL平板上肺炎克雷伯氏菌菌落呈淡粉红色，大而隆起，光滑湿润，粘液状，相邻菌落容易融合成脓汁样，接种针挑取菌落时呈丝状粘连8.3，从DHL平板上至少挑取5个典型或可疑菌落，如果平板上可疑菌落少于5个，则全部挑取，把挑取的可疑菌落分别穿刺于动力半固体琼脂，并接种到营养琼脂斜面培养基36℃土1℃培养18h～24h8.4：将8.3中营养琼脂斜面培养基上的纯培养物做革兰氏染色、氧化酶试验。无动力，革兰氏染色阴性，氧化酶试验阴性者，用API20E生化鉴定试剂条或VITEK生化鉴定系统进行生化鉴定，或按表1进行生化试验。
试验项目
尿素酶
靛基质
西蒙氏枸檬酸盐
D-酒石酸盐
丙二酸盐
赖氨酸脱羧酶
分解葡萄糖产气
卫矛醇
肺炎克雷伯氏菌生化特性
肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种
肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种
SN/T 2206.3—2009
肺炎克雷伯氏菌鼻硬结亚种
注：“十”≥90%阳性，“十/-\75-88%阳性，d\为不定，\一/+”75-89%阴性，“-”≥90%阴性结果报告
根据生化鉴定结果报告样品中检出或未检出肺炎克雷伯氏菌。3www.bzxz.net
SN/T2206.3—2009
A.1SCDLP液体培养基
成分：酪蛋白陈
大豆蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钾
葡萄糖
卵磷脂
吐温-80
蒸馏水
1000mL
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
制法：将卵磷脂在400mL蒸馏水中加热至完全溶解，再将其他成分混合加人600mL蒸馏水中，加热完全溶解。将上述两种溶液混合后，充分搅拌均匀。调pH为7.2～7.3分装，121℃20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温-80充分混合，待冷却至25℃左右使用，A.2
胆硫乳琼脂(DHL)
成分：蛋白陈
牛肉膏
牛胆盐
硫代硫酸钠
柠檬酸钠
柠檬酸铁铵
中性红
蒸馏水
0.03g或5g/L水溶液6ml
18.0g~20.0g
1000mL
制法：除中性红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮泄至完全溶解，调pH为7.3土0.1，再将琼脂加人600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解。将两种溶液混合后，再加人5g/L中性红水溶液6mL.搅拌均勾.待冷却至50℃～55℃，倾注平血备用。
A.3营养琼脂斜面培养基
成分：蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
1000mL
制法：除琼脂外，将其余成分溶解于蒸馏水中·pH为7.27.4，加人琼脂，加热溶解，分装试管，4
121℃15min高压灭菌后，制成斜面备用。动力半固体琼脂
成分：胰蛋白陈
氯化钠
蒸馏水
1000ml
SN/T 2206.3—2009
制法：将各成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节pH至7.3士0.1，分装15mm×100mm试管，121℃高压灭菌15min，制成半固体高层。A.5
氧化酶试验试剂
成分：四甲基对苯二胺
蒸馏水
制法：将四甲基对苯二胺溶于蒸馏水即可，现用现配。若装入棕色瓶中，放置于2℃～8℃冰箱保存，可在配制后7d内使用。
SN/T 2206. 3-2009
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
化妆品微生物检验方法
第3部分：肺炎克雷伯氏菌
SN/T2206.3—2009
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
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电话：6852394668517548
中国标准出版社案皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16
2009年5月第一版
印张0.75字数9千字
2009年5月第一次印刷
印数1-2000
书号：155066·2-19648
定价16.00元
60090/
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