【国家标准(GB)】 中国对虾 苗种

ICS 65.150
中华人民共和国国家标准
GB/T15101.2-2008
代替GB/T15101.2—1994
中国对虾
Chinese shrimpScedings
2008-04-09发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-06-01实施
GB/T15101中国对虾》分为两个部分：前言
-GB/T15101.1—2008中国对虾亲虾；GB/T15101.2—2008中国对虾苗种：來部分为GB/T 15101的第2部分。本部分代替GB/T15101.2：1994《中国对虾养殖苗种》，主要变化如下原标准名称中国对虾养殖苗种改为《国对虾苗种；--增加了术语对应的英文;
删除了弱苗率的定义和婆求；
齿种规格的最低限由 0. 7 tr1 修改为 0. 8 cm;…增加了对苗种来源的要求；
增加了虾萨计数为法的内容：
增加了对主要病睾性疾病的检疫要求；增加了苗种运输的内容；
增加了规范性附录“涛拉综合症的检疫”(见附录A)；增加了资料性附录\RNA的实验室操作要求”觅附录B)本部分的附录A为规范性附录,附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部提山，本部分由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所。本部分主要起草人：张岩.陈四清，丁东祥，李每晶本部分所代替标准的质欢版本发布视为：GB/T 15101.2 1994.
GH/T15101.2—2008
1范围
中国对虾
GB/T15101.2—2008
CB/T15101的本部分规定了中国对虾（Fennerupenaeuschinensis）苗种的规格、质扇要求、检验方法、检验规则和运翰方法。
本部分适用于中国对虾苗的生产，销凭和使用，2规范性引用文件
下列文件的条款通过GB/T15101的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用义件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用丁本部分，然而，鼓励根韬本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T15101.1-2008中国对虾：亲虾NY5052无公害食品海水养殖用水水质3术语和定义
下列术语和定义适用于CB/T15101的本部分：3.1
规格合格率sizrgualifirdrale
符合规格要求的苗种数占苗种总数的口分比。3.2
体色异常率abnormalbody-colour ratc体色异常（如发白、发红、履部色素细胞异常扩张等）苗种数占苗种总数的百分比。3.3
伤残率wound and deformity rate发育啮形或附肢和额角损伤的苗种数占苗种总数的百分比。3.4
带病率 illness seeling rate
忠有能现场判别病症或附着有其他附着物的苗种数占苗种总数的百分比。3.5
死亡率 death rale
死亡的个体数凸苗种总数的百分比。4
苗种质量要求
4.1苗种来源
由符合GB/T15101.12008规定的中国对虾亲虾繁殖培育的苗种，苗种体长不小于0.8cm。4.2各项指标要求
4.2.1外观
虾苗应规格整齐，体色正常，体表光滑，健兆、活力强，起后迅逆伏底，搅动后有明显的顶流现象。4.2.2质量要求
苗种质量应符合表1各项指标的要求，1
GB/T 15101.2—2008
苗种的检疫
应对苗种进行对虾
5虾苗计数方法
带水容量法
将虾古盛子巴
中国对虾苗种质量要求
规格合格率/%
体色异常率/死
怖残率/
带病率/%
死亡率/次
对虾白鑫毒(WSSV)
清植综合症病毒
V)、游拉综合症（TSV）检疫
的容器内
逐品进行计数，重算
惠计3次
5.2无水容量法
又称干量法，
科纱网或尼
用此杯捞取集禹播助管虾苗，遥居总数。
5.3重量讨数法
用尼龙筛绢网
袋扮敏集苗箱内
苗的尾数。
检验方法
规格合格率测定
直接用直尺(精度
6.2体色异常率、死亡
活体直接观察，测死！
数不得低于1000尾。
6.3对虾白斑病的检疫
值，根据水
测量蜂从眼病基部
塞窦、带病率
不得检出
不得检出
~2m的容器量最虾，下载标准就来标准下载网
整个穿器中虾最总数
钢薄板制戴半圆形杯状漏斗，
算术平与衛，按督数计算出虾齿重复3次，算出海千克或每克虾
第末端的长，每敏样双不得低于30尾。样数不得低10000尾，测体彝常率伤残率、带病率每次取释对虾白斑病病毒的检疫见GB/T
5101.1.-2008附录B的靓
涛拉综合症的检疫
涛拉综合症的检疫见附录A.
