【国家标准(GB)】 饲料中马杜霉素铵的测定

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T 238732009
饲料中马杜霉素铵的测定
Delerrmination of maduramicin amnonium in feeds2009-05-26发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-10-01 实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标推出全厨饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（济南）。本标准主耍起草人：梁萌、汤文利、任爱丽、赵金毅、黄荣、李永山、刘学江。http：//foodmate.netGB/T23873—2009
1范圈
饲料中马杜霉素铵的测定
GB/T 23873--2009
本标雅规定了测定饲料中遇杜零素铵含量的高效液相色谱法（HPIC）和液相色谱-质谱法(L0-MS)
本标准适用于配合饲料，浓缩何料利添排剂预混合饲料。HPLC法为定量测定方法，定量限为1tmg/kg。LC-MS法为定性测定方法，最低检测含量为0.5mg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用随成为本标准的条款。凡是注日期的引用义件，其随后所有的修改单（不包括勘识的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法CB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3采样
3.1来样步骤：按GB/T14699.1的规定执行。3.2试样的制备：按G13/T20195的规定执行。4HPLC法
4.1原理
用乙提取饲料中的马杜霉素铵,蒸于提墩液用乙腈溶解，用对-一甲氮基苯甲醛溶液进行柱房衍生，HPLC测定。
4.2试刻和材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4. 2. 1 水,GB/T 6682,一级。
4.2.2甲醇:色谱纯。
4.2.3乙腈：色谱纯。
四氨呋喃：色谱纯。
4.2.5磷酸二氢钾：优级纯。
4.2.6磷酸：优级纯。
4.2.7对-二甲氨基苯甲醛:纯度99%4.2.8硫酸：优级纯。
4.2.9磷酸-磷酸.氢钾缓冲溶液（pHI3.0):准确称取2.04g磷酸二氢钾（4.2.5),加900mL水溶解，加磷酸(1. 2. 6)数滴调节 pH 牟 3,0,转移到1 000 mI,容量瓶中,用水定容、摇勾。4.2.10流动相：磷酸-磷酸二氧钾缓冲溶液(1.2.9)十四氢呋嘴（4.2.1)十甲醇(4.2.2)-=100！40660。4.2.11对-.甲氨基苯甲醛衔生化溶液：准确称取16g对-二甲氨基苯甲酵（4.2.7)于1000mL棕色试剂瓶巾，加入100ml甲醇（4.2.2），在磁力搅拌器上搅拌至完全溶解后，逐滴加入8tml.硫酸(4.2. 8),继续搅拌至溶液均勾,冷却至室温,21 h 内使用。ht
GB/T 23873—2009
4.2.12马杜霉素铵贮：备溶液（1000\g/mL）：准确称取107.0mg（精确到0.1mg）马杜霉素铵化学对照品（纯度93.7%）于100ml.容量瓶中，用艺腈（4.2.3）溶解、定容，配制成浓度为1000g/mL的备溶液。置于4℃～8℃冰箱中，有效期为1个月。4.2.13马杜素铵中i溶液I（100严g/ml）：准确移取马性霉素铵贮备溶液（4.2.12)5.00ml.于50ml容量瓶中，用乙腈定容。置于4℃~8℃冰箱中，有效期为1周，4.2.14马杜等素铵中闻间溶液Ⅱ（10.(μg/rmI.)：准确移取马杜筹素铵中间溶液I（1.2.13)5.00mL于50mL容量瓶中，用Z定容。置于4℃~8℃冰箱中，有效期为1周。4.2.15马杜素铵工作溶液：准确移取马杜素铵中间溶液耳（4.2.14)1.00mL、5.00mL于10mL容量瓶中，马杜籍素铵中间溶液I1.0UmI,5.00mL于10mL容量瓶中，马杜穿素铵贮备浴液1.00mL、2.00mL、3.00ml.于10rul.容量瓶中，用乙腈稀释、定容，配制成浓度分别为1.00μg/mL、5.00g/ml、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/ml、300μg/ml.的工作溶液。现用现配。4.3仪器
4.3.1实验室用样品粉碎机。
4.3.2分析天平：感量0.1mg。
碘量瓶：150mL。
4.3.4超卢波清洗器：
往复式振荡器。
带盖塑料离心管：100 mL。
离心机，
炭转蒸发仪：配置150mL鸡心瓶。4.3.9旋涡混合器。
4.3.10高效液相色谱仪：具紫外检测器或二极管降列检测器：4.3.11柱后衔生系统。
4.4分析步骤
4.4.1提取
称取约5g试样（精确到0.1mg）子碘量瓶（4.3.3）中，加人乙睛50ml.,置于超声波清洗器（4.3.4）中超也15min，然后置于往复式振荡器（1.3.5)中快速振荡提取20min。转移到离心借（4.3.6）中，用适量乙腈清洗碘量瓶三次，清洗液合并到离心管中。置离心机(1.3.7)4360g离心31mnin；上清液转移到鸡心瓶(4.3.8)中,在旋转蒸发仪上 60℃浓缩定容至5.00mL,旋满(4.3.9)混勾，分取适量提取液过有机滤膜上机测定。根据试料落液中马杜霉素铵的浓设用乙睛进衍稀释，使其F:机浓度不高子300 μg/ml..
