【行业标准】 咖啡及制品中葫芦巴碱的测定 高效液相色谱法

ICS67.140.20
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3012—2016
咖啡及制品中葫芦巴碱的测定
高效液相色谱法
Determination of trigonelline in coffee and its products-Highperformanceliquid chromatography2016-11-01发布
2017-04-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由农业部农垦局提出。
本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会心口NY/T3012—2016
JUELISHINGA
本标准起草单位：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所、农业部农产品质量监督检验测试中心（昆明）、农业部农产品质量安全风险评估验
黎其万、邵金
刘宏程
本标准主要起草人
邹艳虹
GOREARO CENER
1范围
咖啡及制品中葫芦巴碱的测定
高效液相色谱法
本标准规定了咖啡及制品中葫芦巴碱含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于生咖啡、烘焙咖啡、速溶咖啡中葫芦巴碱的测定NY/T3012—2016
本方法的定量测定范围为0.002g/100g～1g/100g，方法的检出限为0.001g/100g，方法的定量限为0.002g/100g。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本义件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T1518袋装咖啡取样
3原理
试样中葫芦巴碱用沸水提取，沉淀蛋白，过滤，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂
4.1.1中醇(CHOH.CAS：67-56-1)：色谱纯4.1.2乙腊（CH,CN.CAS:75-05-8)：色谱纯。4.1.3磺基水杨酸（CHO.S·2H.O.CAS:5965-83-3)：分析纯。4.1.4标准品：葫芦巴碱标准品（C,H.O,NCAS：535-83-1)：纯度≥98%4.2标准溶液配制
4.2.1磺基水杨酸溶液：称取磺基水杨酸5.00g，水溶解后定容至100mL。4.2.2葫芦巴碱标准储备溶液：称取葫芦巴碱50mg（精确至0.1mg），置于10mL烧杯中，水溶解后转移到25ml.容量瓶中定容至刻度，配制成质量浓度为2000mg/L标准储备液。该储备液在4℃冰箱避光条件下，有效期6个月，
4.2.3葫芦巴碱标准工作溶液：分别吸取适量的标准储备溶液，用水稀释质量浓度分别为1.0mg/L、2.0mg/l.5.0mg/l、10.0mg/L20.0mg/L和50.0mg/L的混合标准工作溶液。该标准工作溶液4℃冰箱避光条件下，有效期1个月。5仪器设备和器具
5.1高效液相色谱仪：带紫外检测器5.2分析大平：感量0.1mg和0.01g。NY/T3012—2016
5.3超声波清洗器。
5.4容量瓶：25mL.100mL
5.5针头过滤器：孔径为0.45m，水相的滤膜。5.6咖啡磨。
5.7嵌齿轮磨。
5.8样品筛，孔径为630m
试样制备与保存
6.1试样制备
STANDARD
ISHING
式5UB定的设备研磨，直至试样通过630m的样品取样按照NY/T1518的规定执行
筛为止，混匀，装入密闭容器中6.2试样保存
样品于室温下保
7试验步骤
7.1提取
称取试样0.5go
其中生
煮沸提取
，置于电热板
摇勾，水定容至刻度
7.2测定
7.2.1色谱参考条
色谱柱：氢基杆
温：30℃；进样量
7.2.2色谱分析
分别取标准
绘制标准工作曲线
7.2.3空白试验免费标准下载网bzxz
啡为0.2g.精确到0.01g）于100mL烧杯中，加min.冷地至幸温转移到100证容量瓶中，加人液用水相
滤液工机测定
能膜过滤
沸水。盖表面
基水杨酸溶液，
（长度
mm×宽度1.6mm，
动机：甲醇水（88十12），等度洗脱山
百之性能
容液和试样提取：
智提取
除不加待测样品外
8结果计算
均控公术
高效液相色谱仪，以标准
作山线比较定量或以单
行操作
试样中葫芦巴碱含量以质量分数计，按式计算
XVXV,XA
mXVXA.X10000
式中：
试样中荫卢巴碱的含量，单位为克每百克（g/1COg）；C
标准济液浓度，单位为毫克每升（mg/L)；试样溶液定容体积，单位为毫升（ml）；标准溶液进样体积，单位为微升（uL）；试样进样体积，单位为微升（l)；标准溶液峰面积；
试样济液峰面积；
试样质量，单位为克（g)；
夜教峰
260nm：柱
对质量浓度
定量。
换算系数。
计算结果保留3位有效数字。
精密度
NY/T3012—2016
在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。10
参考色谱图
葫芦巴碱的参考色谱图见图1
保留时间（min）
2mg/L葫芦巴碱标准溶液参考色谱图16.00
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