【国家标准(GB)】 动物源性食品中多种B - 受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法

67.120.30
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quE-ei-ac-eC-ae-Craac-CEC-Neca-inikAoNiKAsaGB
中华人民共和国国家标准
GB/T22286—2008
动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定
液相色谱串联质谱法
Determination of β-agonists residues in foodstuff of animal origin-Liquid chromatography with tandem-mass spectrometric method2008-08-12发布
数码份
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-12-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。TKANKA=
qtE-i-ac-ec-ae-Ceraac-cEc-NecairikAoNrKAaGB/T 22286—2008
本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、上海市疾病预防控制中心、上海水产人学、中华人民共和国浦江出入境检验检疫。本标准主要起草人：郭德华、汪国权、金玉娥、李波、王锅昌、钟一亮、邓晓军、斯海彤、杨景贤。1
1范围
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quE-ei-aC-eC-ae-Craac-CEC-Neca-iniKAoNrKAaGB/T 22286—2008
动物源性食品中多种-受体激动剂残留量的测定、液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺(salbulariol)特布他殊（lerbulaline）塞曼特罗（cintal1crul），塞布特罗（cirrbulerol），莱克多巴胺（rectorr.parnine），克仑特罗（elenbulerol）浪布特罗（brambnlertl）苯氧内胺（isoxsuprine），马布特罗（mabuterol），马责特罗（mapenterol)、溴代克仑特罗（hrom-clilorlmerol)残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法本标准适用于猪肝和猪肉中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗，塞布待罗，莱克多巴胺、克仑特罗，溴布特罗、举氧丙酚胺、马布特罗、马特罗、溴代克仑特罗残留量的捡验。本方法中沙丁胺醇、特布他林、塞曼持罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗,漠布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马费特罗、代克仑特罗的检出限为0.5/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标能的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内窄)或修订版均不适用于本标准，然而,鼓励根据本标准达成协议的各方究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验力法（GB/T6682—2008,ISO3596：1987,MOD)3原理
试样中的残留物经露解，用高鼠酸调书H值，流蛋自后离心清液用异内草乙酸了摄宜用所离子交换柱净化·液相色增-串联质谱法测定，内标法定量。4试剂和材料
除另有规定外：所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682一级水的标准。4.1甲醇：液相色谱纯。
4.2 Z酸钠(CH,COONa · 3H2O)。4.30,2 rnol/L 乙酸钠缓冲液：称取13.i g乙酸钠,溶解于 500 ml. 水中,用适量乙酸调节 pH至5. 24.4高氯酸：70%～72%。
