【农业行业标准(NY)】 添加剂预混合饲料中肌醇的测定

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1345—2007
添加剂预混合饲料中肌醇的测定Determination ofthe Inositol in Additive Premix2007-04-17发布
2007-07-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院饲料研究所。本标准主要起草人：石波、张萍、梁平、赵丙超、李秀波、刘一峰。http：//foodmafeNY/T1345—2007
1范围
添加剂预混合饲料中肌醇的测定NY/T1345—2007
本标准规定了以气相色谱法和离子色谱法测定水产添加剂预混合饲料中肌醇的含量。本标准适用于水产添加剂预混合饲料中肌醇含量的测定；也适用于其他添加了肌醇的添加剂预混合饲料。
气相色谱方法最低检测限为2ug；离子色谱法方法最低检测限为1ng。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3气相色谱法
3.1原理
试样用水在一定温度下振荡提取，过滤并定容。该提取液经烷基化衍生后，用气相色谱氢火焰检测器定性定量检测。
3.2试剂和材料
除特殊注明外，本法所用的试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中二级用水的规定。3.2.1二甲基甲酰胺（色谱纯）。3.2.2三甲基氯硅烷（色谱纯）。3.2.3六甲基二硅氨烷（色谱纯)。3.2.4正已烷。
3.2.5无水乙醇。
3.2.6无水硫酸钠。
3.2.7肌醇（标准品）：大于等于99%。3.2.8肌醇标准溶液：
3.2.8.1肌醇标准贮备液：准确称取已在105℃条件下烘至恒重的肌醇标准品0.05g（准确至0.0001g)，月去离子水溶解，并稀释定容至100mL，该标准储备液的浓度为500μg/mL。4℃冰箱贮存备用。有效期半年。
3.2.8.2肌醇标准工作液：分别吸取肌醇标准备液（3.2.8.1)0.0mL1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、10.0mL于100mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，配制成浓度为0.0μg/mL、5.00μgmL、10.00μg/mL、15.00ug/mL、20.0ug/mL、25.0g/mL50.0ug/ml的肌醇标准工作液。3.3仪器设备
3.3.1实验室常用设备。
3.3.2分析天平，感量0.0001g。3.3.3恒温水裕
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3.3.4旋涡混合器。
3.3.5烘箱，可控温度为105℃±1℃。3.3.6色谱仪：附氢火焰检测器的气相色谱仪，3.4试样制备
取有代表性的样品，用四分法缩减至约200g，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。3.5步骤
3.5.1试样溶液的制备
3.5.1.1提取：称取经105℃干燥至恒重的试样2g（精确至0.0002g），置于100mL容量瓶中，加水约70mL，混摇，在40℃水浴上加热10min提取，在旋涡混合器上振荡10min，冷却至室温，用水定容至100mL，中速滤纸过滤，吸取0.5mL滤液于试管中，加人1mL-2mL无水乙醇，100C水浴中浓缩至干。
3.5.1.2硅烷基化衍生：在浓缩至干的样品中加入2mL二甲基甲酰胺，于旋涡混合器上使之完全分散，再加入0.6mL六甲基二硅氨烷，0.3mL三甲基氯硅烷，旋涡混合器上混匀后密塞，80℃水浴保温反应20min，取出，冷却至室温。加人5mL去离子水，摇匀。准确加人3mL正已烷，旋涡混合器上充分振荡后室温下放置10min，吸取正已烷层，加人适量无水硫酸钠，轻轻振摇后，取适量上清液上机测定。3.5.2肌醇标准曲线的制备
分别移取肌醇标准工作液（3.2.8.2）10.0μg/ml、20.0pg/mL、30.0μg/m、40.0g/mL、50.0μg/mL和100.0μg/mL各0.02mL.0.04mL、0.06mL.0.08mL0.10mL和0.2mL，加人1mL~2mL无水乙醇，100℃水浴中浓缩至干。余下步骤同3.5.1.2硅烷基化衍生部分。3.5.3色谱条件
