【商检行业标准(SN)】 进出口动物源性食品中孕激素类药物残留量的检测方法 高效液相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1980—2007
进出口动物源性食品中
孕激素类药物残留量的检测方法高效液相色谱-质谱/质谱法
Determination of progestogens residues in food ofanimal origin for import and export--HFLC-MS/MS melhod2007-08-06发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
数碍功伪
2008-03-01实施
本标准的附录 A和附录 B均为资料性附录。本标准出国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T1980—2007
本标准由中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局.4华人其和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院负责起草。本标准主要起草人：林黎明，张鸿伟、岳振峰、宋坚、彭涛、蔡发、杜忙清，陈永乎。本标催系谨次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
进出口动物源性食品中
孕激素类药物残留量的检测方法高效液相色谱-质谱/质谱法
SV/T 1980—2007
本标准规定了动物源性食品中17α-羟孕酮烯内孕素、炔诺孕、烘诺酶、美仑孕，中地孕酮、孕、中轻孕酮、氯地孕乱等九列孕邀素炎药物残留量的制样、被相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。本标准适用于内胜、肌肉、水产品、美照及牛好等动物源性食品中170-轻孕配、婚丙不紫、炔诺孕、炔诺酮，美仑孕酮.甲跑孕孕、甲羟孕、氮地孕等九种激素类药物残留量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而或为本标飛的条款。凡是注F奶的引用文件，其随后所的修政单（不包括勘的内睿）或修订版所不适用于本标症，然而，鼓励根据本称雅达成协议的各方砾究是香可侧用这些文件的最新版木。北慰不注日期的引用文件，其晟新版在适而本标滩。GB/T6682—1992分析实验穿水规格和试整方法3 样品制备与保存
3.1制样要求
制祥操作过程小应防止样品受到活染或发生您光物鑫车
3. 2 动物肌肉,内脏和水产品
从所取全部详品中取出有代象性样品可食都分约500宫，用组纹捣碎机充分碎均勾，装人活净容器中，密封，并标明标记.于一18和以下抢东存惑3.3牛奶、蜂蜜样品
从所收全部样品中圾出有代装性样品50，充分混勾，均影成阅扮，分别装人活净容器中，密封，并标明标记，下一18℃以下冷炼存被4方法提要
试样中加人适乙酸铵级冲液经酶解后，用乙情提圾样龄九种孕激紫类残留，正已烷-二氧甲烷脱脂，固相举取柱净化，浓缩，高效液相色谱/中联质谱测定.内标法定鼠。5试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682--1992规定的一级水。5.1 乙睛·色谐级。
5.2正己烷,色谱级。
5.3二愈甲烷，色谱级。
5. 4 4醇,色谱级,
5.5 冰乙酸，色谱级。
5.6正丙醇，色谱级。
5.7乙酸铵。
SN/T 1980—2007
5. 8β葡糖甘硫酸酯醇酶。
5.9乙酸铵缓冲游波：溶解11.6名乙酸铵（5.7）寸980mT.水中.用冰乙酸调节溶液pJI值到5.2，最后用水稀释至 1 L。
5.10正已烷-二氧中烷游液取正已烷（5.2)80ml.，二氣中烷（5.3)20ml，混合后振摇混句。5. 11 Cla SJ托;500 mg.3 mL,或相当者,使用前依次用 5 mI 用醇,5 mL 水活化。5.12标准物质：17α-羟孕酮、烯丙孕素、块诺孕酮酷酸炔诺.酷酸美仑孕酮、醋酸甲地孕删、李酮、醋酸甲羟孕配，氯地孕酮、17-经孕-D8.孕酮-D9标准品：纯度含95%。5. 13标准榕液：
5.13.1标准储备溶液：分别准确称取适量儿种举激素相应化合物标推品（5.12），用乙脂落解定容至100mL，得质量浓度分别为1000g/ml的标储备落液。此储备液可在一20℃以下避光存放5个月。5.13.2混合标准中问液;谁碲吸取各种孕激系类标准循备液(5.13.1)适量,刷乙睛准确稀释到各种孕激素类药物的浓度为100/L，此中间液可在-20℃以下避光存放3个月，5.13.3抗代内标储备溶液：分别准确称取适量17:r-羟孕酮-D：、孕酮-D,标准品（5.12,分别用乙脂准确溶解并稀释至落波浓度为1000证/ml。此诺错备液可在一20℃以下避光存放6个月。临用前根据需要用艺稀释至适当浓度，作为混合标准内标工作，一20冰箱保存，5.13.4混合泵代内标4间液：准确吸取各种孕微套氛代内标储备液（5.13.3)适量于棕色容整瓶中，用乙嘴准确释释至各种孕激素氛代内标物的液度为100ug/L..此中间液可在一20℃以下避光存放3个月。5.13.5混合标推工作液：混合标殖工作没根据需要侦用前用空白样品基质溶液配制。6仪器和设备
6，1高效被相色谱中联四级杆质谨仪或相当者：配有电喷雾离子源。6.2分析天平：感录0.1mg.0.01g。6.3旋转蒸发器。
6.4理相萃取装置。
6.5满合舒。
6.6商速冷冻离心机，100001/tnin。6,7移液,10 μL~100 μmL,100 μL~1 000 μl.。6.8 pHt.
