【农业行业标准(NY)】 香蕉穿孔线虫检疫检测与鉴定技术规范

ICS 65.020
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1485-2007
香蕉穿孔线虫检疫检测与鉴定
技术规范
Detection and identification for Radopholus similis (Cobb) Thorne2007~12-18发布
2008-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T 1485-2007
本标准的附录 A和附录 D为规范性附录,附录 B、附录C、附录 E和附录 F为资料性附录。本标准出中华人民共和国农业部提出并归口：本标准起草单位：全国农业技术摊服务中心、华南农业人学、广东省植物检疫站、北京市植物保护本标推主要起草人：下福祥、谢辉、吴仕豪、项宇、曹莉、张建华、周春娜、吴立峰、朱莉。1范围
香蕉穿孔线虫检疫检测与鉴定技术规范NY/T 1485—2007
本标雅规定了香焦穿孔线虫(Radupholussinilis)的检疫检测和鉴定方法：本标准适用于本行业对植物，植物产品土壤和其他植物生长介质中的香燕穿孔线虫的检测和鉴定。
2术语、定义
：下列术语和定义适用于本标准。2. 1
生长介质growingmedium
植物的根系在其中生长或用于此目的任何物质。2. 2
检验inspection
由官方对植物、植物产品或其他限定物迹行直观检查，以确定是否存在有害生物和(或)是否符合植物检疫法规。
检测 test
为确定是否存在有害生物或为鉴定有害生物而进行的除肉眼检查以外的官方检查3原理
香蕊穿孔线虫的形态学特征（见附录A)及其寄主范围、地理分布、生物学特性，为害症状和传播途径(参见附录B)是本标推的依据。4
仪器、用具及药品
4.1仪器、用具
采样用具：铲、枝剪、砍刀、聚乙烯塑料袋、油性笔、标签、记录本等.线虫分离用其：漏斗（直径10cm~14cm)，乳胶管、止水夹、浅筛盘、网筛（20月100月）、离心机，试管、培养、面中纸、溉斗架，离心机等。标本制作、鉴定仪器和用具：解剖镜、光学显微镜、凹坡片、平玻片、盖玻片、玻璃丝、酒精灯、恒温水浴箱、电热板、吸管、挑虫针、镊子、于燥器等。4.2药品
40%中醛、甘油、90%乙醇、蒸馏水、苯酚、乳酚、中性树胶、石蜡、硅胶，氨化钙、旗糖、硫酸镁（MgSO）高岭土等
5现场检验和抽样
5.1现场检验
在种植、销昏场地，对香蕉穿孔线虫的寄主植物进行调查，观察其生长状况，对地上部分表现附录B所述症状的植株，采集其根部及根际牛长介质；召地上部无明显症状表现的，卿随机抽取部分植株，观察NY/T14852007
其根部生长状况并取样。
5.2抽样
5.2.1地栽植物的抽样
当田间或温室（人棚）内地裁的植物没有明显症状表现时，可采用对角线、棋盘式苹行跳跃式取样方法，确定取样点，在1hm~2hm的地块上至少取20个～30个点：在样点的植株根部，铲去表层土镶杂卓和其他杂物，取营养根10g～20g，根际上壤100g~200%，将务点壤混合均匀后，倒去部分土，保留1000～2000g土壤作为1个土样，根放在一起作为1个根样。对香蕉，可以采集根部距假恶5cm~~15cm的根和距地表5cm~25cm十层的根际土壤：其他植物，可褪据根系的探浅，采集营养根或须根及其周用土壤。当用间或温室（大棚)内地栽的植物表现明显症状时，在发病点的病株根部，采集表现症状的根及其周围的土壤。5.2.2盆裁植物的抽样
对盆栽精物，当无明显症状表现时.随机抽取长势相对较弱的植株，采集其根和根际介质（或土壤）；抽样率按植株数10000株（盆）3%~-5%，植株数100株～10000株（盆）抽6%~10%，植株数=100株（盆）抽样最低数不少于10株（盆），每株（盆）采集根5g~10g和根际介质（或-L壤）50g~100g，每40～50株（盆)植物的根和根际介质（或上壤)分别混合成1个根样和1.个土样。当抽样数少于100袜（盆)时，至少红成2个混合样品：当盆我植物表现明显症状时，可以采集整个病株的根系及其周围固的介质（或土壤)作为一个独立的样品。5.2.3抽样记录