7检验规则
7.1组批
以一个育苗池为一个检验批，销售前按批检验，7.2取样方法
每个检验项日随机取样3次，取3次结果的算术乎均值。7.3判定规则
按第1章规定的各项指标判定由种是否合格，有--项不达标即判定为批不合格。2
8苗种的运输
8.1苗种运输可采取帆布栢充气运、塑料充氧运输。GB/T15101.2-2008
8.2 气温 20℃左右,用帆布梯运输体长 1. 0 cm1. 5 cm 的虾茹,运输密度可在 15 万尾/tm° ~25万尾/m，规格30cm×30cm×75cm的塑料袋充氧运输：在水温20℃～21℃时，每袋装水四分之,可运输0. 8 cr~1. 0 tm的虾苗 2. 5万尾～3万尾,运输时间 20 l 以内+成活率在 90%以上。8. 3 运输用水与苗种培育用水的温差应小于 3℃,盐度差小于 3 8.4运输应尽量在早晚进行，避免阳光喝聊。8.5运输用水应符合NVY5052的求SSE
GB/T 15101.2--2008
A.1实验室操作要求
附录A
（规范性附录）
涛拉综合症的检疫
进行涛拉综合症检疫的实验室操作应满足附录B的要求。A.2RNA模板的提取
a）按不同大小的虾声或感染期取不同组织样品0.1名左右，其中，对虾幼体、仔虾取完整个体，3cm以下的幼虾取摘除虾腹的头胸部，较大的幼虾可取鳃区或数根鳃丝，怀疑为慢性期感染的较大幼虾或成虾最对虾的赫已器亨。样品可暂时保存丁一20℃。所取样品在0℃以下研磨混合均匀,取0.1总~~0.5%置于1.51il.无菌微量离心管巾，加人h)）
0.5 ml,～1. tmLTrizoTx试剂，用研磨摔研磨，然后置室温5min。加入0.2mL三氯中烷，振擦混合15s，案温放置3nin。d)
于10000r/min离心5min：
仔细吸取上层水相，移牟一支无RNA酶的微量离心管中，加0.5mL异丙醇，混，置帘温10min。10c00r/min离心10min，倒去上清液。加入1mL无RNA酶的70%乙醇，摄摇1min，再了100001/min离心3min，小心倒去湾液。
散口颠倒高心管，于案温晾T沉淀，加入20u1～100L无RNA酶的水游解RNA流淀，文即用于 RT-PCR或保存于一70C待用，A.3RT-PCR扩增
F1引物序列如:5*-TCA-ATG AGA-GCT-TGG-TCO-3\反应体系按照表A1的规定，扩增程序如下：60保温5min，快速取出并短暂离心，继续在60℃保温30min进行逆转录反应，然后94℃2rmin,再按94℃45s.6045s,40个循环;60℃7min，最后4C保温，PCR产物的电泳参照G13/T15101.1—2008中B.4进行。表A.1涛拉综合症RT-PCR扩增体系读刻
5XEZ缓冲液
甜型锰（ Inul/L）
dNTP(15 mol/1)
10 aul/L 引物 F
1.0 tol/L引物 R1
无RNA酶的水
ITth DNA业合酶(s U/μL)
R.VA模板
应总体积
2. 5 μt.
1.15 μrL
1. 15 ,rL
24.5 μl.
终浓度
1×EZ缓冲液
2. 5 mol/1.