6.9螺施益聚丙烯离心试管，50mL。6.10组织捣碎机
6.11均质器。
6.t2超声波仪。
6.13吹氮浓缩仪。
6.14恒温水浴。
6.15振荡器。
7测定步骤
7.1样品提取
称取试样3g精确到0.01g），置于50ml具螺漩盖聚丙烯离心管巾，依次加人100L混含氛代内标中问液，加人5ml.乙酸铵级冲液（5.9）.在均质器中均质305，加入60μl.β简越硫酸酯醇（5.8）.混勺30$，于40℃位温水浴振摇过夜然后放冷至室漏，加入乙晴20m，于涡旋混合器上混SN/T 1980—2007
合5 min.超声提取 10 min，然后 10 000 r/min，一10亡离速冷冻离心5 min,收集上清液于另一个于净的50ml，具螺旋盖离心管中，加人20ml.正已烷-二氮甲烷游液（5.10），振摇5min，前置后，溶液分成上中下三层，吸圾中间层（乙膊二氯甲烷）溶液于裂形蒸发瓶，剩余游校再用10mL乙腩重复上述提取步骤,合并中间层(乙睛一二策甲烷)溶液于梨形蒸发瓶中,10℃C减压浓缩至干，加入U.5 mL乙肺,5 mL水，混句，得净化。
7.2固相萃取净化
将C固相萃取挂(5.11)安装在固相萃取装置上,依次以5ml,甲醇利5 mL水进行活化,将样品提取液转移至C萃取杜,控制流速约每秒1滴。依次附 5 mIL.10%甲醇水溶波和5 rnL水淋洗柱子,淋洗液完全通过小杆后，加压至干，用6㎡L甲醇洗税，洗脱液收集到梨形蒸发瓶中，在40℃真究旋转蒸发至近下,再用氮气流吹干,加入0.5 ml.乙腈溶解残落，漓旋混合1 min+加0.5ml.水,混勾,过0,22 pm滤膜：供薇相色谱/串联质谱仪测定。7.3测定
7.3.1液相色谱条件免费标准下载网bzxz
a）色谱柱：Kromasil 60-5cN,5 μm,250 mmX4.6 mm(内径)或相当者：b）流动:乙+水(70+30)；
）流速：600 μL/min;
d）柱温：35℃：
e）进样量：20 ±L。
7.3.2质谱条件
a）离子化模式，地喷等；
b）扫描极性：正离了扫描；
c)）检测方式：多反应监测(MRM);d）分辨率：单位分辨率。
其他参考质谱条件参见附录A。
7.3.3高效液相色谱-质谱/质谱测定根试样中被测孕激素类药物残留的含量情说，选取响应值机近的标准上作液一起进行色谱分析。标滩工作液和持测液中九种孕激素的响应值均应在仪器线性响应范同内。对标推工作液和样液等体积参插进样进行测定。在上述色谐条仆下各种孕激素类药物的参考保留时间为17α-羟孕酮的6.2min烯丙孕素6.3min，炔诺孕酮6.4min，炔诺酮6.8min，美仑孕酮6.8min.甲地孕醒6.8min，孕酮6.8min，甲经孕酮6.9nin，氯地孕酮7.2irain。标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见附录B8结果计算和表述
8.1定性标准
8. 1. 1 保留时间
待测样品中化会物色讲峰的保留时间与标准溶液相比变化范用应在三2.5%之内。8.1.2信噪比
持测化合物的定性离子的亚构离了色谱峰的信噪比应大于或等于3(S/N孕3),定量离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于或等于10（S/N10)。8. 1. 3 定盘离子,定性离子及子离子丰度比每种化合物的质谱定性离了必须出现，至少应包括一个母离和两个子离子，而上同一检测批次对同一化合物，样品中月标化合物的满个丁离了的相对卡度比与浓度扣当的标推辫液相比，其允许俯差不超过表1规定的范剧。
SN/T 1980—2007
相刘离子丰/兴
允许的相对偏差/乐
8.2定量结果与表述
定性时相对离子丰度的最大允许偏差50
2-20-~50
>13~20
采用内标法定量，按式（1)计弹孕激素炎残留含望。计算结果需扣除白值。X=XcXA×AsXY×1000
CXA, XAsXm
式中：
X-一试样中待测组分的含最,单位为微克莓于克(μg/kg);一标准工作资液待测组分的浓度，单位为微克每升（\g/L）'si
标准工作溶液中内标物的浓度，单位为微克每升（cL）c\—测试波中内标物的浓度，单位为微克媒g/LAs一标准工作溶液小待测分的峰所我测试液中待测组分的峰面积；
标雅工作溶液中内标物的峰面积一测试液中内标物的峰而积；
V-.一样品定容体积，单位为毫巧(mnL)n1一一样品称样班，单位为克()测定低限和回收率
9.1测定低限
肌肉、肝、牛奶、鱼肉、鲜蜜：17-羟酮、烯学素、焕汁美仑草阳、中地孕霸、孕酮、中经孕酮、氯地李配均为1.00μg/kg:炔诺孕颜为2.00降/kg。9.2回收率
在不同的其质中，孕微素各化合物添加回收的试验数据见表2表2
药物名称
17a-羟孕的
烯丙索
缺诺孕的
炔诺酮
游抑浓度！
(μg/kg)
激素类残留堂测定的添加回收率试验数据血收率/嗮
专6. 4 -117
88. 3--111
77.7--112
76.5 --104
76. 5 -115
75, 3 ~103
80,8-~10s
88.0-~105
81. 0/-118
名证0--105
87. 7--97. 7
70, 6-~115
75.5--109
78. 3 ~133
80,0--151
88. 5--120
80. 0--- 95. 7
97. 6--155
87, 0--105
83. 7--13
79,--101
81.7--131
