【国家标准(GB)】 鱼和虾中有毒生物胺的测定 液相色谱-紫外检测法

1范围
鱼和虾中有毒生物胺的测定
液相色谱-紫外检测法
G1/T 20768--2006
本标准规定了血和虾中苯乙胺，腐胺、户晚组胺意鱼胺、酪胺和亚精胺的液柜色谱-紫外检测法，本标准适用于值和郎中获艺胺露、胺，经胺、章值被酸胺和亚精胺的测定。本标准的方法检出限：腐账亚精胺、户赔。级题髓胺、章鱼胺乙胺均为50mg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标法的引用丽成为本标准的条款。无展注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括误的内)设修科是否可使用这些文浒的最新版在GB/T6379训量方离
(CB/T 6379. 1 /2004.1SO 572)GB/T 6370 2
性与再现性的攀
法(GB/T
析实验家用
G3/T 662
3原趣
试样中的生物度用高氛政
定垫：
4试剂和树料
除有说明外，敲康试剂均
4.1甲醇：色谱纯
4.2乙腩：色谱纯。
酮：色谱纯。
确度(正确度剪
200405
丹氛(dansylchlorde统度99.0%
酸氢钠，
商氯酸。
氢化。
氧氧化铵：25%~28%。
乙酸铵。
.鼓慰根据求标准达成协议的各方郁究爆新版本适用尽标证。
穿度）第部分：总则与定义
察2部泵：确是标准测逐方法亚复DT)
19921neq Igo 3686:1987)
液相迫谱-燃外链测器检测，外标法级水
高氮酸游液：0.411ol/L，堡取24m[.高氮酸（4.6)，用水稀释到L4.10
氢氧化钠溶液：2mol/L。称取4.0g氮氧化钠（4.7)，用水溶解片定容至50m-饱和碳酸氢钠溶液。
月酰氮溶液：10mg/mL.称取020g丹酰氧（4.4），用丙翻溶解并定容至20mL。4.13
4.14标准物质：盐酸举乙胺（C,H.CH.CH:NH，HC1.分子盘为157.$4.纯度三98%），盐酸腐胺［[NHz（CH.）NH·2HICI,分子量为16.07，纯度298%，盐酸尸胺［NH，（CH，>NH，2HC，分子1
GB/T 20768--2006
量为175.10+纯度>98.0%1，盐截组胺（C,H,N：211CI,分子量为184.07，纯度≥99.0%）盐酸章鱼胺［H0C.HCH（CH，NH)0H·HC1，分子量为189.64，纯度≥95%，盐酸酪胺（H0CHCH2CHNH2，ICI，分子量为173.64，纯度≥99.0%），盐酸亚精胺[NH.(CH，NH(CH.）NH，3HCl,分了量为254.63,纯度299.5%]4.15混合标雅储备游液：1.0g/n1L。分别称取整酸琴乙胺、趾酸腐胺、盐酸户胺盐腰组胺、盐酸章色胺、就酸胺和盐酸亚精胺（4.14)标准物质13.01rmg、18.29mg.17.15mg、16.57mg.12.88.mg、12.66mg和17.55mg于10mL容量瓶巾，用水浴解并定容至度，得到游离混含标准储备辫液1.0mg/ml..混合标准储备落液于4C保存，可使用3个月。4.16混合标准工作溶液：根据帮要，取适量混合标准端备溶液（4.15），用水稀释至所需浓度。4.17滤膜：0.45 μm。
5仪器
5.1液相色增仪：配有紫外检测器，5.2液体混匀需。
5.3均质机。
5.4离心机：最离转速5000/inin。5.5移器，0μL～100和100L-1000μL6试样的制备与保存
6.1试样的制备
玻样品约500用组织粉降机粉碎，装人洁净容端作为试样，密封，并标明标记。6.2试样的保存
将试伴于一18℃冰箱中保疗。
7测定步骤
2.1提取
称取2g试样，精确至0.01g置于50mL离心管中，加人10mL0.4mo1/L高筑溶液（4.10），均质】urin，于3c00r/min离心10min.上清液移人25mL棕色容量瓶中。沉淀物用10ml,0.o1/L高氯酸溶液重泛提圾一次，于3000r/min离心10mie，合并上清液于上述释盘据中，用0.4mol/1.高氣酸溶被定容垒刻度。
7.2衍生
移取上述提取（7.1)1.0ml，放人5ml.容量瓶中，依次加入100μl.2mol/L氮氧化钠滚液（4.11)、300μL饱和磁氢钠溶液（4.12)和2mL10m%/mL丹酰飘溶液（4.13），盖塞，于40C避光反应45min。反应完毕后，加入100μl.氢氧化铵（4.8)，静置3min，用艺腈（4.2)定穿至刻度，振荡混每，敢适献的溶液通过滤膜（4，17)后，供波相色谱测定。混合标准工作溶液衍生：取逅量混合标准工作溶液于5mL容量液中，加入300L饱和碳酸氢钩落液和2ml.10mg/mL丹酰溶液，盖塞，于40℃避光反应45mim。反应完毕后，加人100mL氢氧化铵：置30min，用艺躺定容到5.00mL，振葛勾，取适量的溶液通过滤膜。7.3谢定
7.3.1液拓色请条件
a）色谱柱：KromasilCir，5μm.250mmX4.Smm(内格）或相当者。b)
柱瘟：35℃.
