【国家标准(GB)】 饲料中氯霉素的测定 高效液相色谱串联质谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T 211082007
饲料中氯霉素的测定
高效液相色谱串联质谱法
Determination of choramphenicol in fecds-Iligh performance liquid chromatography tandem mass spectometry2007-10-24发布
中华人民共和国国家质量监督检验检蒋总后中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准用中华人民共和国农业部提出。本标推由全国饲料工业标准化技术委员会归口GB/T21108—2007
本标推起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、国家饲料质量监督检验中心(北京）。
本标准十要起草人：赵根龙、高生、宋荣、张发旺：本标准首次发布。
http：/
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1范围
饲料中氯霉素的测定
高效液相色谱串联质谱法
本标推规定了测定饲料中氟霉素的商效液相色谱申联质谱法(LC/MS/MS),GB/T 21108—2007
本标推适用于配合饲料和预混合饲料中氯霉紊的测定,其最低定量限为 10 /kg，最低检测浓度为5 pg/kg。Www.bzxZ.net
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标的条款。死是注月期的引用文件，其随后所有的修敢单（不包括斯误的内容或餐订版均不适用于本标推，然施，鼓刷根据本标谁速成协设的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1--2005.ISO6497:2002,U)T)3原理
饲料中的氯霉紊用乙酸乙酯提最，取部分提敢液用氮气吹干。残渣溶于甲醇氟化钠溶液，用正己烷萃取除去脂溶性杂质。再将氣霉紫回提至乙酸乙酯，吹干。用乙水溶液溶解，过CI6小柱净化，最后用LC/MS/MS法分离检测和定量。4试剂与材料
除非另有规定，仪使用分析纯试剂。水为蒸馏水，色谱用水符合GB/T 6682的-级用水的规定。4.1乙腈：色谱纯。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙龄乙酯。
4.4正已烷
4.5三氧甲烷。
4.6乙腈溶液
乙睛溶液 I ;取 5. 0 mL乙腈加水 95 mL。4.6.1
4. 6. 2乙晴溶液 T :吸取Z睛 50 mL加水 50 mL,4.7氯化钠。
4.8氯化钠碎液:浓度为 40 g/L,称取 40.0 g氯化钠(4. 7)加水溶解定容商1 000 ml。。4.9氯化钠甲醇溶液：取200mL甲醇(4.2)加氯化钠溶液（4.8)800mL。4.10氯垂素标推品：纯度大于 98%。4.11氯霉素标准液
4.11.1标准备液：准确称取100mg士0.1mg氯需索标准品（4.10用乙睛溶解，定容到100mL，该液氮霉素浓度为1 g/mL，密封贮于冰箱内，有效期为一年。4.11,2标中间液1:吸取标准贮备较(4.11.1)5.00 mL,于 50 ml. 容量瓶内,用乙晴溶液且(4. 6.2)定容至50mL,该溶液氮素淤度为100 /mL,密封贮于冰箱内：有效期3个月。1
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GB/T21108—2007
4.11.3标准中间液Ⅱ：吸取标准中间液1（4.11.2）1.00mL于100mL容量瓶内，用乙清落液（4.6.2）定容至100mL，该溶液氧霉素浓度为1.0μg/mL，密封贮于冰箱内，有效期为3个月。4.11.4标准中间液Ⅱ吸取标准中问液Ⅱ（4.11.3）10.00mL于100mL容量瓶内，用乙睛溶液Ⅱ（4.6.2）定容至100mL。该溶液氧霉素浓度为100ng/mL，密封贮于冰箱内，有效期为7天。4.11.5标准工作溶液：用移液管分别吸取标准中问液Ⅲ（4.11.4）1、5、10、50mL于4个100mL容量瓶内，用乙腈溶液Ⅱ（4.6.2）定容至刻度。该溶液氯霉素浓度为1.0，5.0、10.50ng/mL。4.12Ca固相举取（SPE)小柱：载体200mg、承载液体体积3mL。5器
5. 1离心机：转速为4.000r/mi以上5.2
超声波提取器。
涡旋混合器。
密封盖塑料离心管
试样的制备
按GB/T1469
配各电喷雾肉子源（
夜相色谱事联质谱权
建取有代表性的实验室样品，用四分法缩分车约200g粉碎过0.45mm孔径磨口瓶中备用。
筛，混合均匀，装人
7分析步骤
7.1提取
称取一定量的
(5.4)加40.0ml
斗5g，预混合饲料g精饰至0.001g），置于50热塑料离心管内（配合饲料
min。放人超市支提取器中提取