71, 5 ~110
80.0~-135
81,0~133
84.5--104
86. 3--130
88. 5 --1. 07
78. 0--105
85. 5 -~105
85.7-~153
87,7~1GS
83.0--119
87.3--105
75,8~~101
78.0--102
88. 3~-100
83. 5-~107
90. 6-~108
87. 0--105
75. 0~-105
85. 5 ~- 103
85, 5-109
84.5--109
86. 7--112
71. 5--102
83.5~-103
76. 6--112
0.89~-110
R6.5～110
药物名称
美仑孕
甲些孕酶
甲孕酷
氯地孕酮
添加浓度！
(pg/kg)
肝组织
78. 8-~ 112
76, 5---102
79. 4 ~- 101
82.0--103
83.3 --105
80. 0--1. 01
77. 2 -108
79.0-110gm
17.---110
38.7--108
表2（续）
取肉组织
79. 5--102
93. 5 ~105
89. 0--195
87.6--103
84.0--101
70.0--105
73. 3 -- 103
84.5--106
93,9--101
78:6~.103
79. 5 -:100
7623429722
81.5--102
谢收率/路
鱼组织
85.7--103
75. 4--100
79,0--98.0
89.0~99. 7
.80.0--163
79,5--103
.91.0--305
80_5--104
84,0-106
89.0--101
89. 0---95f 7
SN/T 1980--2007
68. 6~112
81. 5~111
84.5~2. 05
88.3--105
74.7--103
93.0--110
73.2--110
94.2--105
85.3--112
83.0---108
89,5-~105
78.7--110
79.0~-1.11
91. 5~105
80, 7~106
91.7-~107
78.9--106
SN/T 1980—2007
参考质谱条件：
附录A
（资料性附录）
AB14000型串联质谱仪参考质谱条件竹a）离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描：
检测方式：多反应监测(MRM)
分辨率：单位分辨率；
啦雾电(s5 000
雾化压力(GS1)：0.24MPa
气气压力(CUR):0.07 MPa;
辅斯气流速(GS2);0.55 MPa)
离了源温度(TEM):600℃
其他质谱参数见表A工
A，1九种孕激素及其内标物的主要参考质谱参数名称
17α-羟翠酮
垛内华素
炔诺率副
美仑孕酮
甲地予酮
羟孕酮
氯地孕酮
17c-羟华配
定性离子对
331.3/109.1
331.3/97.1
311.3/227.2
311.3/269.2
313.2/215.2
313.2/109.2
341.3/281.2
341. 3/109. 2
397.3/337.2
397.3/279.2
385.4/325,2
385.1/267.2
315. 2/97. 2
315. 2/109, 2
387.4/327.2
387.4/123. 2
405.3/345.2
405.3/309.2
339.3/100.1
339.3/113.1
324.3/100.1
324-3/113.1
定盈离子对
331,3/109,1
311.3/227.2
313.2/109.2
341.3/281.2
397.3/337.2
385. 4/325. 2
315.2/109.2
387.4/327.2
405.3/345,2
330.3/113,1
321.3/113.1
去懿电压
(DP>/V
碰掩气能尿
(CE)/V
碰撞空人电压
(EP}/T
1）非商业性声明：附录A所列参数是在ABI4000质谐仪完成的.此处列出的试验用仪器型号仪是为了提供参考不涉及商业月的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器：6
—r-羟商
(2)——烯丙孕素，
（3)—快诺李翻；
附录B
（资料性附录）
标准品的多反应监测(MRM)色谱图E. 17
一块诺的：
美仑升酮：
SN/T 1980—2007
(8)：甲羟孕酮；
氨地孕酮。
图B.1标准品（相当于5.Dμg/kg）的多反应监测（MRM)色谱图8
Ss/T1980—2007
17羟李-D8
标准品（相当于25.01g/kg）的多反应监测(MRM）色谱图图B.2
Foreword
Annex A and B of this standard are inforrmative anriexes.SN/T1980—2007