采集的样品放在塑料袋中封好袋口，贴上标签，防止不同样品相混，并将现场抽样结果填人《表！植物有害生物调查抽样记录表参见附录（)。5.3样品保存
采集的样品若不能及时分离，可将样品在20℃～25℃的室内，将袋口打开透气，并意保滋和避免阳光照射，样品保存时闻不要超过1个月。6实验室检测鉴定
6.1品中线虫的分离
根据样品类型和实验室条件，按照附录D中的一种或几科方法分离样品中的线虫.6.2线虫鉴定标本的制作
参照附录E中的方法，将分离得到的线虫杀死、固定，制成标本鉴定。6.3线盅的形态鉴定
在显微镜下对线虫标木的形态特征进行观察、测量和记述，并与附录A记述的香蕉穿孔线虫形态特征比较，
7结果确定
以谢、雄业的形态特征为依据，符合附录A记述的形态特征的线虫可确定为否穿孔线虫：将实验室检测鉴定结果填入《表2植物有害牛物样本鉴定报告（参见附录F)。8标本保存
经鉴定为香焦穿孔线虫的标本，参照附录E制作成永久玻片保存，或热杀死后置于固定液长期保存，并注明标本的寄主植物、采集时间、采集地点、采集人、制作时间和制作人等。2
A.1分类命名
A.1.1中文名、学名、异名
中文名：
香蕉穿孔线虫
学名：
（规范性附录】
香蕉穿孔线虫分类命名和形态特征Radophotus similzs(Cobb,1893)Thorne,1949异名：
. Iylenchus similis Cobb,J893Anguillutina simixs(Cohb)Goodey,1932- Rotylenchus srimilis(Cobb) Filipjev,1936- Tylenchus granulosus Cobb,1893: Anguitlutina grarzlasa (Cobb)Guudey,1932. Tet ylenches granulosus (Cobh) Filipjev,1936- Radopholus granulosus(Cohb)Siddigi, 1986 Tylenchus acutwcaudatus Zinmmeman,1898·Anguillutinaacutocaudatu(Zimmerrninn)Goodey.I932Iylerr:harhynchus acuturaudutus(Zimmermann)Filipjey;i934- Raudophotus acutocaudatus (Zimmermann)Siddigi. 1986.Tylenchus hiformis Cobb,190gNY/T 1485—-2007
. Raduphotus eitrophilus. Huettel,Dirkspn &. Kaplan,1984A.1.2香蕉穿孔线虫素属于线串门(Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea)、垫刃日（Tylenchida）、短体科（Pratylcnchidae)、穿孔属（RadopholusThorne，1949)。A.2形态特征
A.2.1测量值
筛电(n=12):1=690(520~880)um;a27(22~30);b-6. 5(4. 7--7:4);=4. 5(3.5-~5.2) c10.6(8~13);=.3.4（2.9~4.0);V=56（55~61)口针长--19(17~20)m维出(n=5):L=630(590~670)μmsa=35(31~~44);b=6. 1(6. 1~6. 6);b:-4. 8(4. 1~4. 9);x9(8～10);=5.7(5.～6.7),口针长=14(12~-17)μm;交合刺长=20(19~～22)um,引带长=9(8～12)μm。
以上测量值来白Sher(1968)。2为测量标本数；α为虫体长/虫体最大体宽：为虫体长/出体前端至食道与肠连接处的长度：h为虫体长/虫体前端至食道腺末的长度：为虫体长/尾长为尾长/肛门处体宽；V为出体前端至阴门的长度×100/虫体长。A.2.2形态描述
