【商检行业标准(SN)】 进出口医用手套中胶乳蛋白质的测定 改进的Lowry法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T18192006
进出口医用手套中胶乳蛋白质的测定改进的Lowry法
Determination of latex protein in medical gloves for import and export-ModifiedLowrymethod
2006-08-28发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2007-03-01实施
SN/T1819—2006
本标准参照ASTMD5712—1999《天然橡胶及其产品中水溶性蛋白质的测定—改进的LoWry法制定。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局。本标准主要起草人：童鲁波、葛宣宁。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
进出口医用手套中胶乳蛋白质的测定改进的Lowry法
本标准规定了医用手套中胶乳蛋白质含量的测定方法。本标准适用于医用手餐中胶孔蛋白质含量的测定本标准胶乳蛋白质含量的测定范围：7μg/dm~200μg/dm。2规范性引用文件
SN/T1819—2006
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
医用手套及天然橡胶制品中胶乳蛋白质可从缓冲溶液中抽提出来，并经沉淀除去可溶性干扰物，用Lowry方法，于分光光度计750nm波长处测量吸光度。4术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。4.1
稀释率Fdilutionfactor
用于溶解样品萃取沉淀物的氢氧化钠容量（mL）与用以分解标准卵白蛋白萃取沉淀物的氢氧化钠容量（ml）之比率。
注：例如，5ml.测试抽取液，沉淀后用1.25ml氧氧化钠溶解，标准卵蛋白质用氢氧化钠溶解，其溶解体积也为1.25mL..则测试萃取物的稀释率与标准曲毁希释率相同4.2
latexprotein
胶乳蛋白质bzxz.net
来自天然橡胶及其制品中的胶乳蛋白质和多腻。4.3
定量检出限
可定量测量并产生准确结果的最低蛋白质含量。LOQ定为10倍的标准偏差5仪器设备
5.1离心机。
5.2分光光度计
5.3旋涡混合器
5.4微量可调移液器（0.2mL~5.0mL），容量瓶（50mL，100mL）。5.5聚丙烯试管：容量为50mL和10mL1
SN/T1819—2006
6试剂与材料
6.1所用试验用水应符合GB/T6682三级水要求，所用试剂均为分析纯或相当纯度的试剂。6.2磷酸（o-1.68g/mL）
6.3盐酸（p=1.19g/mlL)
6.4硫酸（o1.84g/ml）.
6.5抽提溶液（0.025mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH=7.4士0.2）：称取磷酸二氢钾（KH,PO.>0.816g磷酸氢二钠（NaHPO,12H，O)6.802g.加水溶解并定容至1000mL。6.6氢氧化钠溶液（0.2mol/L)：取饱和氢氧化钠溶液10,8mL，加水至1000ml后用盐酸标准溶液标定，
6.7脱氧胆酸钠（DOC)溶液（1.5g/L)：称取0.15g脱氧胆酸钠溶于水并定睿至100ml6.8三氧乙酸（TCA）溶液（720/I）：称取72g三氧乙酸溶解水中并定容于100mL6.9磷钙酸（PTA）溶液（720g/L)：称取72g磷钨酸溶解水中并定容于100mL6.10碱性酒石酸钠溶液：称取2.22g碳酸钠（NagCO,）、0.44g氢氧化钠（NaOH)0.18g酒石酸（CH.O.）溶于水并定容至100mLg6.11硫酸铜溶液：称取7.0名硫酸铜（CugSO,·5H.O)溶于水并定容至100mL.6.12福林（Folin）试剂：称取100g钨酸钠NaWO,2HO).25g钼酸钠(VaMoO2H,O)加人蒸馏水700mL、磷酸50mL、盐酸100mL，溶解后放人2L回流装置中，以小火回流10h，再加入150g硫酸锂（Li,SO），蒸罐水100ml.及数滴漠水，然后开口继续煮沸15min，以除去过量的.冷却后定容至1000ml。过滤，于棕色瓶中