00ma1/L
0, 46 μnnol/L
0. 46 μmol/L
A.4结果判定
GB/T15101.2—2008
A，4.1阳性对照在213bp处会有一条特定条带出现；阴性对照在213bp处不出现条带，以无菌水为模板设立的空白对照不出现任何案带。阳性对照在213bp处光特定条带现或阴性对照在213bp处有条带出现都表明RT-PCR失败：法1：附性对照为已知受TSV感染且RT-PCR结果显示明显阳性的样品RNA模板，70℃保存。注2：阴性对照为已知未变受TSV感染且RT-PCR结果显示期性的对虾凯织RNA模板，70C保存。注3：空白对照为无RNA酶的水作模板。A.4.2条带的亮暗表示扩增产物浓度的多少，但并不对应于模板的量的多少。A.4.3样品的电泳结果参照阳性对照和阴性对照组进行判读。在213bp有条带出现表示样品检测结果为阳性，在213bp无条带出现表示样品检测结果为阴性，A.4.4性结果表明被检样品中存在TSVRNA。对活虾和敏感宿主而言，提示已受TSV感染。GB/T 15101.2—2008
B.1一般介绍
附录H
（资料性附录）
RNA的实验室操作要求
在RVA操作过程中，应注意RNA酶的活性。于RNA很容易被RNA酶降解，而RNA酶义具有很强的稳定性，目广泛存在：内此在操作中要严格防止尺VA嗨污染，并设法抑制其活性。RNA酶的污染包括内源性的和外源性的。内源性的RNA谢污染是指来自于样品组织木身的RNA酶或生化试剂本身的RNA酶。消除方法主要是在RNA拓提和操作过程中使用RVA酶变性剂，如用异硫鼠酸版、盼、三氯甲烷等拥提使RNA嗨变性灭活：使用RNA酶抑制剂，如RNasin使RNA嗨的活性变到抑制。外源性的RNA酶污染是指米白于水、玻璃制品，塑料器血、电泳槽、操作人员和微生物等。可通过焦乙酸二艺酪（IDEPC)、三氯甲烷，干热烘熔等消除。本附录干要介绍外源性RVA酶的消除方法。注意：DEPC.酚和胍盐等有毒或有脑蚀性，应避免吸入.吞食和沾着皮肤，处理DEPC和三氣甲烷的操作均应在通风橱内进行。
B.2溶液配制
直按用于RNA操作的所有水或无机盐溶液都应加人DFPC至0.1%，搅拌12H，然斤经高压蒸汽灭菌15min。不能用DEPC处理的试剂（如含有Tris的溶液）或者不能经高压燕汽灭菌的试剂，应用经DEPC处理的水配制，然后经无RNA酶的0.22πm微孔滤膜过滤除菌B.3玻璃制品
玻璃器血洗净后，在300℃烘烤4h可彻底除去器m上沾污的RNA酶。由烘烤温度高，不能用任何在300℃下可燃烧、变性或融化的材料包裹器Ⅲ，金属制品也可按坡璃制品的办法处理。B.4聚丙烯塑料制品
聚闪烯塑料制品可在通风橱内用三氯甲烷漂洗，晾下后再经高斥蒸汽火菌，最后烘干。也可在加有0.1%DEPC水中夜泡12h.然后经高来蒸汽灭菌，最后烘于。无RNA酶的一次性塑料制品，如塑料离心管、PCR管、枪头等也可购直按使用。B.5电泳槽
许多电泳槽由有机玻璃或聚苯乙.烯材料制成，不能用三氯甲烷处理，也不能经高压汽火菌。可用去污剂洗涤，水冲洗后用乙醇干燥，再没泡于3%II02中，室温下放置10min，然后用含0.1%DEPC的水冲洗电泳槽，晾干并做上标记，供RNA专用RNA经过RI-PCR后，产物已变成DNA，电泳时并不需要对其电泳槽进行无RNA酶处现。B.6人工操作
处理RNA的全部操作应裁塑料或乳胶的一次性丁套，同时应避免因交谈或其他活动造成的飞沫、落尘带人RNA酶的污染，必要的情况下鼓口罩和实验模，或在超净台中进行操作。B.7防微生物污染
所有接触RNA的试剂和材料都应保持无菌，一且有微生物污染或牛长都应丢弃。6
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