【国家标准(GB)】 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-紫外检测法

GB/T20764--2006
本标准修改采用AOAC标准995.09《可食动物组织中工零紫、西环素、金蛋案残留测定一液相色谱法》，修订的主要内容是C:周相举最柱改为QasisHLB固相萃取柱：淋洗波由甲醇改为乙酸乙酯：
增加了羧酸型阳离子交换柱涤化；增加了测定品种。
本标雅的附录A和附录B为资料性附录。本标准出中华人民共和国察皇岛出人镜检验检疫局提出本标摊由中华人民共和国国家质壁监督检验检疫总局口。本标疆起革单位：中华人房其和回桑息歸出人镜验检局。本标淮正要起草人：妮国考、当离忠、右玉秋，张进然，范春林、李学限，刘水明、改光猴，本标推亲首次发布的国家称撤。1范圈
可食动物肌肉中土零素、泗环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法
GB/T 20764—2006
本标准规定丫牛肉、羊肉、猪肉鸡肉和兔肉中土露紫、西环索、余藓素、弧力等紫残留量液相色谱g
紫外检测法：
本标准适附于牛肉、羊肉，猪肉，鸡肉和免肉中土晖紊、西环素，金释索、强力霖残留量的测定。本标准的打法检出限，手链款、四环素、金解索、强力架紧均为0.005mg/kg、规范性引用文件
下列文件中的条款避过本标镇www.bzxz.net
的修改单（不包新爆的内容)或
是香订使用这些及件销最新版
测盘方法
GB/T 637&
(GB/T 6379.
GB/TG31
性导再现性的素
G13/8682
3原遵
SO5723
测风方法
H法IGBT
寻新实验穿户
用 0. 1 malk
MEDTA-N
素残留·提圾液蜜
后，上
色谱-紫外检测器测定外标法定
4试剂和材料
期的旗
扭确度（正
2004,ISO5725-2.1
凡是注包期的用文件，其随后所有支励根据获标推达或协议的务方研究新版本适妞于春标雅。
战密度）
第1部分：总厕可定义
第2部分确定标准测量方法重复
1992.neg 15 3696:1087)
提政间食动物航肉巾四环累族抗生驻和发酸型阳离子变换柱净化，液相除另有说明外，所净试剂
燃分析纯，水GB/T6682规定的产级水4.1甲醇:色谱纯。
4.2乙腈：色谱纯。
4.3乙酸Z酷：色谱纯。
4.4磷酸氢二钠：优级纯，
4. 5 柠橼酸(CH, O, H,O)。
乙二胺乙二钠(NEDTA·2H,O)。
4.7草酸。
4.8磷龄氧二钠溶波：0.2mol/L。称取28.41亮磷酸氧二钠(4.4),用水溶解，定容室000mL。4.9柠蒙酸溶液：0.1.mo1/L。称取21.01柠檬酸（4.5）用水溶解，定容至1000mL.。4.10Mcllvaine缓冲溶波：将1000ml.0.1mol/L柠檬酸率液（4.9）与25mL0.2mo1/L磷酸氧二钠溶液（4.8)混合，必要时用NaCH或HCl调pH=4.0士0.5。4.11Na.EDTA-Mellvaine缓冲溶液：C.1mal/L。称取60.5g乙二胺四Z散二钠（4.6）放人1625mLGB/T 20764-—2006
Melivaine缓溶波（1.l0)中，使其溶解，摇勾。4. 12甲-水（1+19):取5 mL 醇(4. 1)与 95 mL水混合。4.13流动相：乙腾+甲醇+0.01mol/L草酸溶液（2+7+7)。4.14上避瓷，国坏紧，金氢紫、强力素标推物质，纯度学95不：4.15土霉索、四环素、金霖索、强力露索标推僧备溶液：0.1tmg/mL。准确称取适量的土露紫、叫环蔡，金紫，强对每察标准数质（4.14），分别用甲醇距戒0.1mg/mL的标泄储备腋。谐备于一18存
4，15土霉素固环索，金蕊紫强片聋素混合标推工作潜液：需要用流劲相称土蒸，四环素，金篇索、强力等案释成5ng/mL,[0 ng/mL、50ng/ml、1u0 ng/nl.200 g/m不同浓度的混合标准工作溶没，混合标雅工作溶液当天配。4.170asis HLB质相效致或拥当者,500 1mg,6 mL。使用前分用 5 ml.甲醇和 10 ml.水预处理保特载体滞润。
4.18阳离了交换桂：酸蔽型,600 mg,3 mJ。使期前用5m!.乙题乙预处现,保持柱体凝清，5仪器
液相色谱议：有紫外检测器。
分新天平，感量0.1，0.018
液体混帮。
留翠致置，
液器：50mL
商速冷冻率心机：最大转速1300f r/min.5.7
数变格品管：5mL，精度为0.1mL。5.8
真空系：真空度应达纠80ka
5. 9娠伤帮。
5.10平底烧瓶：100 mL
5.11 II计:量精度±0.02。
6试样的制备与保荐
6.1试样的制备
从全部样品中取脂有代装性样品药1k，充分批碎，混匀，均分戒两份，分剃装人洁静容器内。密谢作为试样，标明标记。在抑样和制群的操作过程小，成所静品受到污染或发生残留物含的变化。6.2试样保存
