【国家标准(GB)】 饲料中土霉素的测定 高效液相色谱法

ICS 65. 120
中华人民共和国国家标准wwW.bzxz.Net
GB/T22259—2008
饲料中土霉素的测定
高效液相色谱法
Determination of oxytetracycline in feeds-High performance liquid chromatography2008-08-01发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数防伪
中国国家标准化管理委员会
2008-11-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（南京）。本标准主要起草人：来慧敏、耿士伟、冯三令、储瑞武、玛群科、贾书静。GB/T22259—200B
1范围
饲料中士霉素的测定
高效液相色谱法
本标准规定了饲料中土霉素含量的高效液相色谱测定方法GB/T 22259—2008
本标准适用于配合饲料、浓蜡饲料、添加剂预混合饲料中土舞素的测定，检山限为0.5 xg/kg，定量限为2mg/kg：
2规范性引用文件
下列文件中的条影通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其殖后所有的修改单（不包括期误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文任的最新版本凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。实验室用水规格和试验方法（GB/T6682GB/T 6682
饲料采样
GB/T 14699. 1
GB/T 201950动物饲料
试样的制备
3原理
992,neqsO3696:1987)
经酸性溶液提取后，注人高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用崇外检测器试样中土套
（或二极管阵列验测器）检测，外标法计算土赛素的含量。试剂和溶液
除特殊说明外配用试剂均为分析纯，水为蒸留水，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定。4.1
盐酸：优级纯
盐酸溶液（0.05mL)：取盐酸（4.1)4.5N
乙腈：色谱纯。
磷酸二氢钠。
磷酸。
L，溶解于1000tL水中。
磷酸盐缓冲液;取磷酸二氢钠(4. 4)1.2 g.加水使济解并稀释至1 000 mL,用磷酸(4.5)调pH值至3.50.摇勾，过滤。
4.7上霉素标准品：纯度应大于97.0%。4.8土素标准贮备液：准确称取已知纯度的上覆素标推品 20 mg，置于 100 mL棕色穿量瓶中，用盐酸溶液(4.2)溶解定容,摇勾,其浓度为 0.2 mg/ tmL。贮存于 4 ℃冰箱中,溶液有效期 1个月。4.9土素标准曲线工作液：分别准确移取标准贮备液(4.8)0.05、0.50、2.50.7.5012.5、25mL于100 mL棕色容量瓶中,用水定容至刻度。该标准系列中土霉素的相应浓度分别为 0.1.1、5、15、25、50ug/mL，现配现用
5仪器和设备
5. 1分析天乎：感量0.0001 多。5.2振荡器。
CB/T 22259-2008
5.3超纯水处理器。
5.4高效液相色谱仪：紫外检测器（或二极管阵列检测器）。5.5 pH计。
5.60.45μm滤膜
6试样制备
6.1按GB/T14699.1采样。
6.2选取具有代表性的饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品。7分析步骤
7.1试样溶液的制备
称取试样适量(配合饲料 10 g、浓缩饲料 5 g、混料 1 g)精确至 1 tg。置于250 mL具塞形瓶中，准确加入100mL盐酸溶液（4.2），于振荡器上振荡提取10min，溶液用滤纸过滤或用盐酸溶液(4.2)作适当稀释，滤液过0.45μm滤膜(5.6),备用。7.2色谱条件
7.2.1色谱柱：C1a柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径为5m，或相当者。7.2.2柱温：室温。
7.2.3流动相：磷酸缓冲液（1.6）+乙腈=84+16，混匀，脱气。7.2.4流速：l.0 mL/min。
7.2.5检测器：紫外检测器（或二极管阵列检测器），检测波长353Ⅱm。7.2.6进样量：20μL。
7.3定量测定
按上述色谱条件，分别将七霉索标准曲线工作液（4.9)及试样溶液（7.1）上机测定，以单点或多点校谁，以色谱蜂面积积分值定量。8结果计算
试样中土素的含量(x)以质量分数(mg/kg)表示，按式(1)计算：X=ExV
X—试样中上霉素的含最，单位为毫克每千克（mg/kg)；C
试样液中土霉素的含量，单位为微克每毫升（μug/ml.)：m试样质量，单位为克（g);
V一样品的蒂释液总体积，单位为毫升（mL）结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9精密度
在重复性试验条件下两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。（）
（资料性附录）
土每素标准溶液图谱
土霉素标准溶液图谱(1 μg/mL)GB/T 22259-—2008
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