0.1 mal/1.高氧酸:移取 8.7mL高氯酸,用水稀释至 1000 mL。4.5
氢氧化钠。
10mo1/L氢氧氰化钠溶液：称取40g氢氧化钠，用适量水溶孵冷却后，用水稀释至100mL。饱和氯化钠溶液。
异丙醇乙酸乙酯：（G十4,体积比）。4.10甲酸水溶液：2%。
氨水甲醇漆液：5%。
4.120.1%甲酸水溶液-甲醇溶液：(95+5,体积比）。4.13β-萄糖醛武酶/芳基硫酸酯酶(3-Glucuronidase/arylsul[atase）：l0o00units/mg0asisMCX阳离于交换柱：60mg/3mL，使用前依次用3mLF醇和3mL水活化。4.14
注：Oasis Mcx阳离子交换柱是由Warcrs公司提供的产品的商品名，给出这一低息是为了方使本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品。CB/T 22286—2008
iKANrKAca-
quE-ei-aC-eC-ae-Craac-CEC-Neca-nikAoNiKAa4.15沙丁胺醇（C:AS:18559-94-9），特布他林半硫酸盐（CAS:23031-32-5）、塞曼特罗（CAS:54239-37-1）布特罗（CAS：54239-37-1）、莱克多巴盐酸盐（CAS：90274-24-1），克仑特罗盐酸盐（CAS：37148-27-9），溴布特罗（CAS：41937-02-1）、苯氧内酚胺盐酸盐（CAS：579-56-6）、马布特罗（CAS:54240-35-7）、马责特罗(CAS:95656-63-1)、溴代克仑特罗（CAS:37153-52-9)标准品：纯度大于98%。4.16标准传备溶液：准确称取适鼠的沙丁胺醇、特布他林，塞曼特罗，塞布特罗、莱克多巴胺，克仑特、溴布特罗，苯氧丙爵胺、马布特罗，马宽特罗、溴代克仑特罗标准品，用甲醇分别配制成100/rmL的标准备液，保存于18冰箱内，可使用！年。4.17混合标准诺备溶液1μg/mL）；分别准确吸取1.00ml,沙丁胺醇，特布他林、塞曼特罗，塞布特罗、莱克多巴胶、克仑特罗、澳布特罗、苯氟丙酚胺、马布特罗、马责特罗、漠代克仑特罗至1001ml.容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，一18℃避光保存。4.18同位素内标物：克仑特罗D9，沙丁腰醇-D3，纯度大于98%4.19同位素内标储备溶液准确除取适量的克仑特罗-D9,沙丁腰醇-D3,用甲醇配制成1001F/m1.的标准贮备液，保存于一180暂内可使用1年4.20同位素内标工作落液10ng/mL）：将上述同位素内标储备溶液用甲醇进行适当稀释。5仪器和设备
高效液相色谱事质谱联用仪：配有电喷雾离子谭（ESI)。均质器。
旋涡混合器。
离心机：5000m和15000t/min
氮吹仪。
水平振荡器
真空过柱装造口
超声波发生器S
6样品制备
称取2g（精确到0.0lg经够碎的样品于50ml.离心管巾，加人8mL乙酸钠缓冲液，充分混匀.再加s0μl.β-葡萄糖醛试酶/芳基旋酸酯酶，混勾后,37℃水浴水解12 h。添加100μl.10mg/ml.的内标工作液于待测样品中。切益置于水平振满器振荡15min，离心10min(5000r/min),取4mL上清液加入0. 1 mol/L高氟酸溶液5ml混合均勺用高氟酸调节p1H1值到1土0.35000r/min离心1Cmin后，将全部上清(约10 mL)转移到50mL离心管中,用10 mol/L的氢氧化钠溶被调节pH值到11。加人10 mL饱和氯化钠溶液和10㎡L异丙醇乙酸乙酯(行十4)混合溶液：充分提取，在5 000 r/min 下离心 10 min.
转移全部有机相，在40℃水浴下用氧气将其吹干。加人5mL乙酸钠缓冲液，超声混勾，使残湾充分溶解后备用。
6.2净化
将阳离了交换小柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱，依次用2mL水，2ml.2%甲酸水溶液和2ml.甲醇洗涤柱子并彻底抽于，最后用2㎡l.的5影氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。流速控制在:0.5ml.min。洗脱液在40C水浴下氮气吹干。证加入200叫l.0.1%甲酸/水-甲醇溶液（95十5),超声混勾。将溶液转侈到1. 5 rmL离心管中15000 =/min离心1umin.