雌虫：电体呈线形，从虫体中部间两端渐变细，热杀死后，虫休稍向腹面弯。体环纹清楚；侧区有43
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条深浅，粗细均勾的侧线，部分有网格，侧区中带与外带基本等宽，头部低，前端平圆，不继缩或略继缩，头架骨化强，头环34个；针和基部球发达，食道发育正带，中食道球卵圆形、有显著的中食道球迹后食道腺长叶状，从背而或背侧面戳盖肠；阴门显菩，双生殖腺、对仲，受精囊阅形，有杆状的精子；尾通常呈长圆锥形，偶尔呆近俪柱形，尾的平均长度通带超过52um，尾后部透明区苹均长度通常超过9111，透明区的环纹不规则，尾端部形态变化多样，多数呈规则或不规则圆锥形，末端钝，少数有一指状突或略分叉，尾端光滑或有不规则环纹。雄虫：业体皇綫形，热杀死后虫体直或略向腹面弯头部圆、呈球形，显落继缩，具3个一5个头环，头架骨化弱或不明显；侧线4条；针和食道显著退化，口针基部球不明显或无，中食道球不清楚：单精巢、前伸，交合刺柄强壮，引带伸出泄殖腔，宋端有小爪瓜状突，交合伞伸到尾部约2/3处；尾圣长圆锥形，尾端部形态多样，末端钝圆或有一指状寒。香穿孔线虫的形态特征见图A，1H
C~F,I-NL
群出：
C,头部
.头顶而观
I--E.尾部
B整体
E.F.头部
[5.头部须商观
幼虫：
图A.1香蕉穿孔线虫
( williams &Siddqi,I97a)
附景B
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(资料性附录）
香蕉穿孔线虫寄主范围、地理分布、生物学特性、为害症状和传播途径.香蕉穿孔线出是香蕉、柑橘、胡椒、红掌、竹学、生姜、番茄等多种裁培植物和一些虾生植物根及其他地下组织的一种寄生线虫，主要有2个生理小种（或致病型）：香蕉小种（或致病型）一-寄生为害香蕉
等多种植物，但是不寄生为害柑橱，该小种目前泛分布于世界大多数的热带、亚热帮香蕉种植区和一些温带地区的温室中，柑橘小种（或致病型）可以生为害柑橘和香蕉及其他多种植物，该小种目前主要分布在美国古凹、多米尼加和圭亚那。B.1寄主范围
香蒸穿孔线虫的寄主范围非常广，已报道的寄主有350多种，其中多数属偶然寄主（在罹病香蕉树附近存在）和人工接种寄主。其主要为害的农作物和经济作物包括香蕉(Mutsapp.）、胡（Piberninum)、柑橘(Citrus app.）、柚子(Cilrus maxima）、柠攀(Citrus timun)、波剪（Amunas comzosus）、蔗(Sacchanum officinamurn）荔枝（Litchi chinensis）、椰子树（Cocos nucifera）槟榔树（Areca cathecu）、可可(Theobrma cacao）咖啡(Cofea arahicu）茶树(Camallia inensis）美洲柿（Diaspyros virgimni-ana）、鸭梨(Persea americuna）、生姜（Zinigiberofficinale）、花生（Arachis hypogata）甜菜（Beta Vul-gari.）辣椒(Capsicum annum)苦(Mormordicu charantia)萝(Raphians silivus）苣(Lactucasatiuu）大豆（Gyrine max）小麦（Triticum.aestiun）高粱（Surghtn'bicolor）、玉米（Zea mays）、番(Lycopersicom esculentun)马铃薯(Solnan tuberosum),瓜(Citrullus lamztus)瓜(Cucunismelo）南瓜(Cucurhita pepo）甘薯（pomoea batutas）婴药(Dicsrorea.alata），姜黄(Curcuma longa）小豆蔻（Arnrmum'compactun）、蚕豆（Vicia faba）菜豆（Phareotus vutgaris）草莓（Fragarina chiloen-sis）猎(Medicago sutira）油棕(Elaeis gtineen.yis)，山蓉（Arecastun ramanzuffianum),棕(Roystumea regia）等；还为害天南星科(Araiceae）、竹芋科(Marantaceae）、棕榈科（Paimae)、芭蕉科（Musace-ae)和风梨科（Bromeliaceae)等观赏植物。