流动相：A：0.01mol/L乙酸缕：B：水+乙脑（10+00)含0.01mol/LZ酸饺。梯度洗脱条件见表1。
时间/min
流速/(ml./min)
d）检测波长：254nm，
进样些10M.。
7.3.2色谱测定
梯度洗脱条件
A:0, 01 nol/L
乙酸铵/《%）
GR/T20768--2006
！B：水+乙踏(10+90)含0.01mo1/艺酸《）
用混合标准工作溶被（7.2)分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作山线。用标准工作非对群品进行定量，样品溶液中七种生物胺的响应值均应在仪密诞定的线性范围内。在上述色谱条件下，七种生物胺标准物质的液相包谱图参见图A。。7.4平行试验
按以上步骤，对间试样逊行平行试验测定。7.5回收率试验
阴性样品中添加标温落液，按7.1一7.2换作，测定后计算伴品添加的尚收率。8结果计算
结界按式(1)计算：
武中：
X-试样户被测组分含量，单位为毫克每下克（ing/kg）：c---从标准工作帖线得到的试样溶被中被测组分的浓度，单位为微克每窘升（ug/ml)；V.试伴液定容体积.单位为离升（mL)摄终试样溶波所代裘的试样质量，单位为克（）。9精密度
本标雅的精密度数据是按照GB/T6379.和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的试信度米计算。
在重复性试验条件下，获得的两次狐立测试结果的绝对差值不超过重复性限，试样中被测物的含最范围及重复性方程现表2～~表4。表2虾中七种生物胺的含范闺及重复性和再现性方程化台物名称
含趾范国/（mg/kg）
GD～ECO
$0~500
50~-500
重爱性限
7-0.0529--8.23
7=0. 112 5n+0, 802
再现性限R
R0. 181n0.954
R---0,245 8m
G3/T20768---2006
化合物名秘
帝鱼嵌
亚精胺
含址范/（nz/kg）
50--500
50--500
50-~500
注；m为两次测定结果的弹术平均他。袭2（续）
重笈性服，
7-= 0. 148 3zn --4. 184
-- 0. 126zn 1- 3. 232www.bzxz.net
r . 222 2zm
# -0. 152 4z+1. 389
再现性限
R=0.249 8m
R-0.319 2m
R=0.373 4m
R=0.327 8m
表3黄菇鱼中七种生衡胺的含墨范国及薰复性和再现性方程化合物名称
莱艺峨
罩负胺
菲稀胺
含整范组/(mg/)
302 500
50--800
50-~600
注：m为简次测学结果的算术平
量滋/（m
化合购名称
章自胺
亚器嵌
50~-5co
50--500
50--500
50--500
60--500
注：1为两氏测定结果的然柔乱的值重复性限，
o.1286m13.50
T=0. 132 8m-+ 4. 745
0,189 Gm+0
强复性限版
1047nt
r=0. 154 1r
再琥丝限R
:R-0.307 3m
R-0. 328 5m
R-030t5m
R=0. 374 6m
R=0.140 3m+0.8742
濮和再现性方程
再现限#
R=0.223 4m
R0.231 3mm
R-003018品
如果俩次测定值的差值趣过重复限应含弃试验黏果并量新完哦两次单个试验的测定：9.2再现性
在再现性被验条件下，获得的两恢痤噬试结果的绝对達值不超过再现性限R，试样中被测物的含量范围及再现性方程见表2～裘4。附录A
(资料性附录）
七种生物胺标准物质衍生物色谱图七种生物胺标准物质衍生物的包谱图，见图A.1。0.20
0. 00 2. oano
装艺骏：
2--宽胺
户哦：
4-组胺;
5鱼度
一醛殿；
业胺。
GB/T 20768—2006
ao 26.nn28.8n 30.od 32.00 ±4.00min
CB/T20768--2006
附录B
(资料性附录）
回收率
本方法中七种生物胺添加浓度及其苹均回收率的试验数据，见表B.1。衰B.1七种生物胺添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称
恭乙殿
章负胺
亚豁胺
添加浓度/（ng/kg）
平均国收率（6）
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