色谱柱：HP-5（交联5%苯甲基聚硅氧烷）长2.5m，内径0.32mm，粒度0.25μm的石英弹性毛细管柱。
气流速度：载气（Nz）5.3mL/min，尾吹气（N,）30mL/min，氢气30mL/min，空气400mL/min，分流比1:11。
温度：柱温190℃，检测器温度245℃，进样口温度245℃。检测器：氢火焰检测器。
进样量：1L。
3.6结果计算与表述
3.6.1计算公式
试样中肌醇的含量(x）以质量分数(mg/kg）表示，按式(1)计算。X=moxn
式中：
mo——试样色谱峰面积对应的肌醇的质量，单位为微克(ug)；m——所称量的试样质量，单位为克(g)；一稀释倍数
计算结果保留小数点后两位数字。3.7精密度
3.7.1重复性此内容来自标准下载网
在同一实验室、由同一操做人员在同一台仪器上完成的两个平行测定缅果，相对偏差不大于5%，以两个平行测定结果的算术平均值为测定结果。3.7.2再现性
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在不同的实验室、由不同的操做人员用不同的仪器设备完成的平行测定结果，相对偏差不大于10%
4离子色谱法
4.1方法原理
肌醇易溶于水，可直接用水浸提样品。鉴于肌醇分子具有电化学活泼性及在强碱溶液中呈离子化状态，对其可采用高效阴离子交换色谱分离一脉冲安培检测方法（HPAECPAD)进行测定。4.2试剂和材料
除特获注明外，本法所用的试剂购为分析纯，水符合GBT6682二级用水的规定。4.2.1氢氧化钠溶液：c（NaOH）=10mol/L，称取40.0g氢氧化钠在冷却状态下溶解定容至100mL。4.2.2流动相[c（NaOH）=0.6mol/L氢氧化钠溶液]：取60mL氢氧化钠溶液（4.2.1）加水稀释至1L.
4.2.3肌醇标准溶液：
4.2.3.1肌醇标准贮备溶液：准确称取在105℃条件下烘至恒重的肌醇标准品（含量≥99%）0.1g（精确至0.0001g），用去离子水溶解，并稀释至100mL。该溶液浓度为1mg/mL。4.2.3.2肌醇中间标准溶液：准确吸取肌醇标准贮备溶液（4.2.3.1)10mL稀释定容至100mL。该溶液浓度为100.0μg/mL。
4.2.3.3肌醇标准工作溶液：分别准确吸取肌醇中间标准溶液（4.2.3.2)0.5mL.1mL2mL.5mL、10mL、20mL稀释定容至100mL。配制成浓度分别为0.5μg/mL、1.0ug/mL、2.0μg/mL5.0μg/mL10.0μg/mL、20.0μg/mL的标准工作溶液。4.3仪器设备
实验室常用设备及：
4.3.1分析天平，感量0.0001g。4.3.2超声振荡器。
4.3.3离心机。
4.3.4色谱仪：具有梯度淋洗功能，配有脉冲安培电化学检测器。4.4试样制备
同3.4。
4.5步骤
4.5.1试样溶液的制备
称取经105℃烘至恒重的试样0.5g（精确至0.0002g），置于100mL离心管中，加人50mL去离子水，超声振荡2min~3min4000r/min下离心10min，取适量上清液经0.25um微膜过滤器过滤，上机测定。
4.5.2色谱条件
色谱柱：柱长250mm，内径4mm，装有乙烯基氯/二乙烯基（粒径7.5um）大孔季胺基胶乳阴离子交换树脂。
柱温：30℃。
流动相流速：0.4mL/min
检测器：脉冲安培电化学检测器，测量电极Au.参比电极Ag/AgCl。进样量：20μL。
4.6结果计算与表述
NY/T1345-—2007
4.6.1计算公式
试样中肌醇的含量X，以质量分数(mg/kg）表示，按式(2)计算X=
式中：
C——标准工作液中肌醇浓度，单位为微克每毫升(ug/mL)；V试样提取液的体积，单位为毫升(mL)：n1—稀释倍数；
m1—所称量的试样的质量，单位为克（g)。4.7精密度
4.7.1重复性
在同一实验室，由同一操做人员在同一台仪器上完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于5%，以两个平行测定结果的算术平均值为测定结果。4.7.2再现性
在不同的实验室，由不同的操做人员用不同的仪器设备完成的测定结果，相对偏差不大于10%，r品伴网http//foodmafenet
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