最常见的观赏植物寄主有天南星科的花烛属（(Anthurizmspp.）、麒麟叶属（Epipremnun spp.）蔓绿绒属（Philodendron 9pp.），竹芋科的肖竹芋属（Calatheaspp.）、竹芋属（Muranta spp.），棕榈科的墨西哥棕属（Chamaedorea.spp.）,散居属（Chry.a.tidu-carpus spp.），风梨科的风梨属（Ananasspp.）、隐花风梨属（Cryptantus sPp.），芭黛科的塑兰属（Strelitzia spp.）、璇人蕉属（Rarxenata spp.），茜草科的龙般花属（rzoraspp），五加科的孔雀木属(Dixygotheca spp:）等。
B.2地理分布
香燕穿孔线虫广泛分布世界各地，有分布记录的国家或地区如下：欧洲：比利时、法国、德国、荷兰、意大利、波兰、斯洛文尼业。亚洲：文莱、印度、印度尼西亚、黎巴嫩、马来西亚、阿曼、巴基斯坦、菲律宾、斯里兰卡、泰国、也门、日本、越南、韩国：
非洲：布隆迪、喀麦隆、中非、刚果、科特迪瓦、埃及、埃密俄比亚、加莲、加纳、几内亚、背尼亚、马达如斯加、马拉维、毛单求斯、莫桑比克、尼日利亚、留尼汪、塞内加尔，塞舌尔、索马电、南非、苏丹、坦桑尼亚、乌干达、赞比亚、津巴布韦；冈比亚、率洛哥、扎伊尔。北美：加拿大、墨西哥、美国、巴巴多斯、伯利兹、哥斯达黎加、古巴、多米尼加岛、多米尼加共和国、格NY/T1485-2007
林纳达、瓜德罗普、危地马拉、洪都拉斯、牙买加、马提尼克岛、巴拉马、波多黎各岛、圣卢西亚、圣基茨利尼维斯联邦、圣文森特格林纳」斯、特立尼达和多巴哥、关属维尔京群岛：南美：阿根廷、巴西、哥伦比亚、厄瓜多尔、法属半亚那、主业那、秘鲁、苏里南，委内瑞拉。大洋洲：澳大利亚、斐济、法属波利尼西亚、帕劳、巴布亚新儿内业、萨摩亚、汤加、库克群岛、红埃、诺福克岛所罗门群岛。
B.3生物学特性
在自然条件下，香燕穿孔线出主要分布可热带，亚热需地区，在温带地区，一般是在温窄中侵染为书。2龄及其以上名龄虫态均有侵染能力，在寄主和土壤中都能完成生活史，完成一个世代所需时间因不同寄主、不同温度而异。香蕉小种在香蕉根部，在24℃32℃H时的生活出为20d～25d；在椰子根上，在25℃～28℃时的坐活史为25d；在槟榔幼苗根和黑胡极根部，在21℃～37℃时的生活史为25d~30d柑橘小种在柑橘根部，在24℃-27℃时的牛活史为10d~-20d，通常该线虫馨殖和侵染霄主的最适温度为24℃.最低温度为12℃，最高温度为29.5%-~32.5℃。在被侵染的寄主根和其他地下组织内，该线出可长期存活。在不种香蕉但有杂草的间土壤中，再能由于口间的一些杂草是替代寄主，香蕊穿孔线虫种群能维持5年才全部死亡：在无任何寄主的土壤中存活期可达6个月。B. 4 为害症状
不同的寄主被香蕉穿孔虫为害后所表现的症状不完全相同。香熊被侵染后，根表面产牛红褐色咯凹陷的斑痕，手出现边缘稍凸起的纵裂缝，将病根纵切开，可见皮层上有红褐色条斑，随若病害的发展，根组织变黑腐烂，香蕉地上部表现为生长缀慢，叶片小，枯黄，坐果少，果实小，出可根系被破坏，固差能力弱，蕉株易摄摆、倒伏或翻范，故香熊穿孔线虫病义称为\黑头倒伏病”（blackhcadtopingtdiscase）。杜概被侵染后，受害根部肿胀，侵梁点产生黑色伤痕，根表皮容易脱落，根系婆缩：地上部叶片稀少，叶片小、僮硬和黄化，例枝末端叶落枯死，季节性新梢生长差，并花嫩量不受彪响，但坐果少，并目果实小、很少成熟：病树呈衰退现象，在土壤缺水和十早季放易迈速萎為，在发病柑摘园中，果树衰退病以每年约15m的速度护散，故柑循穿孔线虫病又称为柑橘护散性衰退病（sprcucingdecline）。胡椒被侵染后，细嫩的营养根表现出明显的橙色到紫色斑痕，老根上的斑痕呈棕色不明显，根大量腐烂，缅嫩的养根比主根腐烂快，随后较大的侧根大量坏死；地上部表现为叫片变、下垂，随后落叶、将花，牛长停止，最后死亡：其他寄主植物被害一般表现为根部出现大量空腔，韧皮部和形成层可完全毁坏，山现充满线出的间隙，使中糕的其余部分与皮层分儿，根部环死联是橙色，紫色战祸色，根部环死处外部形成裂缝，根腐烂地上部一般表现为叶片缩小、变色、新使生长弱等浪退症状。群.5传播途径
