【农业行业标准(NY)】 苹果及山楂制品中展青霉素的测定 高效液相色谱法

ICS 67.080.10
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1650—2008
苹果及山楂制品中展青霉素的测定高效液相色谱法
Determination of patulin in apple and hawthorn products-High performance liquid chromatography2008-07-14发布
2008-08-10实施
中华人民共和国农业部
本标准中附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部农垦局提出并归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（上海）。本标准主要起草人：孟瑾、黄菲菲、韩奕奕、韩惠雯、吴榕、何亚斌。NY/T1650--2008
1范围
苹果及山楂制品中展青霉素的测定高效液相色谱法
本标准规定了苹果及山楂制品中展青霉素的高效液相色谱测定方法。本标准适用于苹果及山楂制品中展青霉素的测定。本标准中液体样品检出限为8μg/L、固液体及固体样品检出限为12μg/kg。2规范性引用文件
NY/T16502008
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中的展青霉素经乙腈提取，提取液经净化柱净化后，用高效液相色谱柱分离，以紫外检测器于276nm处检测，外标法定量，
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水。4.1乙睛(CH;CN)，色谱纯。
4.2果胶酶（pectinase，EC232-885-6)，活性不低于1500IU/g，贮存于2℃～8℃的冰箱中。4.3四氢呋喃溶液：Lp(CH.O)=0.8%），吸取8mL四氢呋喃（C,HgO)稀释至1000mL水中，充分摇匀。
4.4展青霉素标准液：100mg/L，0℃～4℃条件下贮存。4.5展青霉素标准贮备液：准确移取1.00mL展青霉素标准溶液（4.4）于10mL容量瓶中，用乙腈（4.1)稀释定容，充分混匀。该溶液每毫升含展青霉素标准物质10.0ug，有效期6个月。4.6羟甲基糠醛标准物质：质量分数≥99.0%。4.7羟甲基糠醛标准贮备液：准确称取0.02g羟甲基糠醛标准物质（4.6)于50mL烧杯中，用甲醇(CHOH)溶解并定容至100mL，混匀。该溶液每毫升含羟甲基糠醛标准物质0.2mg。置于0℃～4℃冰箱中保存，有效期6个月。
4.8羟甲基糠醛标准工作液：准确吸取1.0mL羟甲基糠醛标准贮备液（4.7），用甲醇稀释定容至10mL，混匀。该溶液每毫升含羟甲基糠醛标准物质20.0μg。置于0℃～4℃冰箱中保存，有效期2周。4.9展青霉素混合标准工作液：分别移取1.00mL展青霉素标准工作液（4.5）和1.00mL羟甲基糠醛标准工作液（4.8）于离心管中，氮气吹至近干，用四氢呋喃溶液（4.3）转移至10mL容量瓶中，定容至刻度，每毫升含展青霉素标准物质1.00ug、羟甲基糠醛标准物质2.00μg，置于0℃～4℃冰箱中保存，有效期2周。
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4.10净化柱：Mycrosep228AflaPat柱（内装涂硅藻土、硅胶、硅酸镁载体、无水硫酸钙）“或相当者。4.11滤膜：0.45μm。
5仪器和设备
常用实验室仪器有以下各项。
5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。5.2分析天平：感量为0.0001g和0.01g。5.3漩涡振荡器。
5.4氮吹仪。bzxZ.net
5.5具塞刻度试管，50mL。
6操作步骤
6.1试样制备
6.1.1液体试样：准确移取4mL试样于50mL具塞刻度试管（5.5)中，待提取。6.1.2固液体、固体试样：固液体样品匀浆、固体试样粉碎后，称取4g（精确至0.01g）于50mL具塞刻度试管(5.5)中，待提取。
6.2提取
6.2.1液体试样：试样（6.1.1)中加人21mL乙腈（4.1)，于漩涡振荡器(5.3)振荡2min后，静置分层，直接读取上清液体积V1。
6.2.2固液体、固体试样：试样（6.1.2)中加入4mL水，加入75μL果胶酶（4.2)，40℃下放置2h或室温下放置16h）。加人21mL乙腈（4.1），于游涡振荡器（5.3）振荡1min后，静置分层，直接读取上清液体积Vi。
6.3净化
移取约8mL提取液（6.2）于试管中，过Mycrosep228AflaPat净化柱（4.10），收集净化液，准确移取5mL于10mL试管中，40℃条件下用氮气吹至近干，加人0.50mL四氢溶液（4.3），混匀，过滤膜（4.11)，试液供测定。
6.4液相色谱分析
6.4.1色谱参考条件
色谱柱：Cls，5um，250mm×4.6mm(i.d.），或性能相当者；流动相：四氢呋喃溶液（4.3）；流速：1.0mL/min；
检测波长：276nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL。
6.4.2测定
准确移取展青霉素标准混合工作液（4.9）和样品待测溶液（6.3），分别进样，外标法定量，色谱图参见附录A。同时做空白试验。
7结果计算
试样中展青霉素的含量以质量分数w计，单位为微克每千克或微克每升（ug/kg或ug/L）表示，按*Mycrosep228AflaPat柱是商品名的示例。给出这一信息是为了方便本标准的使用者。公式(1)计算：
式中：
A，—试样溶液中展青霉素的峰面积；Aad
A × pa ×
-标准溶液中展青霉素的峰面积；展青霉素标准溶液的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)：试样提取液的体积，单位为毫升(mL)；收集试样净化液的体积，单位为毫升（mL），Vz=5mL；V2
试样最终定容体积，单位为毫升（mL），Va=0.5mL；V3
试样质量或体积，单位为克或毫升（g或mL）。m
计算结果保留二位有效数字。
8精密度
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在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%，以大于这两个测定值的算术平均值的15%情况不超过5%为前提，在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的30%，以大于这两个测定值的算术平均值的30%情况不超过5%为前提。4
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附录A
（资料性附录）
展青霉素混合标准溶液色谱图
A.1展青霉素混合标准溶液色谱图mAU
羟甲基糠醛
展青霖素
图A.12.00mg/L羟甲基糠醛和1.00mg/L展青霉素混合标准溶液色谱图
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