【商检行业标准(SN)】 牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1164.32006
牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程
Protocol of EL.lSA for infectious bovine rhinotracheitis2006-01-26发布
华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2006-08-16实施
中华人民共和压出人境检验检接行业标滩
牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程
SV/T1181.3—2006
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街18号
邮政编码：1C0015
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电话：6852394669317518
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元本880%12301/13免费标准bzxz.net
2006年1月第一版
印张0.5
字数于字
2心6作月第一欧印刷
印数1 (00
书号：1550662 16741
定价 6.00元
SN/T1164分为四部分：
牛传染性鼻气管炎病毒分离操作规程；牛传染异气管炎微量血清中和试验操作规程：牛传染性气管炎海联免疫吸附试验操作规；牛传染性旁气管炎病毒检测鉴定方法PCR法。本部分为SN/T1164的第3部分
本部分的阴录A为规范性录。
本部分山匡家认证认可监督管理委员会提山并归口。本部分起草单位：中华人民共和国云南山入境检验检疫局。本部分十要起草人：肖荣海、周晓黎、徐维近、杨雁雄、应雪松。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准SN/T 1164.3—2006
1范围
牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验操作规程
SN/1°1161的本部分规定了个传染生典气管炎孵联免疫吸附试验方法。本部分适压一牛传染惟鼻气脊炎抗体的检测，2规范性引用文件
SN/T 1164.3—2006
下列文件中的条款通过SN/T1164的本部分的引而\成为本部分条款。凡是注期的引而文件,其随后所有的修政单(不色括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成设的各研究是否可使用这些支的最新版本。凡是不迁H期的用文件，其最新版本括用十本部分。
GB/T6E82分析实验室用水规格利试验方3缩略语
下列缩略语适用于SN/T1164的本部分，3.1
牛传染性鼻气管炎
infectious hovine rhinotrachcitis3.2
酶联免疫吸附试验
t enzyme-linked immunosurhent assay4试剂和材料
4.1色被抗原：由指定单位提供。4.2血清：标谁强阳性,阴性血清，出指定单位提供被检血清：牛血清56℃-~57℃灭活30mir,羊血清58℃~59℃灭活30 min4.3
4.4嗨标记抗抗体：山指定单位提供。4.5溶液：抗原包被缓冲液、讨闭液、洗涤液、底物溶液和终止液，死附录A。4.6水：符合GB/T6682分析实验室二级水规格。5器械和设备
5.1酶殊仪，
5.2聚苯乙烯微量反应板（9孔酶标板）5.3
单孔道、多剂道可调微量移液器（150、100㎡、1009）.薇量滴头，5.4啵管(5 ml.,10 m1)
5.5刻度量筒(109 mL,1 000 mL)。5.6试剂瓶(59 ml.,100 ml.,509 ml.),5.7洗涤瓶（52℃1.）
SN/T 1164.3—2006
5.837°慎温箱。
6操作步骤
6.1包被酶标板：按照提供的包被抗原所附说明书要求，用包被液释释就原.包被96孔酶标极，每孔100，置℃冰箱运夜。
6.2洗涤：收出嗨标板，甩掉孔内的包被缓冲液，注满洗涤液，1min-~2min后再甩1。如此重复五次。洗涤液需在扎内满留定时间,以防本试验的非特另性反应，也而用洗板机洗板。6.3封闭：每孔注满封闭液，置37封闭90ni，按6.2洗涤1次-~2欲：置4冰箱备压，30d内均可使而。
6.4加样：每步加样完毕，均用振荡器充分振荡混勾：6.4.1标雄阴性血清、阳性血清和被检血清均用辫凌作100倍稀释，6.4.2每份被检而清两孔，再在100T。6.4.3有板均设标准阴、阳性而清及稀释液对照各两孔，有孔100L：加详完毕后放37℃流箱作用1 h.6.2洗涤，
6.5加酶标记抗范体，每孔加人用稀释液稀释至工作浓度的梅标记范抗体100L，置37℃溢度作用1h，按6.2洗涤！
6.6每孔加底物溶液100L，置空温避光反应约20min6.7终止反应：衔乳加终土液50aL、在3℃2min内测定（D值。7结果判定
判定标准:用酶标仪在波长45Cmm下测定(1)值，按式(1)计算S/N值：S/N一被检血清乎均）值/标准阴性血清平均C—S/N1.50判为荫性，
1.5cS/N2.0为可疑：
S/N2.0判为阳性，
7.2凡可疑被检血清均成复检,仍为可时,则判为阳性，2
附录Ａ
（规范性附录）
溶液配制
包被液:0.05mol/L,pH值9. 6碳酸盐缓冲液A.1
碳酸氢钠（NaIICO）
碳酸钢(Na(o)
溶解后置于1℃冰箱：一周内侵用。-.26 g
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0.97g(或NaCO,·10H.01.2g)
50c -mL
A. 2洗涤液:0. 01 mol/L pH 值 7. 4 PBS 0. 05%Tween-23氯化钠（NaC）
磷酸二氢钾(KII,PO1）
磷酸氧二钠(NazHP()12H,0)
氯化钼(KC)
Tween 2C
溶解后置于 4℃冰箱备用,
A.3稀释液：
洗涤液
脱脂奶粉
溶解后置于1℃冰箱备用
A.4封闭液：
三羟丰甚氨苯丰烷(Tris)
氯化(NaCI)
Z二胺四Z龄二钠(EITA)
健康乃血清
加龙离子水至
100 ml
[ coo ml.
用「tnal/.盐酸话 pH值至7. 2,临用前期人心温-20(Tweet-20),使终浓度达0.「%。A.5底物液：
A.5.1乙酸柠檬酸缓冲液（2H值5.0）Z酸钠（A鼓）：
乙酸钠
溶解后置于4℃冰箱备用，
檬酸（B液）：
柠檬酸
200 mL
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溶解后置于 4冰箱各用,
配制:取 B液(约 2 rmL)调 A液 pl1 值≤ 6. 0.置于 4℃冰箱备用。A.5.2TMB济液：
加湿溶解后于盒中存室：
A.5.3底物浚；陪而前配制
pII6.0乙酸-柠檬酸缓冲液(37\C)TM13游液
双氧水(Hz02)
终止液：2mol/1.硫酸
浓硫酸
SN/T 1164. 3-2006
177. 8 ml.
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书号：155066·21674
定班：
90020'0911 /
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