香蕉穿孔线虫极易随着香蕉、观赏植物和其他寄主植物的地下部分以及所沾附的士壤进行远距离传播。在出间，衣事操作和流水也可以传播。在发病的果园里，还可以通过植物根系生长和相五接触以及线业白身的移动进行近距离的传播。6
生产/经者
联系/负责人
谣查日期
症状措述：
植物名称(中文名和学名)
发生与防控情况及原因：
抽样方法、部位利捆样比例：
抽样单位(益章）：
抽祥人(签名）：
附录C
（资料性附录)
植物有害生物调查抽样记录表
地址及邮编
联系电话
抽祥地点
生产/经营者
·现场负费人
注：本单一式两份，抽样单位和受检单位各一份，植物生育期
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编号：
洞查代表
株数或面积
植物来源免费标准bzxz.net
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D.1直接解剖法
附录D
「规范性附录’
香蕉穿礼线虫分离方法
将表现可疑症状的病根表面洗净，剪成1cx～2cm小段，放在装有适量消水的培养血中，在解剖镜下用解计撕开组织，线虫就会从组织中游到水中，挑取若下条线虫置于凹玻片上，制成临时玻片供鉴定用。
D.2浅盘贝要漏斗法
在漏斗下面接段乳胶管，乳胶管上装个止水灭，在乳胶管另一端套一个小试管，在漏斗中装清水至边沿1cm-~2cm处，将漏斗置十架上，赶除乳胶管中的气泡：将面巾纸铺在浅筛盘上，然后将介质或剪成1cm长的根平铺在浅盘上，将装若样品的筛盘轻轻放在漏斗上，若漏斗中的水不能没没样品则沿漏斗壁轻轻注人清水，使漏斗中的水刚好浸没样品。24h～18h后，线虫由其趋水性、钻孔性和自身的重量下沉至溺斗下的乳胶管或小试管中，用小培养血接在乳胶管下，松开止水火，收线血感浮液，或直接把乳胶管下的小试管取下。D.3过筛—浅盘贝曼漏斗法
将士壤样品放人大小适当的容器内，加水充分淘洗，静萱108-~20后，将上而的悬浮液通过20鼠的筛子例入第一个容器中，在第，个桶中加入适量清水重复上述步，并用水冲洗筛广，将滤渣望的线出尽可能冲洗到第二个容器中，然后将第二个容器中的悬浮液过400目的筛子，用水充分冲洗筛子上的滤清去除土壤颗粒，然后用浅盘贝受漏斗法进步分离400日筛上的滤渣，此法对黏性十壤叶线亚的分离效果较好。
D.4离心源浮法
离心漂浮法足利用比重大于线虫比重（一.08)的溶液，通过离心将线山从土镶中分离山来，这种溶液一般用比重为1.18的蒸糖液（蔗糖484，加水游解牵1.升>或比重为1.15的Mg)溶液。分离时把200g土放人大1000mL的烧杯中，加1(000mL水充分搅拌，静止20s--30$，将上浮液均匀倒人4个250mI.的离心管中，每管加人1勺粉状高岭工（高岭七粉末在离心管中浮在水面，离心时形成一层致密的膜覆盖在线虫和沉积物表前，可止倒出上清液时丢失线虫），以1800乌离心力的转速离心5mi，倒去离心管中的上清液，期入蔗糖液（d=1.18)或Mgs0)溶液（c=1.15)，充分搅拌，再以1800g离心力的转速离心mi1，此时线虫浮于上清液中，将上清液倒500月筛子内，用水充分淋洗，然后将绒虫收集到小烧杯中
E1线虫的杀死
附录E
(资料性附录
植物线虫标本的制作和保存
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将分离所得的线虫愁液放在试管中，把试管置于试管渠上静置1h～2h，待线虫沉底后，用吸管小心地吸去上清液至试管底部2ctm~3cm，然后将试管放人60℃～65℃的水浴箱中2min~-3mi杀死线虫，杀死少量的线虫可将线放在即玻片上的水滴中，手持凹玻片在酒精灯的火焰上来回58～6s钟即可，加热过程中，要不断用手背接触玻片，感觉稍烫手即可。加热过度会破坏形态结构，膨啊观察。E.2线虫的固定
