【国家标准(GB)】 饲料中维吉尼亚霉素的测定 高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T22261—2008
饲料中维吉尼亚霉素的测定
高效液相色谱法
Determination of virginiamycin in feeds-High performance liquid chromatography2008-08-01发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数码酷伪
中国国家标准化管理委员会
2008-11-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提并归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（南京）本标准主要起草人：冯三令、耿士伟、储瑙武、冯群科、贾书静。GB/T22261—2008
1范围
饲料中维吉尼亚霉素的测定
高效液相色谱法
本标准规定了饲料中维吉尼亚霉素含量的高效液相色谐测定方法。GB/T 22261—2008免费标准下载网bzxz
本标推适用于配合饲料、浓结饲料和添加剂颈混合饲料中维青尼业霉素含鼠的测定，检出限为0.5mg/kg，定量限为2mg/k
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括书误的内容）或修订版均不适用本标难，然而，鼓励根携本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本GB/T 6682
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分机实验室用水规格和试验方法（GB/T6682GB/T1469
饲料深样
S动物饲料
GB/T2019
3原理
试样的制备
992.neqs03596:1987)
范尼亚霉索用乙酸乙脂提取出来：提取液经硅胶柱和亲水亲脂平衡型固相萃敢柱净化，饲料中的维
在高效液相色谱仪（HPL.C）反相柱上分离，用紫外检测器（或一极管阵列检测器）在210nm波长处检测，根据维吉尼亚需素
M和S.峰面积加和值用外标法计算每料中维吉尼亚霉素的含量，4
试剂和溶液
除特殊说明外所角式剂均为分析纯，水为蒸增水，色谱用水符合CB/76682中一级用水规定。4.1
乙酸乙酯。
无水硫酸钳。
4.3正已烧。
4.4无水乙酸乙酯醋-正凹烷 将酸乙酯和正己烷按体积1+混合，通过无水硫酸钠脱水。4.5乙腈，
4.6甲醇。
4.7乙酸铵缓冲溶液（pH4.0）：0.05mmo1/L。称取3.85g无水乙酸铵，溶解于1000nL水中，用冰乙酸调节 pH 至 4. 0。
4.8甲醇-乙酸铵缓汀溶液：将甲醇和乙酸饺缓冲溶液（4.7)按1：3比例混合，摇匀。4. 940%甲醇-水溶液;将甲醇和水按 4—6 比例混合,摇匀。4.10乙腈：色谱纯,用于配制流动相。4.11 磷酸，
4.12流动相：乙十水十磷酸一400+600+1,混勾，用前脱气。4.13维吉尼亚霉素标准溶液
4. 13.1维吉尼亚霉素标准品：维吉尼亚霉素 M1和 S1总和不少于95. 0%4. 13.2
维吉尼亚霉素标准爬备液：准确称取维吉尼亚得素标推品（4.13.1)100mg，置于100mL棕色1
GB/T 22261—2008
最瓶中，用乙晴(4.5)溶解定容，摇匀，该溶液中维吉尼亚霉素浓度为1g/mL。忙存于4℃冰箱中，有效期三个月。
4.13.3维吉尼亚素标准系列工作液：准确吸取维吉尼亚素标推贮备液（4.13.2)置于棕色量瓶中，用流动相（1.12)配制成浓度分别为2、5、10、25、50、100g/mL的标准系列工作溶液。贮存于4℃冰箱中,有效期一周。
5仪器和设备
高效液相色谱仪配紫外检测器或二极管阵列检测器。分析天平-：感量0.1mg。
5.3涡旋混合器。
超声波水浴仪。
离心机：4 000 1/min
氮吹仪：可控温50℃。
5.7固相苯取柱
硅胶柱：690mg/3mL。
5.7.2亲水亲脂平衡型固相萃取柱：60mg/3mL。5.8固相萃取装置。
5.9 pH计，
5.100.45μm微孔滤膜。
6试样制备
6.1按GB/T14699.1采样。
6.2选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品。7测定步骤
7.1提取
称取试样适量（配合饲料、浓缩饲料2g~5名，预混料1多~2g）,精确至1mg，置于50mI.离心皙中，加2mL水·使试样充分润并混匀，加人20mI.乙酸乙酯（4.1)，加盖，置祸旋混合器1混匀后，置超声波水浴中超声提取30min。于离心机上以4000r/min离心10min。准确吸取10 mL1层乙酸乙酯清液于另一离心管中,加,人5g无水硫酸钠(4.2)和10 mL正已烷（4.3)，置涡旋混合器上充分混匀后，于离心机上以4000r/tin离心10min，上清液备用。7.2净化
用2.5mL.无水乙酸乙酯-正已烷（4.4)预淋洗活化硅胶柱（5.7.1)，将上清液（7.1)小心转移人硅胶柱内(保持过柱流速不超过2mL/min，且不得抽干）,用5mL无水乙酸乙酯-正已烷(4.4)洗涤离心管中无水硫酸钠,洗涤液一并转移人硅胶耗内,抽干,用2 mL乙睛(4. 5)淋洗硅胶柱,抽干。用1mL甲醇（4.6）和1mL乙酸铵缓冲溶液（4.7）预淋洗活化亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2),将抽十的硅胶柱安装在亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2)的.上面，用5mL甲醇-乙酸铵缓冲溶渡（4.8）淋洗硅胶柱，赫洗液正好通过亲水亲脂平衡型固相萃敢柱（5.7.2），保持过柱流速不超过2mL/min。淋洗完毕后，弃去硅胶柱，用5mL40%甲醇-水溶液（4,9）淋洗亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2)，弃去淋洗液。最后用5mI.甲醇（4.6)进行洗脱，收集洗脱液，于50℃氮吹仪上蒸发至干，用0.5mL~5mI.的流动相(4.12)溶解残渣，过0.45μm微孔滤膜，供上机测定。7.3色请条件
7.3.1色谱柱：C1，长150mm，内径46mm，粒径5um，或相当者。2
7.3.2柱温室温。
7.3.3流动相：同4.12。
7.3.4流速：1.0mL/min
7.3.5检测器：紫外检测器（或二极管阵列检测器），检测波长210nm。7.3.6进样体积：20L。
7.4定量测定
CB/T 22261--2008
按上述色谱条件，分别将维吉尼亚霉素标准系列工作液（4.13.3)及试样溶液（7.2）上机测定，根据维吉尼亚霉素M和S，峰面积加和值，用外标法定量。7.5结果计算
试样中维吉尼亚群素的含量(X)以质量分数(mg/kg)表示，按式(1)计算：X= xyixyixp
武中：
试样中维吉尼亚霉素的含量，单位为毫克每千克（IⅡ/g）；C
试样溶液中M,和S色谱峰面积加和值对应的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；V，一加人试样中的乙酸乙酯总体积,单位为毫升（mL)；Y3
最终漆解残渣用流动相的体积，单位为毫升（L)；维吉尼亚霉紫标准品含量，%，
试样质量，单位为克(g)；
V—移取的乙酸乙体积，单位为升（mL)。结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。8精密度
在重复性试验条件下两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。.( 1)
GB/T22261—-2008
GB/T22261-2008
图A，1
（资料性附录）
维吉尼亚囊素标准溶液图谱
维吉尼亚霉素标准溶液图谱（10μg/mL）909's1S
版权专有
慢权必究
书号：1550661-33926
定价：
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