上清液供液柜色谱串联质谱测定，液相串联质谱测定
液相色谱-串联质谱条件
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色谱柱：WaiersATLANTICSC柱,150mmx2.1mm(内径).粒度6μm:a）
流动相：A：0.1%甲酸/水，B.0.1%甲酸/乙晴，梯度淋洗见表1；表1梯度淋洗表
时间/nun
流速.0.2mLmin：
柱温：308
进择量剪：
离子源电喷雾（ESI)，正离于模式扫描方式多反应监测（MRM：
脱溶剂锥孔气，碰撑气均为高纯氟气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵做度达到检测要求；
毛细管电维孔电压、硅撞能量等电压值应优化至最优灵敏度，监测子蓝测离子见表2。
表2被测物的母离子和离子参数表被测物
沙丁胺醇
恭曼特罗
莱克多巴胺
澳代亮仑特罗
茉氧内酚胺
马贵特罗
沙丁胺醇-D3
母高子
子离子
601143
定量子离子
特布他林
赛布特爱
克仑特罗
溴布特罗
马布特罗
克仓特婴D9
母商子
子离子
定量子离子
让：方法中所列色谱性仪供参考，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果，则可使用这些等效的产品。液相色谱-串联质谱测定
按照61液相色谱-串联质谱条件测定样品和混合保准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量。在上述色谱条件下沙丁胺醇、特布他林、案曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、浪代克仑特罗、溴布特双、苯氧丙酚胺，马布特罗，马宽特罗和尚位素内标沙丁胺醇-D3、克仑特罗-19的参考保留时间分别GB/T22286—2008
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quE-ei-aC-eC-ae-Craac-CEC-Neca-nKANiKAa为 6. 16 min,6. 24 min.7. 01 min,11. 07 min,14. 5 min,15. 66 min,16. 52 zin,17, 47 min,18. 72 min.18.77inin、23.11min、6.10 min和 15.60 min,标准溶液的液相色谱串联质谱图参见附录A中图A.1。7.3液相色谱-串联质谱确证
按照7.1液柜色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液：如果检出的质量色谱峰保留时间与标难样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准辫谱图相比，误差不超过表3规定的范国，则可判定样品中存在对应的被测物。表 3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度
允许的相对误差
7.4空白试验
>20%50%
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8计算
210%~20%
8.1按式(1)计算样品中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、寒布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特岁、苯氧内龄胺、马布特罗、马资特罗或漠代克仑特罗残留量。计算结果需扣除空值沙丁胺啦！-13作为沙丁胺醇、特布他标和乘克多巴胺的内标物质，克仑特罗-1作为其余白-受体邀动剂的内标物质：
武中：
X=eXeXAXANXV
C XA. XA,Xn
-样品中被测物残留量，单位为微克每干克(ug/kg)；...(1)
沙丁胺等，特布他林、塞星特岁、等布特罗、莱克多巴胺、克伦特罗、澳布特罗，苯氧丙爵胺，马布特罗、马特罗或溴代克仑特罗标准工作溶液的液度，单位为微克每升（门)：s
标准工作溶液中内标物的液度，单位为微克每升（u/L）；样液中内标物的浓度，单位为微克每升(/L）沙丁喷醇，特布他林，塞曼特罗、塞布特罗，莱克多巴胺、克仑特罗、漠布特罗，苯氧芮蔽胺，马布特罗、马贵特罗或澳代克论特罗标准工作溶液的睦面积：A一一样液中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗，塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺，马布特罗、马责特哭或溴代克仑特罗的峰面积；标准工作溶浓中内标物的峰面积；A
A,--样液中内标物的峰面积；
V样品定容体积，单位为毫升（ml）：样品称样量，单位为克（g）
8. 2计算结果小于本标准检出限 0. 5 μg/kg时:视为未检出,9精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%ion
100号
附录A
（资料性附录）
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11种β-受体激动剂标准物质的多反应监测(MRM)色谱图6.1n
f..s.iSalbutainoi L?
SalbLtamol
Tarma me
C'iralerl
ACinmbuierol
t'lenlhuterol
Racloranm
[1.>icntuterol-29
Hinehlorhjieul
Bronbulerol
.........ir.rn
lsuxsuprine
Mahulerol
Mapenierol
18.00--20.0n
2.M.RM orHClianmelsES+
246746
2.NiRMafBhanng
2:MRMat&Chunele ES+
4:Rot8ChanuslES
2MRMorBChsEt
4:MRM oraihanuels ES-
S:MRMaTAClanek1St
S.MRMoraChe
iRMorsChanoFio
S:vik.aFhannels F
22.g.p2c6o
沙丁胺醇、特布孢林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马宽特罗和溴代克仑特罗标准物质的多反应监测(MRM)色谱图5
GB/T 22286-2008
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