6.13蛋白质标准液：蛋白质标准储备液1.00mg/ml.冷藏条件下溶液能贴存48h：温度为一18℃时，可贮存2个月，融化时，要求用水浴加热到45C并保温15min注：量白质标准液可从临床检验质控中心获得，冷藏时间为累计时间，为进一步避免反复的冷冻和髓随化，建议将蛋白质母液分几份贮存，每份足够制备一条标准曲线，或在试验步骤中足够使用。6.14蛋白质试验试剂：
试剂A：脱氧胆酸钠液(DOC)
试剂B：三氯氟乙酸溶液（TCA)-磷钨酸溶液（PTA)(1十I)混合。试剂C：1mL硫酸铜溶液和150mL碱性酒石酸钠溶液混合，用时配制。试剂D：1份福林（Folin)试剂与1份水混合，用时配制。7测定步骤
7.1蛋白质的抽提
取医用手套手掌内，外侧约4dm［手套测试的样品面积=长（mm）×宽（mm）×2+10000］，剪成1cm×2cm大小的片状试样并称取质量（精确到0.0001g），置于50mL聚内烯试管（5.5）中，抽提溶被体积与试样量（质量比）按：0移取抽提落液于装有试片的聚内给管中，便皱测试详全部均勺地支泡在抽提溶液中，在整个抽提过程中保持在25℃士5℃，抽提2h，每间隔30min搅动试样一次。将抽提液倒人50mL离心管中，离心力为500×条件下商心15min，小心吸出上层清液，必要时通过0.45um孔径滤膜过滤，立即进人下步操作。否则应将上层清液在2℃～8℃贮存，贮存时间不超过24ha
注：离心机的相对离心力（RCF）与离心机转速（t/min）的换算见式（1)：RCF=wr/g-(2n/603r/950-1.118×10-nm式中：
RCF相对离心力.单位为克(R)
n转速，单位为转每分（r/min）；产离心机的施转半径，单位为厘米em）7.2蛋白质沉淀
7.2.1随同试样做空自试验。
SN/T1819—2006
7.2.2吸取样品抽提溶液（7.1）各5.0mL.置于10mL聚丙烯离心管中，各加人0.5mL试剂A(6.14）.用旋涡混合器混匀，室温条件下静置10min：然后各加人1.0mL试剂B(6.14），用旋涡混合器混勾·在室温条件下静置30min。在25℃士5℃，用三份平行样完成试验。7.2.3将离心管在6000×g条件下离心15min倾去上清液·把离心管倒置在滤纸上，让水流干7.3比色
7.3.1加人氧氧化钠溶液（6.6）1.25mL到各离心管中，用旋涡混合器混匀，使沉淀蛋白质全部溶解。者吸光度超出工作曲线的线生范围，可加人氢氧化销溶液（6.6）称释，以便其吸光度的测量值在工作曲线范围内。
注：若在3℃士1℃条件下，经氢氧化钠落液再落解的蛋白质溶液可贮存24h，7.3.2加人2.5mL试剂C(6.14）.混勾：放置15min加人0.25mL试剂Dc6.14.立即用旋涡混合器混匀，室温下放置30min，以水为参比于750nm波长处，用1cm比色Ⅲ测定其吸光度（比色要在30min内完成）。取三份试样溶液中吸光度的平均值和空白溶液吸光度的平均值，从校准曲线上计算出胶乳蛋白质的含量，
7.3.3校准曲线的绘制：用水稀释蛋白质储备液（6.13）.制备如下系列的蛋白质标准溶液：1.0g/mL2.0pg/mL.5.0μg/mL,10.0μg/mL，15.0pg/mL.20.0g/mL，25.0μg/mL.各吸取5.0mL，按实验步骤7.3.1.7.3.2测量吸光度绘制校准曲级，8结果计算
样品中胶乳蛋白质的含量以质量分数W计.数值以微克每平方分米（g/dm）表示，按式（2）计算：W=FxVXm-mo/SxV
式中：
V分取抽提溶液的体积，单位为毫升（mL）：V抽提落液的总体积，单位为亲升（mL）从校准曲线上查得试样溶液中的蛋白质的质量，单位为微克（rg）；m从校准曲线上查得空白溶液中的蛋白质的质量，单位为微克（rg）：S试样的表面积，单位为平方分米（dm）；F稀释率。
计算结果表示到小数点后一位。9精密度
精密度数据是由7个实验室对样品中胶乳蛋白质测定得到的，平均含量为16.3/dm，方法的重复性r=0.107.再现性R=0.235。
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