·已杀死的线出必须及时用固定液固定，才能防止出体腐烂，保持虫体的形态不变和内部器官的清晰。同定液种类较多，常用的有4%中醛溶波（福尔马林：蒸馏水=1：9）、TAF（二羟基乙胺：福尔马称：蒸馏水=2=7：91)和FG（福尔马林：甘油：蒸馅水=10：1：89）。少量线虫被杀死后，可用挑虫针将线虫移到固定液中固定，大量的线虫被加热杀死后，在线虫悬浮液中加等最的、浓度双倍的固定液(如8%的甲醛液)即可：
E.3线虫标本的制作
E.3.1浸泡标本的制作
绒出被杀死、固定后，用吸管将线虫移到小安培瓶中的固定液中，初步保存，待经过鉴后，用挑针将确定的香蕉穿孔线虫移到离心管内的固定液中保存，这样的没泡标本可保存数年。E.3.2临时玻片标本的制作
临时玻片标本用于线虫的一般形态观察和鉴定，鉴定完后可回收到离心管中。临时玻片标本的制作方法比较简单，般用固定线虫的固定液作为浮载剂，滴适量于载片上，在解剖镜下，用挑针将固定好的线虫数条（一般5条～10条）挑到浮载剂中，冲使其沉下，然后把与线虫虫体直径相近的3根3mII5mm长的玻璃丝均匀胃丁浮载剂边缘，删盖玻片，用滤纸吸去溢出的浮载剂，即可在显微镜下观察鉴定，者不能及时鉴定，则需用指中油过片，可保存儿天至数周。也可用原1.0mm～1.2mm的凹玻片，将线虫沉入凹玻片上的浮载剂底部后，无需加支撑物，直接盖玻片，进行观察鉴定，这种方法制作的临时玻片，放在保湿Ⅲ中可保存数周，并且鉴定后，玻片上的线易于回收到离心管中长期保存。E.3.3永久玻片标本的制作
永久玻片标本，用于线虫的进步分类鉴定研究和直按长期保存，制作线虫永久玻片标本，首先必须将线虫脱水。线虫脱水的方法很多，下而介绍两种较常用的方法。方法1.乳酚快速脱水法Franklin&Goocley，1949)：乳酚油配制：苯酚（液体)20mL，乳酚20mL：H汕40mL，蒸馏水20mI把滴有乳酚油的凹玻片放在加热板上，加热至65℃～70℃，将已固定1d以上的线虫挑入热的乳酚油中，继续加热2min~31nin后，在解剖镜下观察标本是否清晰，若不够清晰，继续在65℃～70℃的加热板1加热片刻至消晰.然后放在干燥器中12h24h，进一步去除水分后即可制片。操作过程中要注意避免使线如热过度，否则会损环标本。方法2.百油一乙醉脱水法（Seinhorst,1959)：NY/T14852007
脱水液配制脱水液T96%乙醇20mL：甘油1mL：蒸馅水79ml.脱水液Ⅱ=96%乙醇95 mL :甘油 5 ml.
脱水步骤：
a）在小培菲血中加入约为其容积1/2的脱水液」，将已固定的绒虫挑人其中：b）1滴-2滴饱和味酸水溶液,防止口针透明；在干燥器内加入约为其穿积1/1)的96%乙醇，把不加盖的小培养血放在十燥器内，盖上十燥器盖了,将其放在35℃-~40℃温箱内12h以上;拿出小培养，吸大部分溶液，心加满脱水液Ⅱ，半盖上盖，放人40℃温箱内：每隔2 h~-3h重复步骤“d)(3次～4);e)
脱水后的线虫可立即制片或行放在装有硅胶或（aCl的十燥器中。f
接以下方法，将脱水后的线虫制成玻片。将直径1.5cm的打孔器在酒精灯火焰上加热后，插到蜡盘中取少量石蜡（熔点54），并迅速轻按于载玻片中央，待冷却后即形成一个蜡。在蜡图内滴1小滴纯甘油（带量以盖.上盖玻片后不外盗为宜)作为乳载剂（若用乳酚油脱水，可以用乳酚汕作浮载剂），将已脱水的线虫5条~-10条挑入其中,排列整齐,并将与绒业直径相近的3 根 3 mtt1-~5 mm 的玻璃丝均勺置于浮载剂边缘，加盖玻片后，将载玻片移至65C~70的加热板上熔蜡，待蜡熔化后移至实验台上冷却：用市性树胶封片，待干后再封一次：最后贴上标签，左边的标签写明样品号、寄主植物采集地点、采集人、标本制作口期；右边的标签写明玻片号、线虫学名、线虫虫态及其个数。10
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