封盖手揭旋提合器上混合2
爱七酯（4.3）盖好密封
20min，其间用手
取上清液20mL，
7.2净化
7.2.1液-液分配净
有次。将离心管取出，
M400omin高心分离min。用移液管置离心机上（5
加热器上用氮气吹至近于，待净化R
L分三次溶解或查（7.1)，均转移到向一个/10mL具塞试管内。用氟化钠甲醇溶液（
，放人离心机于1000r/min离心4min弃去上层正已烷，重复上还操加4mL正已烷，涡旋混
作一次。水相加乙酸乙酯8m
乙酸乙醛，水相置另一个5ml
，涡旋混合2min，放人高心机4e00r/m离心4min。吸取上层试管内，加乙酸乙酯（4.3)2L重复上述操作一次。吸取上层乙酸乙酯，置于上述同一个水相具案试管内，置加热幕上50℃下，用氮气吹天，用3mL乙浴液T（4.6.1）溶解，待SPE小柱净化。
7.2.2SPE柱净化
每一试样各准备一支C小柱（4.12），顺序用5mL甲醇，5mL三氯甲烷，5mL甲醇和10mL水预清洗Cla柱。将样液（7.2.1）过此小柱（流速<1mL/min），用5mL乙腈溶液I（4.6.1）淋洗，最后用3mL乙溶液Ⅱ（4.6.2）洗脱，收集洗脱液于10mL具塞试管内。洗脱液加5mL乙酸乙酯涡旋混合1min，2000/min离心，下层水相用乙酸乙酯重复举取一次，合并乙酸乙酯提取液于5mL具塞试管内。在加热器1（50℃C）用氮气吹干，用2mL乙睛溶液Ⅱ（4.6.2）溶解，调节试样溶液浓度，使上机浓度不高于100ng/mL。
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
色谱柱：C柱，柱长150mm，柱内径2.1mm，粒度3.5um或性能类似的分析柱，2
http：/
柱温：室温。
流动相组成：乙+水-30—70（V1+V）。流动相流速：250μL/min。
进样量：10μL。
7.3.2质谱条件
电喷雾离子源（ESI）负离子方式检测喷雾电压：3500V。
壳气流速：0.68L/min
精助气流速：3.6L/min。
毛细管温度：300℃。
母离子321，二级子商
为257152、121。碰撞电压如表
母离子
氧霉素的子离子及其碰撞电压
GB/T 21108—2007
碰撞压力/ev
7.3.3试样的
在上述仪
下，分别注
人标准工作液（411.5）和试样济液（7.2.2)10，以保留时间和二级子
作为定量子药子，并用氯零素标准工所
离子(m/2)257
121进行定性，其相对率度比见表2152
作液做单点或
准，以峰面
子离子
相对丰
结果计算与表
结果计算
试样中氯再素的食
比较进行定量计算。
氧霉素的子离子及相对丰度比
质量分数微克每千克（μg/kg）表示，单点校准时可用式（1）计算：S
P,xVXexVx7
试样溶液对应的色谱峰面和积响应值；Vi
加人定容液的体积，单位为毫升（ML）：氯素标准溶液的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）：氯享素标准溶液的进样体积，单位为微升（L）n
稀释倍数：
氯每素标准溶液对应的色谱峰面积响应值，试样质量，单位为克（g）；
V.—试样溶液的进样体积,单位为微升(μL)。多点校准时可用式（2）计算：
X_VxexVXn
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.....(2)
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式中：
Vi加人定容液的体积，单位为毫升(mL)Cr
标准曲线上查得的试样中氢毒素的浓度，单位为纳克每升（ng/mL)；V，-氯带素标准溶液的进样体积,单位为微升（rL)；-稀释倍数；
-试样质量，单位为克（g）
试样溶液的进样体积，单位为微升({L)，8.2结果表示
结果以平行测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。9重复性
在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于10%。http：/
附录A
【资料性附录】
氯霉素一级质谱图
图 A. 1 氨霉素级质谱图
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GB/T 21108-2007
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附录B
（资料性附录）
疯霉素特征离子色谱图
RT: 4. 18
AA:36612
A4:18660
RT- 4. 18
AA:16572
AA:1394
注：RT为保留时间，单位为分钟（ni)；AA为峰面积，图B1
m/z-151.5u-152.50
tz=120.50—121.50
氯医素特征离子色谱图
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