【国家标准(GB)】 饲料中甲基睾丸酮的测定 高效液相色谱串联质谱法

cs 65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T22260—2008
饲料中甲基辜丸酮的测定
高效液相色谱串联质谱法
Determination of mcthyltestosterone in feeds-High performance liquid chromatography landem mass spectrometry2008-08-01发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数码防伪
中国国家标准化管理委员会
2008-11-01实施
本标滩的附录A为资料性附录。
本标准由全国饲料工业标准化术委员会提出并归口，GB/T22260—2008
本标准起草单位：中国农业科学院衣业质量标耀与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心(北京。
本标罹工要起草人：赵根龙、苏晓鸥、苏淑清、孙志文、索德成，1范围
饲料中甲基睾丸酮的测定
高效液相色谱串联质谱法
GB/T 22260—2008
本标推规定了以高效液相色谱出联质谱法(LC/MS/MS)测定饲料中甲基翠丸酮含量的方法、本标准适用配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料巾甲基罩丸酮的测定.配合饲料，浓缩货料、添加剂被混合料的定量根为10μg/kg。2规范性引用文件
下列文件下的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是流期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用下木标推，然而，坡励根据木标雅达成协议的各方研究是否使用这些文件的晟新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用十本标准，GB/T6682分析实验室用水规格利试验方法（G3/T6682~1992,nc4ISO3695：1987)(13/T20195动物例料试样的制备3原理
码料样品中的川基翠丸酮以甲醇溶液超市提取.提取液离心后经（固相举取栏净化，以甲醇洗脱用高效液相色谱中联质谱仪、电喷雾止离子方式进行测定。4试剂和材料
除特殊注明外，本标准所用的试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水符合G13/16682一级用水的规定。
4.1P醇,色谱纯，
4.2醇溶澈I分别用量筒量收 500 ㎡1.甲醇(4.1)和500ml水,泥匀。4.3甲醇溶液1：分别用量筒量取2001r:L.甲醇(4.1)利800mL水，泥匀。4.4甲基睾酮标雅品：纯度97~103%，4.5中基睾丸酶标准溶液
4.5. 1甲基睾丸酮标准储备液:准确称取中基睾丸酮标准品(4. 4)0. 0s 0 g,置于 50 rmL容量版中,用醇(4.1)溶解并定容至核度·探匀，其浓度为1g/mL，贮于4“～6C冰箱中，有效期三个月。4.5.2甲基案丸酮标准1作液：雅确吸取甲基案丸酮标准储备液(1,5.1)5.00mL,置于E0 ml.容量瓶中,用甲醇（4.1)游解并定容至刻度.摇勾，其浓度为100\g/mL。再以此稀释液配置10μ/irl、1g/L、100 g/mL、10 ag/rL的标准1.作液。有效期·-个4.6C固相萃取杜：载体i)mg:承裁叛体积3ml.。5仪器
5.1实验室常用仪器、设备。
5.2分析大平：感量为0.000 1g和 0.001 g各台。5.3超声水浴，
5.4离心机：4000r/min~5000r/miz。1
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固相萃取装置。
5.6配备电喷雾离子源(ES1)的液相色谱联质谱仪。5.7而控温C℃～5℃氮吹装置。
6试样制备
按照GB/T 2C195制备样品，全部通过 0.28 mm孔筛，混勾，装入密闭容器中：避光低温保存，备用。
7分析步骤
7.1提取
称取饲料样品 5 g(准确率 0.001 g),置于:1C0 L离心管中,难确加入提取溶剂(4.2)50).00 m,加寒，充分摇动|min,再置超声水浴中超声提取20 min,其间充分摇动两次。取出.所了离心机上5o r/tin离心10 min
7.2净化
分别用 3 mlL 甲醇,3 ml. 水活化固相萃取柱(4. 6),确移取 5 ml 离心液(7. 1)分次上柱:挖制过柱速度在 1 rril/rair 以内。再用 3 mL水和 3 mL 中醇溶液(4. 3)洗涤固相举取柱,抽近干后用甲醇(1. 1)2 ml. 洗脱。在氮吹装置(:. 7)上 40 ℃下用氮气吹干。准确加入 2 mL 甲醇(4. 1),涡旋振荡1in,过0.45 滤膜，机测定，
7.3测定
7. 3. 1 液相色谱条件
色谱样:(x柱,柱长150 trm,柱内径2. 1 mm,粒度3. 5 μm或性能类似的分析杜，柱温：室温。
流动相组成:甲醇十0.1头乙酸溶液=80-20(V,+V）。流动相流速：300/min.
进样量：20 μl.。
7.3. 2质谱条件
心喷雾离子源(ESI)止离子方式捡测，喷雾电压:5 C09 V
壳气流速：0.2h1/mng
辅斯流速:6. 9 I./min
毛细管温度：310 。
母离子 303，—级子离子为285267。碰撞能最见表」。
表 1甲基睾丸酮母离子及子离子碰撞能量表母离子
其柏对丰度比见表2，
了离子(m'z)
和对度/%
于离子
甲基睾丸酮的子离子及相对丰度比285
碰撞能量/eV
7. 3. 3 定性定量测定
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适量出 7.,2获得的样品制备波和相应浓度的甲基要丸酮标准1. 作液(1. 5,2)迹行测定,以保留时间和二级于离子 m/z 28:、267进行定性。定性方法：试样保留时间与标准品的相对偏差不人于15%,特征离了半度与标准品相差不人于20片，定量方法：以一级了离子 m/z285、267蜂面积之利进行单点或多点正定量
结果计算与表述
8. 1结果计算
甲基睾丸酬在饲料中的质量分数X，以微克每千克(ug/kg)表示，可用式(1)计算：X
式中：
选择性了离了色谱峰对应的甲基睾丸谢质量，单位为纳克（g)；试样质量，单做为克（g），
n——稀释倍数。
8.2结果表示
平行测定结果用算术忙均值表，保留三位有效数字。9重复性
在同一实验室由间一燥作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于10%， 1)
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附录AWww.bzxZ.net
（资料性附录
甲基睾丸酮标准图谱
Ic ng/ml.甲基案丸酮标准图谱必图 A.1,A1
保密 2. 6
！：615541
T/uur:
倍噪比：29W
图 A、1100 ng/ml.甲基睾丸酮标准图谱3.
甲基睾丸酮一级质谱图见图 A. 210
340.33359.26
甲基睾丸酮一级质谱图
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GB/T 22260-2008
中华人民共和國
国家标准
饲料中甲基睾丸酮的测定
高效液相色谱串联质谱法
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并本 885×1230 1/15
2C08年9月第版
印张5.75
宁数 11 千学
29C8年9月第一次印刷
书号：15#66 -1-33921
定价14.00元
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