【农业行业标准(NY)】 动物性食品中阿莫西林残留检测方法——HPLC

ICS67.050
中华人民共和国农业行业标准
NY/T830-2004
动物性食品中阿莫西林残留检测方法-HPLC
The determination of amoxicillin in edible animal tissues-HPLCmethod
2004-08-25发布
2004-09-01实施
中华人民共和国农业部
本标准的附录入为资料性附录
NYT830—2004
本标准由中华人民共和国农业部提出片本标准起章单位：农业部器禽产品质量监格检验测试中心，北京帅范大学分析测试中心本标准主要起草人：单吉浩、谢孟峡、刘素英、杨清峰、降毅、欠银良、上海1范围
动物性食品中阿莫西林残留检测方法一高效液相色谱法（HPLC）
NY/T830—2004
本标准规定「动物性食品中阿莫西林残留量检测的制样和高效液相色谱的测定方法本标准适用于猪肌肉、猪皮、猪皮下脂肪和鸡肌肉中阿莫西林的残留量检测2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新文本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规则和实验方法3制样
3.1样品的制备
取适量新鲜或冷冻的空自或供试组织，绞碎并使之均勾。3.2样品的保存
20℃以下冰箱中存备用
4测定方法
4.1方法提要或原理
匀浆后的试样经过磷酸提取液提取和氯乙酸沉淀蛋白，过C固相萃取柱净化，用合适的溶剂选择洗脱，经过衍生化，供高效液相色谱定量（紫外检测器）测定。外标法定量4.2试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的二级水4.2.1阿莫西林
含阿莫西林（C16HVOS）不得少于98.9%4.2.2三氯乙酸
4.2.31,2，4-三唑
4.2.4氯化汞
4.2.5乙腈：色谱纯
4.2.6甲醇：色谱纯
4.2.7磷酸二氢钠
4.2.8磷酸氢二钠
4.2.9硫代硫酸钠
4.2.10氢氧化钠
4.2.11乙酸酐
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2氢氧化钠溶液5.0mol/l
取氧微化钠饱液1+.加水稀释分0m4.2.13磷酸缓冲液0.05mol/l
取磷暖热、钠6.28g，磷酸微钠5.11g.硫代硫酸钠3.11g.加水便溶解.并稀释至1000ml使用前过0+5m滤膜
4.2.14氯化汞溶液0.026mol/l
取氮化水0.072g.加水使溶解、并稀释至10ml4.2.15乙酸酐溶液0.20mol/l
取乙俊0.1ml.加乙晴稀释至5ml
4.2.16衍生化试剂
取1.2.4=唑1.37g加6mL水使溶解，加1ml.0.026ml/氯化水溶液，用5.0mol/L氢氙化钠溶液调pH至9.0加水稀释至1ml：随配随用4217磷酸氢二钠溶液0.025m0/
取磷酸氧钠0.22g，川水使溶解.川5.0mol八氧线化钠溶液调pH至9.0.川水稀释至50ml4.2.18提取液
取磷酸一钠1.68g，加水使溶解，月磷酸调pH至4.5.加水稀释至500ml9三氯乙酸溶液75%（w/v）
取氯乙酸7.5g，加水使溶解升稀释至10mL4.2.20三氯乙酸溶液2%（W/）
取瓶乙酸2.0g，加水使溶解并稀释至100ml4.2.21阿奠西林标准储备液
准确称取阿莫西林对照品25ng，加水使溶解片稀释至浓度约为1.0mg/mL的储备液，置」2%80冰箱中保存有效期个月
4.2.22阿莫西林标准工作液
准确量取适量阿英西林标准储备液，用水稀释成适宜浓度的阿莫西林标准工作液4.3仪器和设备bZxz.net
4.3.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）4.3.2分析天平
感量0.0001g
4.3.3天平
感量0.01g
4.3.4涡旋震荡混合器
4.3.5组织匀浆机
4.3.650ml离心管
4.3.7固相萃取装置
4.3.8离心机
4.3.9固相萃取柱（C13
100g/ml，含碳量16%
氮气吹干装置
恒温水浴锅
2滤膜
0.45m.水相
4.4测定步骤
4.4.1试料的制备
试料的制备包括：
取绞饰作的供试样品，作为供试材料二取绞碎后的空自样品.作为空自材料一取绞碎盾的空样品，添加适宜浓度的标准落液作为究门添加试料4.4.2提取
NY/T8302004