将试样于-18℃拎冻保存。
7测定步骤
7.1提取
称最 6 g 试样，精德到 0. 01 g，置于 50 ml具塞聚丙烯离心管.加人 30 ml.0.1 mal/LNaFDTA-Mrllvainc缓种溶液(pl=4)（4.11).于液体混勾器上快逆混合1 min.再用振荡器振10min，以10000/min离心10min，上清波倒人另一离心管中，残渣中享加入20mL级冲溶液，重复提取次，合并上消液。
7.2净化
将上清液(7.1)懈入下接OasisHI.B固相萃取柱(4.17)的液器中，上消液以≤≥3ml./min的流遮通过固相萃柱，筱上液完全流出后.用5 mL甲醇十水(4.12)洗桂奔去全部流出液。在65kPa的2
G3/T20764—2006
负压下，减压抽下40ni，最后用15ml乙酸乙醋（4.3)洗脱，收您选脱波于100mL乎底烧瓶中。将上述洗脱激在减压情况下以≤:3mL/mim的流速通过羧酸型阳离了交换柱（4.18），待洗脱液全部流出后，用5ml.甲醇（4.1）洗柱：弃去全部流出液。在65kP：负压下，减压排干5min，再用4mL流动相(4.13)洗脱，改集洗脱液于5mL.样品誉中，定容至4mL,供波相色潜-紫外检测器测定。7.3测定
7.3.1液相色谱条件
a）色谐柱：MightsilRP-18GP,3μm150mm×4,6mtu或相当者；5）流动相：乙腈+甲障+0.03ma1/L草酸溶液（2+1+7)流速：0.5mL/min；
柱温：25℃：
检测波长：35011n：
进祥录：60。
7.3.2液相色谱测定
将混合标随工作浴液（1，16)分别进样，以浓度为横坐标，峰国积为纵垒标-绘制标癌工作曲线，用标准工作线对样品选行定量·样品落液中土等紫，测坏素、金鑫素、强力解素的响应值均应在仪器测定的线性范間内。在上透色谱条件下，土等、阳环素，金露素、强力露索的参考保留时间泌裴。上额素，圆环素、金释素，强力游紫标推物质液相色谱图参见图A.1。表1土霉素、四环素、金案、强力霉素参考保留时间药名薇
四环紫
余薇素
强力等款
7.4平行试验
接以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，7.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤尚时完成空向诚验。8结累计算
结果按式(1)计算：
V1 000
X—试样中被测组分残留最，单位为意克每于克（mg/kg）保时间/rain
一从标准工作曲线得剃的被测组分溶液浓度，单位为微克每壁升（u/nL）；V—试样溶液定容体积，单位为升（tnL）：n一试样密液所代表试样的质望，单位为克（。往：计算结果应和除空自佳。
9精密度
本标准的精密度数帮是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，H重复性和再现性的值以95%的可倍度来计算。
GB/T 20764--2006
9. 1盈复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结鼎的绝对差值不超过熏友性限？，动物肌肉中七素、四环索，金素强力素含邀范及渠复性力程见表2，表2含殿范围及翼复性和菌现性方强药物名称
土霉察
四环亲
含盐国/（mg/kg）
0. 005--0. 100
0.006--0. 100
0. 005 --0. 100
2. 006--0. 100
注：机为两次测定绪果的宽术平的值，歪复性限，
1g---0. 873 8lgm-- 0, 930 2
1gr-0.872 6lgm--0.886 2
lerxbsalQ7lgm0. 772 5
Igrm0, 921 8lgmt
再现科限R
gR=0, 932 21gm—0. 761 3
IgR=0, 950 4lgm—0. 813 5
JRm0,80111gm—0.3712
1gR-=0, 876 1l0. 335 0
如果举值超过量复性限，正食读验结果并重新完成两次单介试验的测定。9.2蒋现
在再现性条件下欢得的顾饮独立环紫、金露素、强力雷茶的奇望范剧果的绝对
真不超过而边性限R，动物腻肉下上馨絮，凹附录A
（资料性附录）
标准物质色谱图
土霉素、四环素、金需素、强力霉素标准物质液柜色谱图，见图A，1，0.05
0. 心03 5 -
0. 003 0 -
0. 092 5 3
GE/T20764-2006
液相色谱医
GB/207642008
附录B
（资料性附录）
回收率
本方法中土索、四环紫、金等索、强力馨案添加浓度及其回收率的试验数据，见表，1。表B.1土琴素、四环素，金馨素、强力紊添加浓度及其回收率的试验数据药物名称
让辣紫
四环素
强打翠露
添加浓度/(mg.kg)
回收举/(流）
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