【商检行业标准(SN)】 蜜蜂欧洲幼虫腐臭病诊断方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1682—2005
蜜蜂欧洲幼虫腐臭病诊断方法
Protocol of diagnosis for European foulbrood of honey bees2005-09-30发布
中华人民共和国
国家质量蓝督检验检疫总局
2006-05-01实施
SN/T1682-2005
本标准参考了世界动物卫生组织(OIE)制定的《陆生动物诊断试验和疫苗标准手册\204版。标准附录 A、附录 B 均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口，本标起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局。木标准主要起草人：陈世松、苏琳、术开元、土建。本标准系首饮发布的出人境检验检疫行业标推。１范围
蜜蜂欧洲幼虫腐臭病诊断方法
本标准规定了蟹蜂欧洲幼虫癫臭病的诊断方法。本标准适用于蜜蜂欧洲幼虫腐臭病的检疫，2诊断原理
SN/T1682—2005
蜜蜂欧洲虫腐臭病（European Foulbraad of Honey Bees）是由蜂房蜜蜂球菌（Melissococcusbluton)引起的蜜蜂幼虫的一种细菌性传染病。该病通常使(3~～4)日龄的末封盖幼虫死亡。幼虫患病后常作不正常的运动而使位置错乱。同时，患病幼虫又可随时被工蜂除，形成卵，幼虫，空房相间的“插花子脾”。临床上发现死亡幼虫墨黄白或暗褐色，并有酸臭气味，无粘性，即可疑为欧洲幼虫腐臭病。由于病原体为细菌，故可将临床上疑摄蜜蜂欧洲幼虫腐臭病的幼出或死亡幼虫进行染色直接镜检可初步诊断为蜜蜂欧洲幼虫腐臭病，确诊需经分离培养后染色镜检。在普通光学显微镜下蜂房蜜蜂球菌呈单个或成串或头尾相接成对或成短链状或成簇状排列的短披针形球菌，大小为0.5m×10ml。3设备、材料和试剂
3.1设备
3.1.1普通光学显微镜
3.1.2C()培养箱。
3.2材料和试剂
3. 2. 1 无菌平血,
3. 2.2 载玻片。
3.2.3 试管(10 mL)
3.2.42光石炭酸复红溶液。
3.2.5无菌生理盐水。
3.2.6牛肉膏琼脂平板。
3.2.7牛肉膏琼脂斜面。
4菜样www.bzxz.net
4. 1来样比例
批蜂（幼蜂)数量小于或等于30只时全部采样。数量为30只~-100只时：以30只采样量为基础，每增加10只，采样量增加1只。数量人于100只时，按每批总数的30为采样，4.2采样方法
从峰蜂群中随机抽取子脾-一张，按照5点式来样方法，分别从巢脾四角与中央各检查幼虫房30个，观察是否有患病幼虫存在。采样时尽量采取变色或死亡幼虫送实验室检查。5方法与判定
5.1直接检查法
5.1.1挑取被检样品少许，加少量无菌生理盐水制成悬浮液，5.1,2将上述悬浮液1滴～2满，政在干净的载玻片上涂匀，自然风或置火焰上慢慢干燥。1
SN/T1682—2005
5. 1. 3用 2元石炭酸复红液(参见附录 A)染色 1. 5 min~-2 ini,水洗,用滤纸吸干,5.1.4在普通光学显微镜（1000×-~1500×)下进行检查。5.1.5结果判是：发现0.5I×1Cm大小成单个或成串或头尾相接成对或成短链状或成获状排刻短披针形球菌时，可初步判定为蜜蜂欧洲蜂幼虫腐臭病。5.2分离培养法
5.2.1按无菌操作，取被检样品少许，加少量无菌生埋盐水制成悬浮液。5.2.2用接种环取上述悬浮羧,以划线法接种于牛肉旁琼脂(参见附录B)平板，置与%C() 的培养箱中,在 35℃. ~-37℃条件下,培养 24 h~-48 h,5.2.3挑政单个菌落，接种于牛肉膏琼脂斜面，置5%CO2的培养箱中，在35℃~-37℃条件下培养24 h~-48 h.
5.2.4经过分离纯化的菌株，即可用接种环挑取菌落,放在干净的载波片.1.加1滴～2滴生理盐水涂勾后风干或干燥。用5.1.3的染色方法染色后,在普通光学显微镜下检查。5. 2. 5 结累判定;发现 0. 5 tIi× 10 I1 大小成单个或成中或头尾相接成对或成短链状或成簇状排列的短被针形球菌时,可判定为蜜蜂欧洲蜂幼虫腐病。2
附录A
（资料性附录）
2%石炭酸复红液的制备
SN/T 1682—2005
碱性复红 g,溶于95为乙醇100 mL中,再取此液10 mL 与5%石炭酸溶液 90 ml.混匀即成附录B
（资料性附录）
牛肉膏琼脂培养基的制备
牛肉膏 1 片,蛋白陈1 号,氯化钠 C.5 是,琼脂2 g,蒸馏水 100 mL,将上述各种成分混合,加溶解,调节pII值至7.0，在0.068MPa压力下，高温灭菌消毒15min。
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