4.4.2测定
4.4.2.1液相色谱测定参数的设定色谱柱：Cis柱，柱长150mm，内径2.1mm，粒斑5m或类似的分析柱。柱温：25℃。
检测波长:585 nm。
进样量:25 μl.。
溉动相：磷酸-磷酸二氢钾缓冲液（pH3.0)十四氢喃十中醇二100十10860(4.2.10)。流速:0, 4 mL/min。
4.4.2.2柱后衍生系统测定参数的设定衍牛化溶液：对二甲氨基苯甲醛衍生化漆液（4.2.11)。衍生化溶液流速：0.5mL/min。
反应器容积:1.00 L.
反应器温度: ℃。
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4. 4. 2. 3定量测定
在上述仪器条件下，分别注入马杜每素铵工作溶液（4.2.15)和试料溶液（4.4.1)进行测定。用工作溶液单点校准或多点校准，以色谱峰的峰面积逃行定量计算。4. 5结果计算
饲料中马杜霉素铵的含量X以质量分数表示，单位为毫克每T克（mg/kg），按式(1)计算：X=AxV
式中：bzxz.net
A—试料溶液中马杜霉素铵峰面积的响应值对应的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL.)；V
试料溶液的体积，单位为毫升（mI）；(1)
试料的质量，单位为克（g）。
每个试样取两份试料逃行平行测定，以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，保留三位有效数疗。
4.6重复性
在重复性条件下完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于10%，5 LC-MS 法
5.1原理
·用乙睛提取饲料中的马杜霖素铵，提取液蒸丁后用乙腈溶解，用1.C-MS测定，5.2试剂和材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.2.1 水,GB/T 6682,一级.
5.2.2乙：色谱纯。
5.2.3流动相：乙睛5.2.2)+水(5.2.1)=90+10。超声脱气5min5.2.4其他同4.2.12~4.2.15，
5.3攸器
5.3.1渡相色谱-质谱仪。
5. 3.2 其他间 4. 3. 1~~4. 3. 9。5.4分析步骤
5.4.1提取
同4.4.1，但需要根据试料溶液中马杜霉素铵的含量用乙腊进行稀释，使上桃溶液浓度不高卡50 μg/mL.
5.4.2测定
5.4.2.1液相色谱测定参数的设定色谱柱：C柱，柱长150mm，内径2.1mm,粒度5μm或类似的分析柱。进样量;5 μ.
流速:0. 2 l./ min。
柱温：30℃。
流动相:乙瞻+水-=50+10(5.2.3)。5.4.2.2质谱测定参数的设定
离子化模式：电喷雾离子源，负高了模式（ESI-）。雾化气压力：2.76×105Pa(40.0psi）。十燥气流速：9.01./min。干燥气温度：350℃。毛细管出口电压：一3500V。碰撞气：氨气，离子电荷控制3
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(ICC)0n。扫撒范围：100m/z~1200m/%。化合物稳定性：30%。质谱振幅：1.00V。开始振幅：30%。结束振幅：100%。定性离子：母离子（m/）：915，子离了（m/）613，871。5. 4.2.3定性测定
在相同试验条件下，利用质谱定性离子定性。样品与标准溶液中马杜霉素铵的保留时间偏差应在土2.5%之内；样品与浓度相近的标准落液中码杆霉素铵的质谱定性离子进行比较，子离了匹配度在700~1000之间或者了离子相对卡度的偏差在表！规定的范围内）则判定样品中存在马杜霉素铵。表1定性确证时子离子相对丰度的允许偏差子离子机对丰度/%
偏蒸/%
>20~5℃
附录A
（资料性附录）
马杜霉素铵谱图
A.1马杜霉素铵色谱图(HPLC法)见图 A. 1mAU
图 A.1马杜霉素铵色谱图(1.00 μg/mL,HPLC法）马杜霉素铵质谱图见图人.2
Intuns,1
分子量1 934. 17
. 5n -
结构式
619.0652.9
653.3711.3
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图 A. 2”马杜霉素铵(Maduramicin Amumonium)质谱图5
金日伴网
http://foc
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打印F期：2009年10月14
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饲科中马杜霉素铵的测定
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