This standard was praposed by and was under the charge of China Naticnal Regulatory Commissionfor Certification and Accreditation.The standard was drafted by Shandang.Entry-Exit-lnspection-and.eyarantine Bureau of the People'sRepublic of China, Shenzhen Entrl-Exit Inspection and Quarantine Breau af the Peaple's Republic ofChina, Shanghal Entry-Exit Inspedtion and Quarantine Bureaul of 'the People's Republic of China andChinese Academy of Inspection arfd.Quarantire.The standard was mainly drafted by Lin Lirrfing, Zhang Hongwei, Yue Zhenfeng,Zhu Jian, PengTao, Cai Fa, Du Hengqing, Chen YongpingThis standard is a professional standard for entry-exit inspectian and quarantine promulgated for thefirst time.
SN/T 1980--2007
Determination of progestogens residues in food ofanimal origin for import and export-HPLC-MS/MS methodScope
This standard specifies the methods of sample preparation, determination and confimation by liquidchromatography-mass spectrometry of 9 progestogens residues of 17 a-hydroxyprogesterone, al.trenogest,norgestrel,norethisteronc,melengestrol,megestrol,progesterone,medroxyprogester-one and chlormadinone in foodstuffs of animal origin.This standard is applicable to the qualified and quantified determination of 9 progestogens residuesof 17a-hydroxyprogesterone, altrenogest, norgestrel, norethisterone, melengestrol, megestral,progesterone, medroxyprogesterone and chlormadinona in animal tiver, aninal muscie, aquaticproduct, honey and milk.
2Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, con-stitute provisions of this standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisionsof, any of these publications do not apply. However parties to agreements based on this standardare encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions af the normativedocumnents indicatedf below, For undated references, the latest edition of the normative documentreferred to applies.
GB/T 66821992Water foranafytical laboratoryuse-specification and testmethods3Samplepreparationand storage3, 1Requirement far sample preparationSample contamination or occurrence af changes in residue content must be avoided in the process afsample preparation.
3. 2Animal muscle, liver and aquatic productAbout 50o g representative edible samples should be taken from all samples, then grinded and blen-ded by a tissue blender to produce honogenous samples, and put in suitable clean containers. Afterbeing sealed and labeled,the samples should be stored atbelow -18c.10
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