称取（5=0.05）g试料置于30ml.匀浆杯中加10ml.提取液，10000r/min匀浆1min.匀浆液转人50ml离心管中，振荡混合5min4000r/mim离心10min.1清液转人-25ml.离心管中用提取液5ml洗刀头及匀浆杯，转人50ml离心洗残渣.搅匀振荡，离心：合开清液于25mL离心管中，加人0.5ml.75%（zc/u）氯乙酸液，涡旋震荡205.4000r/min离心10min，上清液做备用液4.4.3净化
（固相取排依次用5mL单醇，2ml水利2ml.2%（效/）氯乙酸溶液润洗：将备用液过C柱，依次用2ml.2%（＆/）氛乙酸溶液和2ml.水洗.真空插1用3ml.乙睛洗脱，真空抽干，收集洗脱液，在样液过柱和洗脱过程中流速控制在1nlmm在右4.4.4衍生化反应
洗脱液在40%下氮（吹下.加0.2ml.水和0.2ml.0.025mol/LpH为9.0的磷酸氰二钠缓冲溶液，涡旋振汤使儿潜解，加0.05ml.0.2mol/.的乙液酐乙情溶液.室温下反应10min后，加0.55ml衍生化试剂，密封，涡旋混勾，于60恒温水浴中衍生反应1h、衍生结束后冷却至牵温，溶液用滤膜过滤，作为试样溶液，供高效液相色谱分析4.4.5标准曲线的制备
准确量取适量阿莫西林标准1.作液.用水稀释成浓度分别为0.05g/mL，0.10g/ml..0.25gml.0.50g/ml.1.00g/mL的阿类西林标准溶液各准确量取0.20ml.，按衍生化反应步骤衍生，得到系列浓度的阿英西林衍生化产物，将溶液滤膜过滤，供高效液相色谱分析4.4.6测定
4.4.6.1色谱条件
色谱柱：（250mmx4.6mm（i.d.），粒径5m，或相者流动相：0.05ml/.磷酸盐缓冲液一乙晴（84+16），用前过滤膜流速：1.0ml./mm
检测波长：323mm
进样量：20
4.4.6.2测定法
取适量试样溶液和相应的标准工作溶液，做单点或多点校准，以色谱峰自积积分值定量标准工作液及试样液中的阿西林衔生物响应值均应在仪器检测的线性范围之内在述色谱条件下，阿莫西林得生产物的保留时间在7.20mm左有，标准溶液和试样溶液衍生化产物的液相色谱图见附录A4.4.7空白实验
除不加试料外。采用究全相同的测定步骤进行平行操作4.5结果计算和表述
试料中阿莫西林的残留量（/kg）：按式(1)计NaCap
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武中：
工一一试料中阿英西林的残留最。单位为纳克每克（g)：1一一试样溶液中阿莫西林街生物的峰面积：A·“标准工作液中阿英西林衍生物的峰而积：（、一标准1.作液中阿莫西林的浓度，单位为纳克每笔升（ng/ml)；V一试样溶液体积体积，单位为毫升（ml.）；M组织样品的质量，单位为克（g）注：计算结果扫除空门试料值.测定结果用平行测定的算术平均值表示.保留至小数点后2位检测方法灵敏度、准确度、精密度5
5.1灵敏度
本方法在猪肌肉、猪皮、猪皮下脂肪和鸡肌肉中的检测限为101g/kg5.2准确度
本方法在10/kg~200g/kg添加浓度的叫收率为70%~110%5.3精密度
本方法的批内变异系数（V≤10%，批间变异系数（V≤15%+
元0.0002
-0.000.05
附录A
（资料性附录）
高效液相色谱图
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阿莫西林标准溶液衍生化物的液相色谱图NY/T830—2004
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猪肌肉组织中阿莫西林衍生化产物液相色谱图3.00
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鸡肌肉组织中阿莫西林衍生化产物液相色谱图11.0012.00
11.0012.00
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-0.00010-
10.0011.0012.00
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猪皮组织中阿莫西林衍生化产物液相色谱图3.00
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猪皮下脂肪组织中阿莫西林衍生化产物液相色谱图11.00
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