【商检行业标准(SN)】 鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1468—2004
鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验操作规程Protocol of haemagglutination-inhibition testfor cgg drop syndromc
2004-11-17发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检装总局
2005-04-01实施
中些人云共划国山人境检验检疫行业标准
鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验操作规程SN/T -268
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2005年2月第版
2005年2月第
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本标准的附录 A为规范性附录。前言
本标准出国家认证认可监督管理委员会提出并H口。本标准起草单位：中华人民其和国江乐出入境检验检疫局。本标准十要起草人：邓娟仙、柯家法、张敬友、张常印、张场。本标准系百次发布的出人境检验检疫行业标准SN/T1468—2004
1范围
鸡产蛋下降综合征而凝抑制试验操作规程本标准舰定了产蛋下降综合征血邀抑制试验方法SN/T 1468—2004
本标雅适用二鸡感染产蛋降综合征病毒或注射疫苗所的血清抗体检其他离类检疫小叫参照。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为夺标准的条款。凡注日期的引用文件，其随后所有的修改单（个包括勘误的内容)或修订版均不适用丁本标雅，然而敲助根据本标雅达成协议的各方研究是否可使用这些文的最新版本。是不注口期的引用文件，其最新坂本适用于本标准(G13/T6082分析实验案用水规格和试验方法3材料和试剂
3.1器材
3. 1.1号反应板:96孔，V形底,底育为9℃°。3.1.2塑料采血管：内径2I.长1ccm3. 1. 3注射器 2 ml.。
3.1.4平血：直径为90mm。
3.2试剂
3.2.1试剂配用水需符食（GB/T6682的要求。3.2.2抗原：户指定单位供应。
3.2.3标准3性血清：山指定单位供应：3.2.4磷酸盐缓冲应理盐水(PES)：pH7.20.011o1/L.配制方法见附录A3.2.5Alsever 液：剃方法见附录A。3.2.61%鸡红细胞跑恩液：采健康成年鸡血液，以1：2的比例与A.scVr氏液混勾，而2C倍量生理盐水洗涤3次～4次,每次以2oc r/in离心5 min,最后-次0 mir,用生盐水配成「%悬液。4℃保存悬液在72 h 内使用完
3.3被检血清
刘破鸡冀下静脉,月塑料采血管引进血流E cr~8 cm 长,烧融一端,锻夹封口。血清凝固析山血清后以2000r/rnin离心5i=，剪取心消段，封口备用。维鸡压注兼器进行心脏采血4血凝抑制试验
4.1抗原凝集效价测定
4.1.1抗原避集效价的测定方法见表：.SN/T 1468—2034
抗原释释度
-吴鸡纠细脑
表1抗原凝集效价测定试验操作术式1
4.1.2微量反成板的每孔加PBS50叫去两排32
兰位为微升
1024.2048
4.1.3吸取抗踪加人第一列孔，每孔50uL，混孕后依次倍比烯释至第11列孔，弃云5C uL：第_2列孔为红细施对。
4.1.4每孔川1/红细胞悬液50μL.。4. 1,5置微量摄派荡器振荡1 Inr.4.1.6置室温30 rin后,将微量反应板作45竖立,符第12列孔内红细跑流成塔状射即判定结果。以凝集IC0以红细胞的抗原最高稀释变为该抗漂的避集效价，亦即1个红组胞凝集单位。若两排结果不一,取H均值：
4.1.7配制抗原工作液
按武（）、式(2)进行计算并用生埋盐水配制：8个红纽炮凝集单位抗原蒂壹（811AV)=抗原效价8（1）4个红纽鸦凝集单位抗原稀释度（HAV）一抗原效价：….（2)4.2红细胞凝集抑制试验的操作方法4.2.1红纸胞凝集抑制试验的操作方法见表2。表2红细胞凝集抑制试验操作术式孔
血清释释度
4HAV抗原
8HAV抗原
被检止清
1鸿红红胞
:0242048
美位为微升
50弄50
505005155550500
4.2.2微量反成板的排测份而清样品。第孔加被检血清和PBS各50T,第二孔如8个红细胞凝集单位抗原C，第三孔牟第12引各加人1个红细胞凝集单位抗原50μL，将第一孔中液体混匀斤吸出591.加人第二孔,如此依次倍比稀释至第12们，弃去50uI.。4.2.3性血清对照：设置方法同4.2. 1.4. 2.4抗原刘照;在微量反应板的第八排篇一至第六孔,每孔加人50 μl 。第一孔和第一孔各加2个红纽跑凝集单位抗原50μI.从菀二孔起依欣作倍比稀释至第六孔，弃去0丸I.。这样,抗源对照孔的抗原含量依欲为4,、1、
红细胞凝集单莅，
4.2.5红纸胞对照:在微量反应极的第八排第七牟第 12孔,衔孔加人PBS条50 μL，4.2.6被检血清对照;血清样品每排第一孔为被检止清对照，4.2. 7 37,感作 10 rmin.
4.2.8在微量反应欲的每孔各加1%红细胞悬被50 l,振荡=min,室温下静置 30 min后，判定结果。2
4.3结果判定
SN/T1468—2004
4.3.1当对照出现下列结果时，以完全制红细胞凝集的最人稀释度为被检血清的红细胞凝集抑制流怀滴度：
8）阳性血清滴度与已知滴度相符,若有差异,不应超过「个滴浸；拆原对照，第、二孔红细胞完全集，第三孔完个凝集或75%凝集,第四、五、六孔不完个凝h）
集或淘个不凝集；
红细跑对照·完全不凝集，
被检血清对照，究全不凝集
4.3.2判定时将微量反成板作45°竖立，当红细胞对照行和被检血清对照孔户红细胞流成落形时立即判定被检血清滤度。
4. 3. 3 被检血清滴度人于等于 1 :15 为阳唑;被检血清滴度等于 1 :8 为可疑,一周后壹复采血检测;人丁等丁1：8判定阳性;被检血清滴度小丁等丁1：4为阴性。SN/T 1468—2004
附录A
（规范性附录）
磷酸盐缓冲生理盐水及Alsever氏液的配制A.1pH7.20.01 mol/l.磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)的配制磷羧氢一钠
磷骏一氢钾
氯化钠
将「述试剂逐-灿人少量蒸馏水中充分溶解后，蒸馏水至」 ml.分装，I12 kP高压灭萄20min,4保存备用。
2Alsever氏液的配制
葡薇糖
籽檬酸三钠
柠檬酸
氯化锅
将上述试剂逐一加入少量蒸馏水中充分溶解后，加蒸水至100 n.1分装，106.14kPa高压火菊23 min,4℃保存备用。
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书号：155966·215067
SN/T 1468-2004
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